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Artigo de método

Usando Individual Sensillum Gravação para detectar respostas Olfativo Neurônio de percevejos para Semioquímicos

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DOI:

10.3791/53337

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18 de janeiro de 2016

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Neste artigo

Resumo

Os percevejos dependem de neurônios receptores olfativos alojados em sua sensila olfatória antenal para detectar semioquímicos no ambiente. Utilizando a gravação de um único sensor, demonstramos um método para avaliar a resposta dos percevejos aos semioquímicos e explorar o processo de codificação envolvido.

Resumo

O sistema olfactivo inseto desempenha um papel importante na detecção de semioquímicos no ambiente. Em particular, o sensilas antenal que abrigam neurónios simples ou múltiplas, para dentro, são considerados para tornar a maior contribuição para responder aos estímulos químicos. Ao gravar diretamente potencial de ação no sensillum olfativa após a exposição a estímulos, a gravação sensillum único (SSR) técnica fornece uma abordagem poderosa para investigar as respostas neurais dos insetos a estímulos químicos. Para o bug cama, que é um parasita humano notório, vários tipos de sensillum olfatório foram caracterizados. Neste estudo, demonstramos respostas neurais de cama bug sensilla olfativo a dois estímulos químicos e as respostas dependentes da dose para um deles usando o método SSR. Esta abordagem permite que pesquisadores para realizar rastreio precoce de estímulos químicos individuais na olfativo sensilla cama bug, que iria fornecer informações valiosas para o desenvolvimento de novos atrativos ou repelentes de insetos de cama e benefícios dos esforços de controle de cama bug.

Introdução

O percevejo comum Cimex lectularius L (Hemiptera: Cimicidae), como um ectoparasita temporária, é um inseto sugador de sangue obrigado, o que significa a sua sobrevivência, desenvolvimento e reprodução necessitam de fontes de sangue de hospedeiros, incluindo seres humanos e animais 1,2. Embora a transmissão do vírus raramente tem sido relatada devido a C. lectularius, o incômodo gerado por morder uma infestação afeta seriamente anfitriões tanto física como psicologicamente 3. A introdução e uso generalizado de inseticidas químicos, especialmente o DDT, reduziu o risco de infestações e até o final de 1950 as infestações estavam e....

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Protocolo

1. Preparação de Instrumentos, Soluções de estímulos, e Percevejos

  1. Prepara-se uma solução de KNO 2 50% (w / v) em um frasco de 20 ml.
  2. Afie dois microeléctrodos de tungsténio em solução KNO 2 a 5 V mergulhando repetidamente os eletrodos de tungstênio dentro e fora da solução.
    1. Cerca de afiar o fio de tungsténio por imersão a cerca de 10 mm de fio de tungsténio a dentro e para fora da solução de KNO 2 a uma velocidade de 2 imersões / seg durante cerca de 5 min, o que pode consumir muito, a extremidade dianteira do fio de tungsténio.
    2. Delicadamente afiar o eléctrodo por meio de imersão de cerca de 1 ....

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Resultados

Sensillum gravação única é uma técnica de investigação poderoso utilizado em estudos de insetos ecologia química e fisiologia neural. Investigando as respostas neurais dos insetos aos compostos voláteis diferentes, especialmente aqueles pensado para ser ecologicamente relacionado com a sobrevivência eo desenvolvimento dos insetos, não só nos dá insights valiosos no processo de olfato do inseto, mas também abre novos caminhos promissores que poderiam, potencialmente, levar para o desenvol.......

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Discussão

A técnica standard sensillum gravação tem sido extensivamente utilizado para testar as respostas neurais de insectos, tais como moscas de fruta, mosquitos e percevejos a diferentes estímulos químicos no ambiente. Estes estímulos químicos são frequentemente dissolvidos e diluídos num solvente comum, a fim de preparar a diferentes doses de tratamentos. No entanto, diferentes solventes pode produzir diferentes taxas de libertação bastante para os estímulos. Estudos anteriores sobre alguns insetos amplamente estudados, tais.......

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Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

O projeto foi apoiado pelo Prêmio AAES 461Hatch/Multistate Grants ALA08-045 e ALA015-1-10026 para N.L.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Fio de tungstênioAM SYSTEMS#716500Usado para preparar o eletrodo
KNO2Sigma#310484Usado para afiar o fio de tungstênio
Fonte de alimentação CABK Precision1653AFornecendo a tensão na afiação do fio de tungstênio
Leica Z6 APO MicroscópioLeica10447424Usado para observar a sensilla nas antenas
Controlador SimulusSyntechCS-55Usado para controlar a aplicação de estímulo
Controlador de aquisição USB de 4 canaisSyntechIDAC-4Exibição na tela em tempo real de todos os sinais antes e durante a gravação
Fonte de luzSCHOTTA20500Fornecendo fontes de luz para observação
MicromanupulatorLeica115378Usado para pequenos movimentos de eletrodo
Alto-falanteJuster95aConectado com o Controlador de Aquisição IDAC-4 e fornecendo som para o sinal
Suporte magnéticoNarishigeGJ-1Usado para segurar o eletrodo de referência, percevejo estabilizado e tubo de entrega de estímulo
Mesa de Isolamento de Vibração TMCTMC63-500Usado para isolar a vibração dos equipamentos
CoverslipTedpella2225-1Usado para segurar o percevejo
Fita dupla face3MXT6110Usado para estabilizar o percevejo no clipe de cobertura
Cera DentalDentakitDK-R012Usado para apoiar o clipe de cobertura onde o percevejo é estabilizado 

Referências

  1. Bartonicka, T., Gaisler, J. Seasonal dynamics in the numbers of parasitic bugs (Heteroptera, Cimicidae): a possible cause of roost switching in bats (Chiroptera, Vespertilionidae). Parasitol Res. 100 (6), 1323-1330 (2007).
  2. Thomas, I., Kihiczak, G. G., Schwartz, R. A.

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Reimpressões e permissões

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