Inddrypning og fikseringsmetoder Nyttige i muselunge Cancer Research

Summary

Målet med dette papir er at beskrive enkle metoder, der i høj grad vil hjælpe i setup og analyse af muselunger med lungekræft eller andre patologier. Vi præsenterer 3 protokoller enkelt og pålideligt at udføre lunge instillationer, fiksering og lunge volumen målinger.

Abstract

Evnen til at indpode levende midler, celler eller kemikalier direkte i lungerne uden at beskadige eller dræbe musene er et vigtigt redskab i lungekræft forskning. Selv om der er en række metoder, der er blevet offentliggjort viser, hvordan intubationstid mus for lungefunktionen målinger, ingen er uden potentielle problemer for hurtig tracheal instillation i store kohorter af mus. I nærværende papir, er en enkel og hurtig metode beskrevet som muliggør en investigator at udføre sådanne instillationer på en effektiv måde. Metoden kræver ingen specielle værktøjer eller belysning og kan læres med meget lidt praksis. Det indebærer at bedøve en mus, hvilket gør et lille snit i nakken for at visualisere luftrøret, og derefter indsætte en intravenøs kateter direkte. Den lille snit er lukkede hurtigt med vævet klæbemiddel og musene fik lov til at komme sig. En dygtig studerende eller tekniker kan gøre instillationer til en gennemsnitlig hastighed på 2 min / mus. Når tHan cancer er etableret, er der ofte behov for en kvalitativ analyse af histologiske lungerne. Traditionelt patologer normalt ikke gider at standardisere lunge inflation under fiksering og analyser er ofte baseret på et pointsystem, der kan være ganske subjektivt. Mens dette engang kan være tilstrækkeligt tilstrækkelige til grove skøn over størrelsen af ​​en lunge tumor, enhver ordentlig stereologiske kvantificering af lungestrukturen eller celler kræver en reproducerbar fikseringsproceduren og efterfølgende måling lungevolumen. Her beskriver vi enkle pålidelige procedurer for både fastsættelse lungerne under tryk og derefter nøjagtig måling lunge volumen fast. Det eneste krav er et laboratorium balance, er nøjagtig over et område på 1 mg-300 g. Procedurerne præsenteres her kunne derfor i høj grad forbedre evnen til at skabe, behandle og analysere lungekræft i mus.

Introduction

For en række årsager, lungekræft ikke har været meget undersøgt i mus. En af grundene til dette er, at er meget vanskelig adgang til lungerne in vivo og kvantitativ analyse af faste lunger er ikke almindeligt gjort. Beskrevet i dette papir metoder er designet til at afhjælpe denne situation. Målene heri er at beskrive simple metoder, der i høj grad vil hjælpe til opsætning og analyse af muselunger med lungecancer eller andre patologier. Mens ingen af ​​disse metoder er helt ny, er de ikke blevet præsenteret sammen som enkeltstående metoder i den forenklede måde som beskrevet her.

Der har været en række af manuskripter, der har beskrevet fremgangsmåder til intubation af muselunge primært med det formål at gøre gentagen lungefunktion eller bronchoalveolær udskylning i individuelle mus i langsgående undersøgelser. Siden den oprindelige papir, har der været flere andre papirer, der har beskrevet forskellige tilgange til musene intubation ^{1 -9.} Mens alle disse metoder kan anvendes med succes, de normalt kræver betydelig træning, og er ofte ikke uden en nontrivial fejlrate. Desuden, med henblik på at udføre målinger af lungefunktionen, kanylen skal passe luftrøret tæt nok til, at der ikke er nogen utætheder. , En anden praktisk anvendelse til intubation er imidlertid at levere specifikke midler (cancerceller eller andre fornærmelser) eller terapeutiske lægemidler direkte til lungerne. En sådan procedure kræver ikke en tætsluttende kanyle eller nogen sofistikeret lungefunktion udstyr. Det hidtil ukendte træk ved denne fremgangsmåde er vist her involverer et mindre kirurgisk procedure, der gør det muligt for intubation uden mulighed for kanylen ind i spiserøret. Denne enkle tilgang gør det muligt vellykket intubation med relativt lidt uddannelse eller erfaring. Så mange som 30 mus / h kan behandles ved hjælp af denne metode med en fejlrate nærmer sig nul.

Når than mus er klar til at blive aflivet, tilskadekomne eller kræft lunger kan derefter fjernes til histologisk og patologisk analyse. , Med henblik på korrekt kvantificere eventuelle histologiske variabler til sammenligning med andre lunger, er det vigtigt at standardisere de fikseringen og ordentligt kvantificere lungevolumen ¹⁰ fast. Dette papir beskriver detaljeret de enkle procedurer, som giver standardiserede fikseringen samt en måde at måle lungevolumen fast. Lydstyrken er en væsentlig parameter i kvantificeringen af histologi, da, kan måles ¹⁰ uden en sådan volumen bestemmelse kun relative tætheder. Når lungevolumen er imidlertid kendt, kan derefter kvantificeres absolutte målinger af celler og andre strukturelle målinger i lungen.

Protocol

Følgende protokol beskriver et system, der fungerer godt i 20-35 g mus. Fremgangsmåden kunne nemt kunne tilpasses til større eller mindre mus ved blot at ændre kateteret størrelse. Alle dyr protokoller blev godkendt af Johns Hopkins University Animal Care og brug Udvalg. 1. Lung Instillation Vælg en kommerciel én-tommer lange 20 g intravenøs kanyle bruge til intubation. Ændre kateterspidsen manuelt at bøje det til at generere en let krumning ved spidsen, som <s…

Representative Results

Proceduren beskriver i den første protokol ikke i sig selv føre til nogen generelle resultater. Det beskriver kun en meget pålidelig middel til at bibringe stoffer direkte ind i luftrøret. Figur 7 viser et eksempel på en lunge, hvor trypanblåt blev indpodet med den her beskrevne fremgangsmåde. Der er udbredt fordeling af farvestoffet, svarende til hvad der er blevet observeret med andre farvestoffer eller sporstoffer gives direkte ind i trachea eller mus 11,12. Vi har også anvendt den…

Discussion

De her beskrevne procedurer har flere fordele. Først det nødvendige udstyr er enkel og billig. For det andet kan intubation hurtigt gøres med få fejl. For det tredje, evnen til at løse lungerne ved et konstant tryk, og derefter måle lungevolumen fast tillader korrekt kvantificering af strukturer eller celler i lungen ^10.

En mulig nedadrettede til intubation er den mindre operation. Dette kan begrænse muligheden for at gentage proceduren, hvis en ^2. instillation e…

Materials

Laboratory Balance	Ohaus	Adventurer Pro Model AV 313	Other balances can be used if they have a range of 1 – 300g
20 g Luer intravenous catheter	Insylte		Several other possible vendors, e.g., Jelco Optiva
500 mL laboratory bottle	Various		Several other possible vendors