Nanoscaled sea-island surfaces composed of thermoresponsive block copolymers were fabricated by the Langmuir-Schaefer method for controlling spontaneous cell adhesion and detachment. Both the preparation of the surface and the adhesion and detachment of cells on the surface were visualized.
Thermoresponsive poly(N-isopropylacrylamide) (PIPAAm)-immobilized surfaces for controlling cell adhesion and detachment were fabricated by the Langmuir-Schaefer method. Amphiphilic block copolymers composed of polystyrene and PIPAAm (St-IPAAms) were synthesized by reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) radical polymerization. A chloroform solution of St-IPAAm molecules was gently dropped into a Langmuir-trough apparatus, and both barriers of the apparatus were moved horizontally to compress the film to regulate its density. Then, the St-IPAAm Langmuir film was horizontally transferred onto a hydrophobically modified glass substrate by a surface-fixed device. Atomic force microscopy images clearly revealed nanoscale sea-island structures on the surface. The strength, rate, and quality of cell adhesion and detachment on the prepared surface were modulated by changes in temperature across the lower critical solution temperature range of PIPAAm molecules. In addition, a two-dimensional cell structure (cell sheet) was successfully recovered on the optimized surfaces. These unique PIPAAm surfaces may be useful for controlling the strength of cell adhesion and detachment.
superfícies nanoestruturados têm atraído recentemente a atenção substancial devido às suas várias aplicações potenciais, incluindo padronização, cultura de células, limpeza, e comutação de superfície. Por exemplo, as superfícies hidrofóbicas inspirados na nanoestrutura da folha de lótus e outras superfícies sensíveis são capazes de reagir a estímulos externos 1-4.
O filme de Langmuir é um dos revestimentos de polímero mais amplamente estudados. Um filme de Langmuir é formada por moléculas anfifílicas deixando cair sobre uma interface ar-água 08/05. A película pode então ser transferida para uma superfície sólida por adsorção física ou química, e a conformação molecular sobre uma superfície sólida pode ser controlada usando métodos de transferência verticais e horizontais 9-12. A densidade do filme de Langmuir podem ser regulados com precisão por compressão da interface ar-água. Recentemente, este método também tem se mostrado eficaz para a fabricação nanométricos structur-ilha do marES, utilizando copolímeros de bloco anfifílicos. As nanoestruturas são considerados para consistir de um núcleo de segmentos hidrófobos e uma concha de segmentos hidrofílicos 13-17. Além disso, o número de nanoestruturas sobre uma superfície é regulada, controlando a área por molécula de (A m) do copolímero de bloco na interface.
Nós nos concentramos em um original, abordagem de engenharia de tecido sem andaime única, engenharia camada de células, usando uma superfície de cultura termicamente reativo. A tecnologia desenvolvida foi aplicada a terapias de regeneração para vários órgãos 18. Uma superfície de cultura de temperatura-sensível foi fabricado por enxerto de poli (N -isopropylacrylamide) (PIPAAm), uma molécula de temperatura-sensível, para uma superfície de 19-27. PIPAAm e seus copolímeros exibem uma temperatura crítica inferior de solução (TCIS), em meio aquoso, a temperaturas próximas de 32 ° C. A superfície da cultura também exibiu uma temperatura alternati-responsivo em entre hidrofobicidade e hidrofilicidade. A 37 ° C, a superfície tornou-se PIPAAm-enxertado hidrofóbico, e as células proliferaram rapidamente ligados e sobre a superfície, bem como sobre poliestireno de cultura de tecidos convencional. Quando a temperatura foi baixada para 20 ° C, a superfície tornou-se hidrófila, e células espontaneamente isolada a partir da superfície. Portanto, células confluentes cultivadas na superfície poderia ser colhida como uma folha intacta, alterando a temperatura. Estas propriedades de adesão celular e descolamento também foram exibidos por uma superfície fabricada por revestimento de película Langmuir para o laboratório de demonstração 26, 27. Um filme de Langmuir de copolímeros em bloco composto por poliestireno (P (St)) e PIPAAm (St-IPAAM) foi fabricada. O filme de Langmuir com uma específica Um m poderia ser horizontalmente transferidos para um substrato de vidro hidrofobicamente modificado. Além disso, foram avaliadas a adesão celular ligado e desprendimento da superfície preparada em resposta à temperatura.
_content "> Aqui, nós descrevemos protocolos para a fabricação de uma película de Langmuir nanoestruturada composto de copolímeros em bloco anfifílicos termo-sensível sobre um substrato de vidro. O método pode fornecer uma técnica de fabricação eficaz para nanofilmes orgânicos em vários campos da ciência superfície e podem facilitar mais controlo eficaz da adesão celular e descolamento em espontânea a partir de uma superfície.Uma superfície termicamente reativo foi fabricado pelo método de Langmuir-Schaefer, e as propriedades de superfície para adesão celular / descolamento e a folha de célula de recuperação foram optimizados. Ao utilizar este método para a fabricação de superfícies, vários passos são críticos. A composição molecular das moléculas de St-IPAAM tem um grande efeito sobre a estrutura da superfície e a estabilidade da superfície, e, por extensão, a adesão celular e descolamento. Em particular, as moléculas …
The authors have nothing to disclose.
This study was financially supported by the Creation of Innovation Centers for Advanced Interdisciplinary Research Program’s Project for Developing Innovation Systems “Cell Sheet Tissue Engineering Center (CSTEC)” of the Ministry of Education, Culture, Sports, Science and Technology (MEXT), Japan.
N-isopropylacrylamide | Kohjin | No catalog number | |
Azobis(4-cyanovaleric acid) | Wako Pure Chemicals | 016-19332 | |
Styrene | Sigma-Aldrich | S4972 | |
1,3,5-trioxane | Sigma-Aldrich | T81108 | |
1,4-Dioxane | Wako Pure Chemicals | 045-24491 | |
DMEM | Sigma | D6429 | |
PBS | Nakarai | 11482-15 | |
Streptomycin | GIBCO BRL | 15140-163 | |
Penicillin | GIBCO BRL | 15140-122 | |
Trypsin-EDTA | Sigma | T4174 | |
FBS | Japan Bioserum | JBS-11501 | |
BAECs | Health Science Reserch Resources Bank | JCRB0099 | |
Cover Glasses | Matsunami Glass Industry | C024501 | |
AFM NanoScope V | Veeco | ||
1H NMR INOVA 400 | Varian, Palo Alto | ||
ATR/FT-IR NICOLET 6700 | Thermo Scientific | ||
GPC HLC-8320GPC | Tosoh | ||
TSKgel Super AW2500, AW3000, AW4000 | Tosoh | ||
Langmuir-Blodgett Deposition Troughs | KSV Instruments | KN 2002 | KSV NIWA Midium trough |
Nikon ECLIPSE TE2000-U | Nikon |