Advancements in biomaterial technologies enable the development of three-dimensional multi-cell-type constructs. We have developed electrospinning protocols to produce three individual scaffolds to culture the main structural cells of the airway to provide a 3D in vitro model of the airway bronchiole wall.
Electrospinning is a highly adaptable method producing porous 3D fibrous scaffolds that can be exploited in in vitro cell culture. Alterations to intrinsic parameters within the process allow a high degree of control over scaffold characteristics including fiber diameter, alignment and porosity. By developing scaffolds with similar dimensions and topographies to organ- or tissue-specific extracellular matrices (ECM), micro-environments representative to those that cells are exposed to in situ can be created.
The airway bronchiole wall, comprised of three main micro-environments, was selected as a model tissue. Using decellularized airway ECM as a guide, we electrospun the non-degradable polymer, polyethylene terephthalate (PET), by three different protocols to produce three individual electrospun scaffolds optimized for epithelial, fibroblast or smooth muscle cell-culture. Using a commercially available bioreactor system, we stably co-cultured the three cell-types to provide an in vitro model of the airway wall over an extended time period.
This model highlights the potential for such methods being employed in in vitro diagnostic studies investigating important inter-cellular cross-talk mechanisms or assessing novel pharmaceutical targets, by providing a relevant platform to allow the culture of fully differentiated adult cells within 3D, tissue-specific environments.
पुनर्योजी चिकित्सा और ऊतक इंजीनियरिंग के क्षेत्र में तेजी से सांस की नली और गुर्दे उत्थान दो उल्लेखनीय हाल की उपलब्धियों के क्षेत्र में सफलताओं के साथ, आगे बढ़ रहा है। ऊतक इंजीनियरिंग में विकसित biomaterials के कम विशेष प्रयोगशालाओं के लिए इस तरह के प्रोटोकॉल का हस्तांतरण करने के लिए अवसरों के साथ, और अधिक सुलभ हो रहे हैं। Biomaterials के उपयोग में वृद्धि के माध्यम से लाभ प्राप्त करने के लिए primed एक क्षेत्र विट्रो निदान में है।
इन विट्रो अध्ययन में एकल कोशिका-प्रकार के भीतर अंतर सेलुलर संकेत दे रास्ते की जांच के लिए एक महत्वपूर्ण मंच हैं, और कई रोग pathophysiologies अंतर्निहित तंत्र को चित्रित मदद की है। इन अध्ययनों से आम तौर पर टिशू कल्चर प्लास्टिक (टीसीपी) पर एक monolayer के रूप में संवर्धित किया जा रहा है एक एकल कोशिका-प्रकार पर निर्भर करते हैं; अब तक कम लोचदार और झरझरा तीन आयामी (3 डी) पर्यावरण कोशिकाओं की तुलना में एक दो आयामी (2 डी) कठोर सतह एक ऊतक या अंग के भीतर करने के लिए सामने आ रहे हैं। पशु मॉडलों पारंपरिक रूप से ई गया हैभी पूरे ऊतक करने के लिए अनुवाद के लिए इन विट्रो में पाया प्रभाव पुष्टि करने के लिए mployed, और यह भी मानव रोगों की जांच के लिए पूर्व नैदानिक प्लेटफॉर्म के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। हालांकि, अंतर-प्रजाति मतभेद मानव रोग के बारे में हमारी समझ में पशु मॉडल पर इस निर्भरता को कमजोर -। उदाहरण के लिए, फेफड़ों के रोग अस्थमा की ज्यादा समझ छोटे airway के चिकनी पेशी बंडल के मस्तूल सेल घुसपैठ का सबूत है, या जानवर के भीतर सहज रोग के विकास के लिए क्षमता सहित मानव हालत और इस मॉडल के बीच निहित मतभेद के बावजूद एक माउस मॉडल पर आधारित है 3,4 मॉडल। ब्रिटेन और अन्य देशों में प्रोत्साहित किया जा रहा पशु प्रयोगों में "प्रतिस्थापन, शोधन, और कमी" के "3Rs" मानक के साथ पशु मॉडल के उपयोग के संबंध नैतिक आधार भी हैं।
एक आकर्षक विकल्प इन विट्रो बनाने संरचना में मानव ऊतकों की आवृत्ति होगाएक एकल इकाई में वयस्क मानव प्रकार की कोशिकाओं के बीच सहकारी प्रकृति की जांच करने के लिए। प्रकोष्ठों एक अद्वितीय सूक्ष्म वातावरण के भीतर प्रत्येक, ऊतक के भीतर 3 डी बहु सेलुलर संरचनाओं में मौजूद हैं। टीसीपी पर कोशिकाओं के संवर्धन केवल इस माहौल को दोहराने, या बहु-सेल संस्कृति के लिए क्षमता प्रदान करने में असमर्थ सेल monolayers, की संस्कृति की अनुमति देता है। बायोमैटिरियल्स उन्नति सेल संस्कृति के लिए प्राकृतिक और सिंथेटिक 3 डी प्लेटफार्मों दोनों विकसित करने का अवसर प्रदान करता है। स्टेम कोशिकाओं 1 सहित अन्य सेल प्रकार के साथ recellularized जब decellularized ईसीएम ऊतक सीमित है और काफी हद तक गैर मानव मूल के की उपलब्धता के साथ, फिर भी इस तरह के प्रोटोकॉल जटिल और समय लेने वाली हो सकती है, 3 डी सेल संस्कृति के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। अन्य प्रोटोकॉल nanoimprinting, ईसीएम बयान, सेल चादर प्रौद्योगिकी, या electrospinning रूप में इस तरह बनाया सेलुलर वातावरण पर अधिक नियंत्रण अनुमति देते हैं। Electrospinning नैनोमीटर से माइक्रोमीटर से लेकर व्यास, आर के साथ फाइबर की गैर बुना 3 डी झरझरा मैट बनाता हैप्राकृतिक ईसीएम आयाम eplicating। Electrospun scaffolds के तेजी से 3 डी सेल संवर्धन प्लेटफॉर्म के रूप में नियोजित किया जा रहा -। Electrospinning मापदंडों के हेरफेर में इस तरह के छेद के आकार, फाइबर व्यास, स्थलाकृति और संरेखण, और सतह के रसायन शास्त्र के रूप में पाड़ विशेषताओं पर जटिल नियंत्रण की अनुमति देता है। कोशिकाओं अलगाव में सुसंस्कृत थे जब इस तरह के मापदंडों का परिवर्तन, सीधे कोशिका आसंजन और विकास को प्रभावित करने के लिए दिखाया गया है।
ये लाभ एक मॉडल के 3 डी ऊतक संरचना के रूप में वायु-मार्ग bronchiole का उपयोग करते हुए, एक भी 3 डी ऊतक निर्माण के रूप में अनेक प्रकार की कोशिकाओं के संवर्धन की अनुमति के लिए वर्तमान अध्ययन में शोषण किया गया है। bronchiole दीवार के तीन मुख्य क्षेत्रों (चित्रा 1) के होते हैं। वायु-मार्ग उपकला कोशिकाओं बाहरी वातावरण के लिए एक महत्वपूर्ण बाधा प्रदान, हवा तरल इंटरफेस (अली) में बैठने के लिए जहां म्यूकोसा है। वे जालीदार तहखाने झिल्ली (RBM) पर रहते हैं, एक कसकर कॉम्पैक्ट ईसीएम मुख्य रूप से collag के शामिलएन चतुर्थ, perlecans, और laminins। उप-श्लैष्मिक परत सीधे म्यूकोसा, fibroblasts, myofibroblasts सहित और रोग की शर्तों के तहत ल्यूकोसाइट्स घुसपैठ अनेक प्रकार की कोशिकाओं के शामिल एक और अधिक असुरक्षित क्षेत्र के नीचे पाया जाता है। अंत में चिकनी पेशी बंडलों एक चक्करदार फैशन में airway के आसपास लपेटो, और airway चिकनी मांसपेशियों (एएसएम) की गठबंधन पत्रक के शामिल हैं। यह airway के स्वर को नियंत्रित करता है कि चिकनी पेशी के सापेक्ष सिकुड़ा राज्य है। फेफड़े प्रणाली के भीतर electrospun scaffolds के रोजगार हाल ही में जब तक पुनर्योजी प्रयोजनों के लिए सीमित कर दिया गया था; के साथ एक electrospun सांस की नली प्रतिस्थापन सफलतापूर्वक प्रत्यारोपित किया जा रहा है। सफल जबकि, इस तरह के उपचार की संख्या में सीमित कर रहे हैं, और वजह से ऊतक के समारोह के रिश्तेदार सरल प्रकृति के श्वासनली पर ध्यान केंद्रित कर रहे हैं। इन विट्रो निदान के लिए किया airway के मॉडल का सीमित उदाहरण मौजूद हैं, और मुख्य रूप से चिकनी मांसपेशियों में संकुचन माप पर ध्यान केंद्रित कर रहे हैं। गैर विषैले और कोईएन-सड़ सकने बहुलक polyethylene terephthalate (पीईटी) पहले electrospun किया गया है, और उपयुक्त हो भी उन्हें ("शेल्फ" में इस्तेमाल किया जा करने के लिए) की अनुमति के बिना अपमानजनक लंबी अवधि के लिए भंडारित किया जा सकता है उत्पादन मचान सुनिश्चित करने के लिए वर्तमान अध्ययन में कार्यरत था, और विस्तारित समय अवधि में स्थिर सेल संस्कृति के लिए। हमारे समूह से पिछले अध्ययनों से एक बुनियादी electrospinning प्रोटोकॉल के तीन रूपों को रोजगार, तीन अलग-अलग पीईटी electrospun scaffolds के संवर्धन के लिए airway उपकला, तंतुप्रसू के लिए इष्टतम topographies, और अलगाव 21,22 में चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं और airway के coculture प्रदान करने के लिए उत्पादन किया जा सकता है कि पता चला है उपकला और fibroblast कोशिकाओं 22। फाइबर व्यास बहुत उपकला कार्यक्षमता 22 को प्रभावित करने के लिए मिला है, और फाइबर संरेखण चिकनी पेशी 21 की गठबंधन चादरों की पीढ़ी की अनुमति दी थी। इन अध्ययनों से स्थिर शर्तों के तहत एक दूसरे से स्वतंत्र प्रदर्शन किया गया। वर्तमान अध्ययन में, इन विभिन्नपूरी तरह से विभेदित वयस्क मानव कोशिकाओं से युक्त NT scaffolds के airway, अंतर-सेलुलर प्रतिक्रियाओं की जांच के लिए इन विट्रो मॉडल में एक physiologically प्रासंगिक उपलब्ध कराने, airway दीवार के एक 3 डी खंड के रूप में एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध बायोरिएक्टर में अली से कम एक सप्ताह के लिए cocultured किया गया है। इस प्रोटोकॉल एक मॉडल प्रणाली के रूप में वायु-मार्ग bronchiole उपयोग कर रहा है जबकि, यह अन्य अंगों से श्लैष्मिक इकाइयों की 3 डी coculture के लिए एक मंच के रूप में रूपांतरित किया जा सकता है।
प्राकृतिक ईसीएम के लिए तुलनीय संरचनात्मक गुणों के साथ पोलीमेरिक तंतुओं electrospin करने की क्षमता, इन वातावरण विश्राम करने के लिए electrospun जा रहा है कई प्राकृतिक या सिंथेटिक पॉलिमर, या बहुलक मिश्रणों के लिए प्रेरित किया। सब कर सकते हैं प्रभाव पाड़ विशेषताओं (बहुलक विकल्प है, बहुलक एकाग्रता, विलायक, सुई टिप दूरी और तापमान सहित) प्रक्रिया मापदंडों का हेरफेर; हालांकि कुछ मानकों, दूसरों के 25 की तुलना में पाड़ गुणों पर अधिक से अधिक प्रभाव हो सकता है। पीईटी फाइबर व्यास को संशोधित करते हैं, तो हम इस्तेमाल बहुलक की एकाग्रता, बहुलक समाधान electrospun था, जिस पर दर, और सुई व्यास होने के लिए मुख्य मापदंडों पाया। गठबंधन तंतुओं electrospinning जब मुख्य मापदंडों (एक घूर्णन खराद का धुरा) का इस्तेमाल किया संग्रह विधि, और जिस गति से खराद का धुरा घूमता रहे हैं। 60 rpm के लिए खराद का धुरा गति को कम करने के माध्यम से, हम उत्पादन बेतरतीब ढंग से गठबंधन scaffolds के अधिक से अधिक पाड़ यूनी दिखाया पायाformity एक फ्लैट कलेक्टर की थाली पर electrospinning की तुलना में।
decellularized airway के ऊतक की विशेषताओं प्रत्येक वायु-मार्ग सेल प्रकार की संस्कृति के लिए विकसित विभिन्न पाड़ topographies के लिए मार्गदर्शन प्रदान करने के लिए विश्लेषण किया गया। Electrospun nanofibers सेलुलर आंदोलन को प्रतिबंधित करने, whilst वृद्धि हुई मेटाबोलाइट प्रसार के लिए अनुमति देता है कि छोटे से छेद के आकार, लेकिन उच्च समग्र सरंध्रता के कारण तहखाने झिल्ली संरचनाओं को दोहराने के लिए एक आकर्षक पाड़ हैं। 9 electrospinning मापदंडों के अनुकूलन नदीम, पीईटी सांद्रता और प्रवाह दरों की एक सीमा परीक्षण किया गया। सबसे पतला तंतुओं पहले से अन्य समूहों द्वारा इस्तेमाल के लिए एक 6% WT / खंड पीईटी समाधान है, का प्रयोग कर प्राप्त कर रहे थे। बहरहाल, उच्च beading के स्तर, और एकरूपता की कमी लगातार समस्याओं थे। बीड को दूर करने के आरंभिक प्रयास विभिन्न स्रोतों सतह तनाव कम करने के लिए समाधान के लिए, एक cationic surfactant, cetyltrimethylammonium ब्रोमाइड (CTAB) जोड़ने, और परीक्षण शामिलपीईटी की। surfactant के अलावा, लेकिन पूरी तरह से नहीं है, beading की मात्रा कम है। TFA के विलायक समाधान: पीईटी छर्रों का वाणिज्यिक सूत्रों के एक नंबर की कोशिश के बाद, खाना ग्रेड पेय की बोतल पीईटी पेय की बोतलों को काटने और डीसीएम में इन भंग करके, इस्तेमाल किया गया था। पीईटी स्रोत फाइबर एकरूपता में वृद्धि हुई है और फाइबर beading में कमी के परिणामस्वरूप के रूप में इस का उपयोग करना। WT / खंड 8% करने के लिए थोड़ा समाधान एकाग्रता बढ़ती है और (23g करने के लिए 18G) सुई व्यास को कम करके हम लगातार लगभग 250 एनएम के एक फाइबर व्यास के साथ दोष मुक्त nanofibers का उत्पादन किया। Electrospun nanofiber scaffolds के मुश्किल scaffolds के मार्गदर्शन से निपटने बनाने खराद का धुरा से संग्रह पर अत्यधिक इलेक्ट्रोस्टैटिक हो सकता है। इस कताई और उपयोग करने से पहले 70% आईएमएस में भिगोने के बाद एल्यूमीनियम पन्नी में scaffolds भंडारण के द्वारा सुधार किया गया। इस electrospinning प्रक्रिया से पाड़ पर छोड़ दिया अवशिष्ट electrostatic प्रभारी फैलने में मदद करने के लिए दिखाई दिया।
शीर्ष प्रदान करने के लिएधीरे बेतरतीब ढंग से गठबंधन nanofibers उत्पन्न किया गया एक कम एकाग्रता पीईटी समाधान electrospinning द्वारा: ographies airway दीवार के भीतर तीन मुख्य airway के प्रकार की कोशिकाओं के द्वारा सामना करना पड़ा व्यक्तिगत microenvironments के समान है, एक बुनियादी electrospinning प्रोटोकॉल इन प्रकार की कोशिकाओं के लिए तीन अद्वितीय scaffolds के निर्माण करने के लिए अनुकूलित किया गया था पर जो उपकला कोशिकाओं (RBM नकल उतार) वरीयता प्राप्त थे। एक तेज दर से एक उच्च एकाग्रता पीईटी समाधान electrospinning करके, बेतरतीब ढंग से गठबंधन microfibers (एक और अधिक असुरक्षित पाड़ उत्पादन), जो में fibroblasts (RBM नीचे तुरंत उप-श्लैष्मिक क्षेत्र नकल उतार) वरीयता प्राप्त थे उत्पन्न किया गया। खराद का धुरा गठबंधन nanofibers घूर्णन एक उच्च वेग पर एक कम एकाग्रता पीईटी समाधान electrospinning करके, फाइबर दिशा में केंद्रित चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं कोशिकाओं की चादरों गठबंधन, जो उत्पादन पर, उत्पादन किया गया था।
बढ़ी हुई फाइबर व्यास अधिक से अधिक सेल penetratio की इजाजत दी वृद्धि हुई छेद के आकार के लिए नेतृत्वएन मचान में और हां, एक सच्चे 3 डी वातावरण बनाने में मदद। Microfiber के मचान कोशिकाओं पाड़ के भीतर कई विमानों पर बसता है कि यह सुनिश्चित करने के लिए अध्ययन में fibroblasts की संस्कृति के लिए कार्यरत थे। 30% WT / खंड के लिए पीईटी एकाग्रता में वृद्धि करके, 2.5 माइक्रोन के एक औसत व्यास के साथ पीईटी फाइबर के उत्पादन किया गया था। ग्रेटर व्यास फाइबर (≈ 4 माइक्रोन) एक 35% WT / खंड पीईटी समाधान का उपयोग कर उत्पादन किया गया था, लेकिन पाड़ मोटाई एकरूपता खो गया था, और व्यक्तिगत फाइबर के बीच उच्च परिवर्तनशीलता स्पष्ट किया गया था। Microfiber पाड़ में pores (क्रमशः 1.43 माइक्रोन बनाम 10.45 माइक्रोन) nanofiber scaffolds में मापा जाता है उन लोगों की तुलना में 7 गुना अधिक थे, लेकिन कोशिकाओं की अभी भी स्थिर बोने सीमित सेलुलर पैठ प्रदान की है। इस गतिशील रूप से एक कक्षीय मिक्सर, पहले से प्रभावी होना दिखाया एक विधि का उपयोग कोशिकाओं बोने से सुधार हुआ है।
अति गठबंधन nanofiber scaffolds के एक 10% electrospinning द्वारा बनाया गया थाWT / खराद का धुरा पर वॉल्यूम पीईटी समाधान 2,000 rpm पर घूर्णन (≈ 440 मीटर · मिनट -1)। पीईटी एकाग्रता तंतुओं कम सांद्रता में प्रदर्शित कि एक अनियमित लहर की तरह आकृति विज्ञान को रोकने के लिए 8% से वृद्धि हुई थी। तंतुओं aligning एकाग्रता में वृद्धि हुई है, बावजूद (यादृच्छिक बनाम गठबंधन 216 एनएम बनाम 255 एनएम), औसत फाइबर व्यास कम कर दिया। वे सूख गए पहले बाहर तंतुओं ड्राइंग खराद का धुरा के उच्च गति इस आशय पैदा होने की संभावना है। फाइबर के संरेखण एएसएम कोशिकाओं के संरेखण को प्रभावित किया है, और भी कहीं और 21 विशेषता किया गया है जो एएसएम कोशिकाओं पर अन्य मनोवैज्ञानिक प्रभाव पड़ता है।
इस प्रोटोकॉल के प्रमुख सीमा के नमूनों का त्याग किए बिना यह निर्धारित करने के लिए असंभव एक विस्तारित समय अवधि में प्रारंभिक सेल लगाव या भेदभाव कर रही है scaffolds में / पर छवि जीवित कोशिकाओं की अक्षमता है। यानी, ठीक कर, यह सबसे अधिक उपयोग संस्कृति अवधि के बाद होता है इसका मतलब हैनमूने आईएनजी और फिर सेल संस्कृति सेल संस्कृति के दौरान नहीं करने के बाद सफल रहा था कि क्या मापने। (गुलाबी) नीले alamarBlue में incubated scaffolds में एक रंग परिवर्तन देखने कोशिकाओं वर्तमान और व्यवहार्य हैं इंगित करता है, लेकिन आदर्श नहीं है। ऐसे जिलेटिन के रूप में Electrospinning अधिक पारदर्शी पॉलिमर scaffolds पर कोशिकाओं visualizing में सहायता कर सकते हैं। हमारे मॉडल के भीतर एक nanofibrous पाड़ की electrospinning इसी तरह उपकला कोशिकाओं रहते हैं, जिस पर घने nanofibers के शामिल वायु-मार्ग RBM की प्रतिकृति, की अनुमति दी। यह पहले से प्रतिरक्षा कोशिकाओं (नहीं दिखाया डेटा) करने में सक्षम हैं, हालांकि संरचनात्मक कोशिकाओं, nanofiber पाड़ 22 के माध्यम से विस्थापित नहीं किया जा सकता है कि दिखाया गया है। एक 3 डी सतह पर विशेष सेल प्रकार के संवर्धन के लिए फायदेमंद नदीम (उपकला और endothelial कोशिकाओं के रूप में), nanofibers के माध्यम से संरचनात्मक सेल प्रवास के इस रोकथाम अन्य प्रकार की कोशिकाओं के संवर्धन के लिए हानिकारक हो सकता है। चिकनी पेशी वीं के माध्यम से विस्थापित करने में असमर्थ हैई गठबंधन nanofiber पाड़ हम (दो प्रकार की कोशिकाओं को अलग गठबंधन पाड़ के लिए विरोध) एक दूसरे का सामना चिकनी मांसपेशियों और fibroblast परतों के साथ त्रि-स्तरीय coculture इकट्ठे हुए। यह कोशिकाओं करीब समानाधिकरण में होने की अनुमति देता है जबकि, वर्तमान अध्ययन एक प्रकार की कोशिका (तंतुप्रसू या चिकनी मांसपेशियों या तो) एक और अधिक लंबे समय तक संस्कृति की अवधि में पूरे परत से आगे निकल जाएगा कि क्या समाप्त नहीं कर सकता। इन सीमाओं के बावजूद, airway दीवार का एक व्यावहारिक सप्ताह में तीन परत मॉडल इन कई सेल प्रकार के बीच बातचीत की जांच के लिए एक वैकल्पिक मंच प्रदान करता है कि विकसित किया गया है। Fibroblasts मैं luminal सतह से 17 के भीतर बाहरी सतह और उपकला कोशिकाओं पर वरीयता प्राप्त चिकनी मांसपेशियों के साथ हाइड्रोजेल एक बेलनाकार कोलेजन के भीतर एम्बेडेड रहे थे, जहां ऐसा ही एक त्रि-स्तरीय अध्ययन हाल ही में प्रकाशित किया गया है। इसी तरह ट्यूबलर अनुमति होगी यहाँ विकसित electrospun scaffolds के यांत्रिक स्थिरता का गठन किया जाना constructs, और एक मौजूदा resea बनी हुई हैआरसीएच हमारे समूह के भीतर लक्ष्य। अध्ययन इस अध्ययन में प्रकाश डाला है, शरीर में हिस्सेदारी के भीतर कई अंगों इस बुनियादी श्लैष्मिक संरचनात्मक इकाई है, और किरायेदारों को संशोधित करने के माध्यम से वायु-मार्ग पर ध्यान केंद्रित किया है जबकि, इसी तरह प्लेटफार्मों रक्त वाहिकाओं, मूत्राशय और सहित एक तहखाने झिल्ली इकाई युक्त ऊतकों के लिए विकसित किया जा सकता है कोलेजन आधारित बहुस्तरीय मॉडल नियोजित किया गया है जहां कॉर्निया।
The authors have nothing to disclose.
The research leading to these AirPROM results has received funding from the European Union under grant agreement n° 270194.This work was also funded by the National Centre for the Replacement, Refinement, and Reduction of Animals in Research (NC3Rs), and the Engineering and Physical Research Centre (EPSRC) Doctoral Training Centre (DTC) in Regenerative Medicine, U.K.
Polyethylene terephthalate (PET) | Lucozade (GSK) bottles | N/A | Source of PET for electrospinning. Cut into small pieces and weigh out as necessary |
Dichloromethane (DCM) | Solvent for PET | ||
Trifluoroacetic acid (TFA) | Sigma | Solvent for PET | |
Rotating Mandrel | Built in house | Used to collect electrospun fibres. By rotating at different speeds, fibres can be aligned or randomly oriented | |
Syringe Pump | Harvard apparatus | used in the electrospinning process | |
DMEM-F12 | Gibco | Culture medium for CALU3 cells | |
DMEM | Gibco | Culture medium for HASM cells | |
MEM | Gibco | Culture medium for MRC5 cells | |
Antibiotic/ antimycotic solution | Gibco | Media supplement | |
FCS | Gibco | Media supplement | |
Orbital mixer (Orbital shake 503) | Stuart Scientific | For dynamic seeding of cells onto microfibre scaffolds | |
Peristaltic Pump | Watson Marlow | For providing media flow through bioreactor | |
3DKube | Kiyatec | Bioreactor for 3D cell culture |