Ensaio de recrutamento de células de Tumor de pulmão

Resumo

Este manuscrito descreve um método para quantificar o acúmulo de células de tumor nos pulmões em um modelo animal de metástases de tumor.

Resumo

Para investigar os mecanismos moleculares que regem a metástase do tumor, foram propostos vários ensaios usando o mouse como um animal de modelo. Aqui, demonstramos um ensaio simples para avaliar o extravasamento de células de tumor ou micrometastasis. Neste ensaio, células tumorais foram injetadas na veia da cauda, e após um curto período, os pulmões foram dissecados e digeridos para contar as células de tumor rotulado acumulada. Este ensaio ignora o passo inicial da invasão do tumor primário para os vasos sanguíneos e facilita o estudo dos acontecimentos no órgão distante, onde ocorre a metástase do tumor. O número de células injetadas dentro do vaso sanguíneo pode ser otimizado para observar um número limitado de metástases. Relatou-se que as células do estroma no órgão distante contribuem para metástase. Assim, este ensaio poderia ser uma ferramenta útil para explorar o potenciais terapêuticas drogas ou dispositivos para prevenção de metástases de tumor.

Introdução

Metástase de tumor responsável por elevada mortalidade em doenças relacionadas ao câncer. Do ponto de vista das investigações a nível molecular, a metástase pode ser dividido em várias etapas: iniciação do tumor no local do tumor primário, o crescimento do tumor primário e invasão em vizinhas tecidos, intravasation, circulação através dos vasos sanguíneos , extravasamento em órgãos distantes e re-crescimento do tumor. Cada etapa envolve diferentes conjuntos de moléculas/sinais¹.

Estudos até à data têm se preocupado com eventos que ocorrem em órgãos distantes, antes que as células do tumor começam circulando no sangue....

Protocolo

Todos os procedimentos realizados com ratos foram aprovados pela Universidade de medicina Animal pesquisa Comitê de Tóquio feminino.

1. cauda veia injeção de células de Carcinoma (LLC) pulmão de Lewis

1. Manter as células LLC em DMEM suplementado com 10% de FCS, em um 5% umidificado incubadora de CO₂ a 37 ° C. Células devem conter um sistema de expressão de proteína fluorescente (por exemplo, as boas práticas agrícolas).
2. Remova células da placa de cultura, usando um reagente de dissociação de célula não enzimáticos. Siga o protocolo do fabricante.
3. Recolha pilhas em um tubo de 15 mL e centrifuga....

Resultados

Os pulmões apresentam muitas células GFP-LLC 2 h após a injeção (figura 1A). Note-se que as manchas fluorescentes também detectadas no filtro vermelho devem ser excluídas a contagem do número de células. A grande maioria das células LLC desaparece dos pulmões 24 h após a injeção (Figura 1).

Para confirmar o número do GFP-LLC nos pulmões, um dos lóbulos pode ser usado pa.......

Discussão

Pré-tratamento de ratos com anticorpos, drogas, uma dieta high-fat ou tumor-condicionado médio antes da injeção de células de tumor é possível. O passo mais difícil neste ensaio é a injeção de veia de cauda. Injeção incompleta resulta em dados inconclusivos. A veia da cauda em C57BL/6 é particularmente difícil de identificar, resultando em falhadas injeções. Colocando o rato sobre uma almofada de aquecimento (37 ° C) ajuda a dilata a veia da cauda para que a injeção se torna mais fácil.

Este e.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Albumina bovina	Sigma	A7030
	DPBS	14190-144	Dispase
colagenase
Filtro de célula	BD	352340	de malha de 40 micrômetros
	Sigma	MIN26-KIT
DMEM	Gibco	11965-092
0,22 μ M Filtro de Seringa	Sartorius	17597K
O.C.T. composto	Sakura Finetek	4583
4% Solução Tampão de Fosfato de Paraformaldeído	Wako	163-20145

Gibco do soro bovino do Gibco 17105-041 da nenhum cálcio, nenhum tampão Sigma R7757 da lise da quantidade de traços do magnésio Deoxyribonuclease mim Sigma DN-25 Kit de rotulagem de fluorescência