マウス肺癌研究における有用な点滴や固定方法

Summary

本稿の目的は、大幅に肺癌または他の病状とのセットアップとマウスの肺の分析を支援する単純な方法を記述することです。我々は、簡単かつ確実に肺の点滴注入、固定、および肺容量の測定を行うために3プロトコルを提示します。

Abstract

負傷またはマウスを殺すことなく、直接肺に生き薬、細胞、または化学物質を植え付けるする能力は、肺癌研究における重要なツールです。肺機能の測定のためにマウスを挿管する方法を示す公開されている多数の方法がありますが、どれもマウスの大規模コホートにおける急速な気管点滴注入のための潜在的な問題もなくはありません。本研究では、簡単かつ迅速な方法は、効率的な方法でそのような点滴注入を実施する研究者を可能にすることが記載されています。この方法は、特殊な工具や照明を必要とせず、非常に少し練習して学ぶことができます。これは、マウスを麻酔気管を可視化するために、首に小さな切開し、その後、直接静脈カテーテルを挿入することを含みます。小さな切開を迅速に組織接着剤で閉じ、マウスを回復させます。熟練した学生や技術者が2分/マウスの平均速度で点滴を行うことができます。 Tたら癌が確立されている彼、肺の定量的な組織学的分析の必要性がしばしばあります。伝統的に病理学者は、通常、固定時に肺膨張を標準化するために気にしない、との分析は、多くの場合、非常に主観的スコアリングシステムに基づいています。これはいつか肺腫瘍の大きさの粗推定値のために十分に適切であり得るが、肺の構造または細胞の任意の適切な立体定量化は、再現固定手順とそれに続く肺容量の測定を必要とします。ここでは、両方が圧力下で肺を固定して、正確に固定された肺容量を測定するための簡単​​な信頼性のある手順について説明します。唯一の要件は、1 MG-300グラムの範囲に亘って正確である実験室のバランスです。ので、ここで提示された手順が大幅にマウスで肺癌を作成、治療、および分析する能力を向上させることができます。

Introduction

多くの理由により、肺癌は、マウスにおいて広く研究されていません。その理由の一つは、肺へのアクセスは、インビボで非常に困難であり、固定肺の定量分析は、一般的に行われないということです。このホワイトペーパーで説明する方法は、この状況を改善するように設計されています。目標は、本明細書に大きく肺癌または他の病理との設定、マウスの肺の分析を補助する単純な方法を記載することです。これらのアプローチのいずれも、全く新しいませんが、彼らはここで説明するように簡略化して、スタンドアロンの方法として一緒に提示されていません。

主に縦方向の研究における個々のマウスで繰り返し肺機能や気管支肺胞洗浄を行うことを目的に、マウスの肺の挿管のための方法を記載している原稿の数がありました。そのオリジナルの論文以来、覚書に異なるアプローチが記載されている他のいくつかの論文がありましたE挿管^{1 -9。}これらの方法の全てが正常に使用することができるが、それらは通常、かなりの訓練を必要とし、重要な故障率なしに、多くの場合ではありません。加えて、肺機能測定を行うために、カニューレには、空気漏れがないようにしっかりと十分な気管にフィットする必要があります。しかし、挿管のための別の実用化は、肺に直接特定の薬剤（癌細胞または他の傷害）、または治療薬を送達することです。このような手順は、タイトなフィッティングカニューレも任意の洗練された肺機能の機器を必要としません。ここに示されているこの方法の新規な特徴は、食道に入るカニューレのいずれかの可能性なしに挿管を可能にする簡単な外科的処置を必要とします。この単純なアプローチは比較的少ないトレーニングや経験を持つ成功した挿管を可能にします。以下のような多くの30匹のマウス/時間がゼロに近づく故障率と、この方法を用いて治療することができます。

Tたら彼のマウスは、負傷または癌性肺が、その後組織学的および病理学的分析のために取り外すことができ、犠牲にする準備ができています。しかし、適切に他の肺との比較のために任意の組織学的変数を定量化するためには、固定手順を標準化し、適切に固定された肺容積^{10を定量化}することが不可欠です。本稿では詳細に標準化された固定手順と同様に固定肺容量を測定する方法を可能にする簡単な手順について説明します。そのようなボリューム決意することなく、唯一の相対密度が^10を測定することができるので、体積は、組織学の定量化に不可欠な測定基準です。肺気量がわかれば、しかしながら、肺の細胞、および他の構造の測定値の絶対的な測定値は、その後、定量することができます。

Protocol

以下のプロトコルは、20〜35グラムのマウスではうまく機能システムが記載されています。この方法は、容易に、単に、カテーテルのサイズを変更することによって、より大きな又はより小さなマウスに適応することができました。全ての動物プロトコルは、ジョンズホプキンス大学動物実験委員会によって承認されました。 1.肺点滴注入挿管に使用する商業1イ?…

Representative Results

手順は、それ自体で任意の一般的な結果にはならない最初のプロトコルで説明します。それが唯一の直接気管内に物質を植え付けるために非常に信頼性の高い手段が記載されている。 図7は、トリパンブルーは、ここで説明する方法で点眼した肺の一例を示しています。気管またはマウス11,12に直接与えられた他の染料またはトレーサーで見てきたものに類似した色素の?…

Discussion

ここで説明する手順は、いくつかの利点を有します。まず必要な機器は、簡単で安価です。第二に、挿管はすぐにいくつかのエラーで行うことができます。第三に、固定された肺容量を一定の圧力で肺を固定した後、測定する能力は、肺¹⁰内の構造や細胞の適切な定量化を可能にします。

挿管に対する1つの可能な欠点は、簡単な手術です。これは、2 ^{番目の</…}

Materials

Laboratory Balance	Ohaus	Adventurer Pro Model AV 313	Other balances can be used if they have a range of 1 – 300g
20 g Luer intravenous catheter	Insylte		Several other possible vendors, e.g., Jelco Optiva
500 mL laboratory bottle	Various		Several other possible vendors