माउस फेफड़ों के कैंसर रिसर्च में उपयोगी टपकाना और निर्धारण के तरीकों
Summary
इस पत्र के लक्ष्य बहुत फेफड़ों के कैंसर या अन्य विकृतियों के साथ सेटअप और माउस फेफड़ों के विश्लेषण में सहायता करेगा कि सरल विधियों का वर्णन करने के लिए है। हम तो बस और मज़बूती से फेफड़ों instillations, निर्धारण, और फेफड़ों की मात्रा माप बाहर ले जाने के लिए 3 प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।
Abstract
घायल करने या चूहों को मारने के बिना सीधे फेफड़ों में रहते एजेंटों, सेल, या रसायन पैदा करने की क्षमता फेफड़ों के कैंसर अनुसंधान के क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण उपकरण है। फेफड़े के कार्य के मापन के लिए चूहों intubate के लिए कैसे दिखा प्रकाशित किया गया है कि तरीकों में से एक नंबर रहे हैं हालांकि, कोई भी चूहों की बड़ी साथियों में तेजी से सांस की नली टपकाना के लिए संभावित समस्याओं के बिना कर रहे हैं। वर्तमान में कागज, एक सरल और त्वरित तरीका एक कुशल तरीके से इस तरह के instillations बाहर ले जाने के लिए एक अन्वेषक सक्षम बनाता है कि वर्णित है। विधि किसी भी विशेष उपकरण या प्रकाश की आवश्यकता नहीं है और बहुत कम अभ्यास के साथ सीखा जा सकता है। यह एक माउस anesthetizing श्वासनली कल्पना करने के लिए गर्दन में एक छोटा सा चीरा, और फिर सीधे एक अंतःशिरा कैथेटर डालने शामिल है। छोटा सा चीरा जल्दी ऊतक चिपकने के साथ बंद कर दिया है, और चूहों को ठीक करने के लिए अनुमति दी जाती है। एक कुशल छात्र या तकनीशियन 2 मिनट / माउस की औसत दर से instillations कर सकते हैं। एक बार टीकैंसर की स्थापना की है वह फेफड़ों के मात्रात्मक histologic विश्लेषण के लिए एक की जरूरत है वहाँ अक्सर है। परंपरागत रूप से निर्धारण के दौरान फेफड़ों मुद्रास्फीति के मानकीकरण के लिए परेशान नहीं करते आमतौर पर पैथोलॉजिस्ट, और विश्लेषण अक्सर काफी व्यक्तिपरक हो सकता है कि एक स्कोरिंग प्रणाली पर आधारित हैं। इस समय एक फेफड़ों के ट्यूमर के आकार के सकल अनुमान के लिए पर्याप्त रूप से पर्याप्त हो सकता है, फेफड़ों की संरचना या कोशिकाओं के किसी भी उचित stereological मात्रा का ठहराव एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य निर्धारण प्रक्रिया और बाद में फेफड़ों की मात्रा माप की आवश्यकता है। यहाँ हम दोनों के दबाव में फेफड़ों फिक्सिंग और फिर सही ढंग से तय फेफड़ों की मात्रा को मापने के लिए सरल, विश्वसनीय प्रक्रियाओं का वर्णन। केवल आवश्यकता है 1 मिलीग्राम-300 ग्राम की एक सीमा से अधिक सटीक है कि एक प्रयोगशाला संतुलन है। इस प्रकार यहाँ प्रस्तुत प्रक्रियाओं बहुत चूहों में फेफड़ों के कैंसर, बनाने का इलाज है, और विश्लेषण करने की क्षमता में सुधार सकता है।
Introduction
कारणों की एक संख्या के लिए, फेफड़ों के कैंसर के लिए व्यापक रूप से माउस में अध्ययन नहीं किया गया। इसका एक कारण यह फेफड़ों के लिए उपयोग विवो में बहुत मुश्किल है, और तय फेफड़ों के मात्रात्मक विश्लेषण आमतौर पर ऐसा नहीं किया जाता है। इस पत्र में वर्णित विधि इस स्थिति में सुधार करने के लिए तैयार कर रहे हैं। लक्ष्यों के साथ साथ बहुत फेफड़ों के कैंसर या अन्य विकृतियों के साथ सेटअप और माउस फेफड़ों के विश्लेषण में सहायता करेगा कि सरल विधियों का वर्णन करने के लिए कर रहे हैं। इन तरीकों में से कोई भी पूरी तरह से नए हैं, वे यहाँ वर्णित के रूप में सरल ढंग से खड़े अकेले तरीकों के रूप में एक साथ प्रस्तुत नहीं किया गया है।
मुख्य रूप से अनुदैर्ध्य अध्ययन में व्यक्तिगत चूहों में दोहराने फेफड़े के कार्य या ब्रोन्कोएल्वियोलर पानी से धोना करने का उद्देश्य के लिए माउस फेफड़ों की इंटुबैषेण के लिए तरीके का वर्णन किया है कि पांडुलिपियों के एक नंबर दिया गया है। कि मूल कागज के बाद से, समझौता ज्ञापनों के लिए अलग अलग दृष्टिकोण का वर्णन किया है कि कई अन्य कागजात नहीं किया गया हैई इंटुबैषेण 1 -9। इन सभी तरीकों का सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया जा सकता है, वे आम तौर पर काफी प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है, और एक nontrivial विफलता दर के बिना अक्सर नहीं हैं। इसके अलावा, फेफड़े के कार्य माप बाहर ले जाने के क्रम में, प्रवेशनी कोई हवा रिसाव नहीं है कि इतना कसकर पर्याप्त श्वासनली फिट करने की जरूरत है। हालांकि, इंटुबैषेण के लिए एक और व्यावहारिक उपयोग फेफड़ों को सीधे विशेष एजेंट (कैंसर कोशिकाओं या अन्य अपमान) या चिकित्सीय दवाओं देने के लिए है। इस तरह की एक प्रक्रिया एक टाइट फिटिंग प्रवेशनी और न ही किसी भी परिष्कृत फेफड़े के कार्य उपकरण की आवश्यकता नहीं है। यहाँ दिखाया गया है कि इस विधि के उपन्यास सुविधा घेघा में प्रवेश प्रवेशनी की किसी भी संभावना के बिना इंटुबैषेण की अनुमति देता है कि एक छोटी सी शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया शामिल है। यह सरल दृष्टिकोण अपेक्षाकृत छोटे से प्रशिक्षण या अनुभव के साथ सफल इंटुबैषेण सक्षम बनाता है। के रूप में कई के रूप में 30 चूहों / घंटा शून्य के करीब पहुंच एक असफलता की दर के साथ इस दृष्टिकोण का उपयोग कर इलाज किया जा सकता है।
एक बार टीवह चूहों घायल या कैंसर फेफड़ों तो histologic और वैकृत विश्लेषण के लिए हटाया जा सकता है, बलिदान करने के लिए तैयार हैं। हालांकि, ठीक से अन्य फेफड़ों के साथ तुलना के लिए किसी भी histologic चर यों करने के लिए, यह निर्धारण प्रक्रियाओं के मानकीकरण और ठीक से तय फेफड़ों की मात्रा 10 यों के लिए आवश्यक है। इस पत्र में विस्तार से मानकीकृत निर्धारण प्रक्रियाओं के साथ ही तय हो गई फेफड़ों की मात्रा को मापने के लिए एक रास्ता है कि अनुमति सरल प्रक्रियाओं का वर्णन है। इतनी मात्रा दृढ़ संकल्प के बिना, केवल रिश्तेदार घनत्व 10 से मापा जा सकता है, क्योंकि मात्रा ऊतक विज्ञान की मात्रा का ठहराव में एक आवश्यक मीट्रिक है। फेफड़ों की मात्रा में जाना जाता है, एक बार हालांकि, कोशिकाओं और फेफड़ों में अन्य संरचनात्मक माप का पूर्ण माप तो मात्रा निर्धारित किया जा सकता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ वर्णित प्रक्रियाओं कई फायदे हैं। सबसे पहले आवश्यक उपकरण सरल और सस्ती है। दूसरा, इंटुबैषेण जल्दी से कुछ त्रुटियों के साथ किया जा सकता है। तीसरा, तय फेफड़ों की मात्रा एक लगातार दबाव में फेफड़ों को ठ…
Materials
| Laboratory Balance | Ohaus | Adventurer Pro Model AV 313 | Other balances can be used if they have a range of 1 – 300g |
| 20 g Luer intravenous catheter | Insylte | Several other possible vendors, e.g., Jelco Optiva | |
| 500 mL laboratory bottle | Various | Several other possible vendors |
Referências
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. J Appl Physiol. 87, 2362-2365 (1999).
- Walters, D. M., Wills-Karp, M., Mitzner, W. Assessment of cellular profile and lung function with repeated bronchoalveolar lavage in individual mice. Physiol Genomics. 2, 29-36 (2000).
- Hamacher, J., et al. Microscopic wire guide-based orotracheal mouse intubation: description, evaluation and comparison with transillumination. Laboratory animals. 42, 222-230 (2008).
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory. 41, 128-135 (2007).
- Zhao, X., et al. A technique for retrograde intubation in mice. Lab animal. 35, 39-42 (2006).
- Rivera, B., Miller, S., Brown, E., Price, R. A novel method for endotracheal intubation of mice and rats used in imaging studies. Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 44, 52-55 (2005).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European review for medical and pharmacological sciences. 8, 103-106 (2004).
- Vergari, A., Polito, A., Musumeci, M., Palazzesi, S., Marano, G. Video-assisted orotracheal intubation in mice. Laboratory animals. 37, 204-206 (2003).
- Hastings, R. H., Summers-Torres, D. Direct Laryngoscopy in Mice. Contemporary topics in laboratory animal science / American Association for Laboratory Animal Science. 38, 33-35 (1999).
- Hsia, C. C., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure. Am J Respir Crit Care Med. 181, 394-418 (2010).
- Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy. J Appl Physiol. 90, 1111-1117 (2001).
- Cai, Y., Kimura, S. Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung. Journal of visualized experiments : JoVE. , e50601 (2013).
- Das, S., Macdonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. A simple method of mouse lung intubation. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2013).
- MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. An improved simple method of mouse lung intubation. J Appl Physiol. 106, 984-987 (2009).
- Lum, H., Mitzner, W. Effects of 10% formalin fixation on fixed lung volume and lung tissue shrinkage. American Reveiw of Respiratory Diseases. 132, 1078-1083 (1985).
- Bishai, J., Fields, M. J., Mitzner, W. Comparison of Mouse Lung Volumes Inflated with Air and Instilled Fixatives. Proc Am Thorac Soc. 3, A549 (2006).
- Mitzner, W., Brown, R., Lee, W. In vivo measurement of lung volumes in mice. Physiol Genomics. 4, 215-221 (2001).
