Geração de paciente com câncer de próstata Derivado modelos de xenotransplante de células tumorais circulantes

Resumo

Este manuscrito detalha um método usado para gerar xenoenxertos derivados de pacientes com câncer de próstata (PDXs) a partir de células tumorais circulantes (CTCs). A geração de modelos PDX a partir de CTCs fornece um modelo experimental alternativo para estudar o câncer de próstata; o tumor mais comumente diagnosticado e uma causa frequente de morte por câncer em homens.

Resumo

Os modelos de xenoenxerto derivado de pacientes (PDX) estão ganhando popularidade na pesquisa do câncer e são usados para avaliação pré-clínica de medicamentos, identificação de biomarcadores, estudos biológicos e estratégias de medicina personalizada. As células tumorais circulantes (CTC) desempenham um papel crítico na metástase tumoral e foram isoladas de pacientes com vários tipos de tumores. Recentemente, as CTCs têm sido usadas para gerar modelos experimentais PDX de câncer de mama e próstata. Este manuscrito detalha o método para a geração de modelos PDX de câncer de próstata a partir de CTCs desenvolvidos por nosso grupo. As vantagens desse método em relação aos modelos PDX convencionais incluem independência da coleta de amostras cirúrgicas e geração de modelos experimentais em vários estágios da doença. A centrifugação com gradiente de densidade seguida de lise de glóbulos vermelhos e depleção por citometria de fluxo de células mononucleares CD45 positivas é usada para enriquecer CTCs de amostras de sangue periférico coletadas de pacientes com doença metastática. As CTCs são então injetadas em camundongos imunocomprometidos; Xenoenxertos gerados posteriormente podem ser usados para estudos funcionais ou colhidos para caracterização molecular. A principal limitação deste método é o método de seleção negativa usado para enriquecimento de CTC. Apesar dessa limitação, a geração de modelos PDX a partir de CTCs fornece um novo modelo experimental a ser aplicado à pesquisa do câncer de próstata.

Introdução

Paciente xenotransplantes derivados são cada vez mais populares modelos experimentais utilizadas para a investigação do cancro. Eles podem ser usados ​​para a caracterização de biomarcadores e vias biológicas, avaliação pré-clínica da eficácia do medicamento, e criação de avatares para terapias de câncer personalizado ^1,2. Previamente, outros grupos de pesquisa têm desenvolvido modelos PDX quer por implantação ou injecção de suspensões de células tumorais únicas ou explantes de tumores em ratinhos inteiro ¹ imunocomprometidos. Estes PDX modelos exige a recolha cirúrgica do tumor sólido fresco, ascite maligna ou derrame pleural....

Protocolo

Este protocolo foi realizado em nossa instituição com a aprovação do conselho de ética em pesquisa da instituição e está em conformidade com todas as diretrizes institucionais, nacionais e internacionais para o bem-estar humano.

1. Recolha de Sangue Periférico de pacientes com câncer de próstata avançado

Nota: Selecione os pacientes com câncer de próstata metastático. Obter o consentimento escrito do paciente e registrar características clínicas dos pacientes, incluindo idade em isolamento e quimioterapia anterior e tratamentos hormonais. Os doentes com doença metastática potencialmente terão maior concentração ....

Resultados

Este protocolo conduz à geração de modelos de PDX isolados CD45 CTC cancro da próstata negativo. Com base no método de selecção negativa utilizada no nosso protocolo é necessário para excluir as células mortas utilizando DAPI mancha. A percentagem de células CD45 negativas detectada por citometria de fluxo é variável e depende do peso do tumor do paciente (Figura 1A). Coloração de imunofluorescência de células não triados usando CD45 e DAPI (para identificar os núcleos celulares) revela células negativa.......

Discussão

Este manuscrito descreve um método para a geração de modelos de cancro da próstata a partir de PDX CTC. O uso do CTC para a geração de PDX modelos tem várias vantagens potenciais importantes quando comparado com métodos existentes. Em primeiro lugar, de recolha acessível CTC partir de sangue periférico permite a geração de modelos experimentais a partir do mesmo paciente em diferentes estádios da doença. Em segundo lugar, a colheita de sangue representa um método barato e mais seguro para o isolamento.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640	Gibco Life Technologies	11875-093
Soro Fetal Bovino (FBS)	Gibco Life Technologies	10437-028
Penicilina Estreptomicina	Gibco Life Technologies	15140-122
Solução salina tamponada com fosfato (PBS)	Corning Cell Gro	21-031-CM
35 µ m Filtro de células	BD Falcon	352340
Tubo cônico de poliestireno de 50 ml	Crystalgen	23-2263
Tampão de lise de glóbulos vermelhos	Sigma	R7757
DAPI	Invitrogen	d3571
Ficoll-Paque Plus	GE Healthcare	17-1440
Tubos de poliestireno de 12 mm x 75 mm com tampa de filtro de células	BD Falcon
BD Vacutainer Tubos de Coleta de Sangue de Lavanda com EDTA
Conjunto de Coleta de Sangue Alado BD com Botão de Pressão Retrair Agulha 23 gauge
BD Vacutainer Um Uso Porta-Agulha
Torniquete
Luvas de látex ou não-látex
compressas com álcool
			de gaze de algodão
Bandagem
25 G agulha
1 ml seringa

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