स्वाइन से इन्फ्लुएंजा ए वायरस का पता लगाने और अलगाव के लिए नाक पोंछे
Summary
The authors present a protocol to collect swine nasal wipes to detect and isolate influenza A viruses.
Abstract
इन्फ्लूएंजा ए वायरस तेजी से स्वाइन आबादी में विकसित और नए उपभेदों लगातार उभर रहे हैं, क्योंकि स्वाइन में इन्फ्लूएंजा वायरस के लिए निगरानी मानव और पशुओं के स्वास्थ्य के लिए महत्वपूर्ण है। स्वाइन उन्हें उद्भव और उपन्यास इन्फ्लूएंजा के रखरखाव के लिए एक वायरस उपभेदों के लिए महत्वपूर्ण मेजबान टीम बनाने इन्फ्लूएंजा ए वायरस के विविध प्रजातियों से संक्रमित हो पा रहे हैं। ऐसे वाणिज्यिक स्वाइन खेतों, कृषि मेलों, और जीना पशु बाजार के रूप में विविध सेटिंग में सूअरों नमूना वर्तमान IAV उपभेदों घूम के लिए एक व्यापक दृष्टिकोण प्रदान करने के लिए महत्वपूर्ण है। यह सूअरों के शारीरिक संयम की आवश्यकता है क्योंकि वर्तमान सोने का मानक पूर्व-मार्टम नमूना तकनीक (नाक swabs यानी संग्रह) श्रम गहन है। नाक पोंछे जानवर की कोई संयम करने के लिए कम से कम के साथ सुअर का थूथन भर में कपड़े का एक टुकड़ा मलाई शामिल है। नाक की प्रक्रिया का प्रदर्शन करने के लिए सरल है और पेशेवर पशु चिकित्सा या जानवर से निपटने के प्रशिक्षण के साथ कर्मियों की आवश्यकता नहीं है पोंछे। डब्ल्यूनाक swabs की तुलना में थोड़ा कम संवेदनशील Hile, वायरस का पता लगाने और अलगाव दरों नाक कम तनाव नमूना तरीकों की आवश्यकता होती है जब व्यक्ति सूअरों नमूना लेने के लिए एक व्यवहार्य विकल्प पोंछे बनाने के लिए पर्याप्त हैं। कार्यवाही प्रोटोकॉल एक व्यवहार्य नाक इकट्ठा करने के लिए आवश्यक कदम एक व्यक्ति सुअर से पोंछ रूपरेखा।
Introduction
इन्फ्लुएंजा ए वायरस (IAV) घरेलू पक्षी, सूअर, और मानव सहित कई प्रजातियों में सांस की बीमारी के कारण। कारण हो सकता है खंडों IAV जीनोम तेजी से वायरल विकास के reassortment और नए IAV उपभेदों के लिए बार-बार उभरने। स्वाइन सामान्यतः उत्तर अमेरिकी स्वाइन (H1N1, H1N2, H3N2) के बीच घूम IAV के तीन प्रमुख उपप्रकार वर्तमान में कर रहे हैं। एक कई मेजबान प्रजातियों से IAVS की reassortment के लिए एक मिश्रण पोत के रूप में सेवा कर सकते हैं कि एक प्रजातियां हैं, लेकिन मनुष्यों से कई IAV परिचय है उन उपप्रकार के भीतर व्यापक IAV विविधता के लिए नेतृत्व किया। स्वाइन को संक्रमित IAVS के 2 तेजी से विकास मानव, एवियन और स्वाइन वायरस से जीन खंडों से युक्त एक ट्रिपल reassortant IAV 3 संयुक्त राज्य अमेरिका में सूअरों के बीच व्यापक हो गया जब 1998 के बाद से स्पष्ट किया गया है। 4 आंतरिक जीन कि ट्रिपल reassortant IAV से खंडों वर्तमान में स्वाइन को संक्रमित IAVS के बीच बेहद प्रचलित रहते हैं। 5
"> दुनिया भर में, IAV ठेठ नैदानिक लक्षण बुखार, भूख न लगना, सुस्ती, खाँसी शामिल हैं जिसमें स्वाइन में सांस की बीमारी का एक महत्वपूर्ण कारण है, नाक मुक्ति और गरीब वजन छींकने, श्वास अस्वाभाविक। IAV जहां प्रजनन फार्मों बोने के लिए विशेष रूप से महंगा हो सकता है कारण IAV प्रेरित बुखार और कमजोर जन्मे piglets करने के लिए विफलता दर्ज किया गया है। 6.7 संयुक्त राज्य अमेरिका के भीतर, IAV आमतौर पर वाणिज्यिक स्वाइन झुंड और IAV को संक्रमित स्वाइन बीच व्यापक प्रतिजनी और जीनोमिक विविधता और सतत विकास में पता चला है इस पर नियंत्रण बाधा उत्पन्न की है वायरस। 8-11ट्रिपल reassortant उत्तरी अमेरिकी स्वाइन वंश और यूरेशियाई एवियन की तरह स्वाइन वंश से जीन खंडों से युक्त एक सूअर-वंश IAV एक दुनिया भर में महामारी की वजह से जब 2009 में महसूस किया गया स्वाइन में reassortment से उत्पन्न एक महामारी IAV तनाव के उद्भव के बारे में सार्वजनिक स्वास्थ्य की चिंता मानव में। 12 महामारी वायरस (एक (H1N1) pdm09) के बाद से हैस्थानिक स्वाइन साथ reassorted IAV 13,14 तनाव और इन नव reassorted स्ट्रेन के कुछ मनुष्य के लिए वापस प्रेषित किया गया है। 15 reassortment घटनाओं और महामारी क्षमता के साथ नए IAV उपभेदों के उद्भव स्वाइन अनिवार्यता में IAV वायरस घूम की सक्रिय निगरानी करता है की आवृत्ति, विशेष रूप से स्वाइन-मानव इंटरफेस में।
स्वाइन मानवीय IAV की द्वि-दिशात्मक interspecies संचरण के लिए महत्वपूर्ण है। मानव को स्वाइन वाणिज्यिक स्वाइन उत्पादन में होने वाली संचरण स्वाइन आबादी में वर्तमान में मौजूद IAV विविधता की एक बड़ी राशि के लिए जिम्मेदार है। कृषि मेलों संयुक्त राज्य अमेरिका में लोगों और सूअर की comingling के लिए सबसे बड़ा सेटिंग कर रहे हैं और एक संस्करण H3N2 IAV के प्रकोप के दौरान, IAV की जूनोटिक संचरण के लिए साइटों। 2012 में 15-21 में जाना जाता है, के मामलों के 93% से कम उपस्थिति की सूचना दी दिन में एक कृषि मेले में इस बीमारी की शुरुआत करने से पहले। 15 जीनोमिक विश्लेषणजूनोटिक संचरण की पुष्टि की मानव वियोजन के साथ तुलना में प्रदर्शनी सूअरों से वायरल वियोजन की। IAV से संक्रमित 21 प्रदर्शनी स्वाइन अक्सर प्रत्यक्ष नैदानिक परीक्षण के लिए की जरूरत का संकेत बीमारी, 21-23 के नैदानिक लक्षण नहीं दिखा है।
जाहिरा तौर पर बीमार सूअरों की सैम्पलिंग अकेले सफलतापूर्वक स्वाइन में IAV प्रसार की पहचान नहीं होगा और सूअर के बीच उभरते IAV के नए उपभेदों की पहचान करने के लिए पर भरोसा नहीं किया जा सकता। सक्रिय निगरानी IAV के उभरते उपभेदों स्वाइन में और सूअर और सार्वजनिक स्वास्थ्य दोनों के लिए उनके खतरे का आकलन करने का पता लगाने के लिए बहुत जरूरी है। अधिकांश IAV निगरानी गतिविधियों स्वैच्छिक है और इसलिए न्यूनतम विघटनकारी तरीकों की जरूरत है कर रहे हैं। IAV स्वाइन को संक्रमित करने के लिए तीन प्रमुख पूर्व-मार्टम नमूना संग्रह की प्रक्रिया कर रहे हैं: नाक swabs, मौखिक तरल पदार्थ, और नाक पोंछे। IAV सूची सिंथेटिक फाइबर की प्रविष्टि का पता लगाने के लिए अलग-अलग स्वाइन नमूना लेने के लिए वर्तमान सिफारिशों पसंदीदा विधि के रूप में नाक में swabs इत्तला दे दीनाक स्राव और उपकला कोशिकाओं को इकट्ठा करने के लिए। 24,25 सूअर या तो स्वयं या एक जाल जानवर के आकार पर निर्भर करता है के साथ सूअरों को नियंत्रित करना चाहिए इस प्रक्रिया, प्रशिक्षित कर्मियों की एक टीम से बचने के लिए कोशिश कर सकते हैं। 26 संयम प्रक्रिया के लिए श्रमसाध्य है कर्मियों, और सूअरों के लिए तनावपूर्ण। एक प्रतियोगिता जानवर पर कहा कि तनाव की धारणा निगरानी प्रयासों के मालिकों प्रतिरोधी बना सकते हैं ताकि इसके अतिरिक्त, प्रदर्शनी स्वाइन अक्सर एक मेले में कई प्रतियोगिताओं में शामिल कर रहे हैं।
80-100% से IAV में संक्रमित झुंड लेकर IAV का पता लगाने की संभावनाओं के साथ, मौखिक तरल पदार्थ स्वाइन की आबादी में IAV की आणविक पता लगाने के लिए swabs के नाक के लिए एक लोकप्रिय विकल्प बन गए हैं। 27,28 इसके अतिरिक्त, मौखिक तरल पदार्थ की एक व्यापक खिड़की प्रदान कर सकता है प्रारंभिक संक्रमण के बाद नाक swabs से IAV का पता लगाने। हालांकि, मौखिक तरल पदार्थ से IAV अलगाव वायरस अलगाव के प्रयास का केवल 50% आइए में जिसके परिणामस्वरूप के साथ समस्याग्रस्त किया गया हैवी वसूली। 29
स्वाइन में IAV निगरानी के दौरान नाक swabs के एवज में नाक पोंछे का उपयोग करके उपरोक्त वर्णित सीमाओं पर काबू। नाक पोंछे एक निरोधक फंदे के उपयोग की आवश्यकता नहीं है और प्रक्रिया के जानवरों या गवाहों को बल देते हुए बिना किया जा सकता है। कम से कम तकनीकी प्रशिक्षण निगरानी के नमूने एकत्र करने के लिए, सूअर मालिकों सहित गैर पशु चिकित्सा पेशेवरों, जो की अनुमति देता नाक पोंछे, इकट्ठा करने की जरूरत है। नाक पोंछे पहले एक वायरस से 30 और नमूने के इस गैर इनवेसिव विधि के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल नीचे वर्णित है का पता लगाने और इन्फ्लूएंजा के अलगाव के लिए नाक swabs की तुलना में थे।
Protocol
Representative Results
Discussion
पॉलिएस्टर इत्तला दे दी नाक swabs का उपयोग कर सूअरों से नमूने एकत्रित IAV निगरानी के संचालन में उपयोगी साबित हो गया है; हालांकि, नाक झाड़ू प्रक्रिया के उपयोग के संयम के लिए एक जाल के लिए आवश्यक उपयोग की वजह से ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work has been funded in part with federal funds from the Centers of Excellence for Influenza Research and Surveillance (CEIRS), National Institute of Allergy and Infectious Diseases, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, under Contract No. HHSN272201400006C.
Materials
| BBL Brain Heart Infusion | Becton, Dickinson and Company | 211059 | |
| Penicillin G Sodium Salt | MP Biomedicals, LLC | 021194537 | 1500 u/mg |
| Streptomycin Sulfate | AMRESCO LLC | 0382 | |
| Gentamicin Solution | Mediatech, Inc. | 30-005-CR | 50 mg/ml |
| Amphotericin B Solution | Fisher | S 24 25 | 250 ug/ml |
| Kanamycin Sulfate | Teknova | K2105 | 5000 ug/ml |
| TPP Rapid Filtermax System | TPP Techno Plastic Products AG | 99150 | |
| Nalgen Diagnostic Bottles | Thermo Scientific | 342002-9025 | HDPE with white PP closure |
| Dermacea Gauze Sponge, 8 ply | Covidien | 441211 | 5.08 cm × 5.08 cm (2 in. × 2 in) |
| Nitrile Exam Gloves | Saftey Choice | 19-170-010 (A-D) |
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