Monte todo Dissecção e Imunofluorescência do mouse cóclea Adulto

Scott C. Montgomery; Brandon C. Cox

doi:10.3791/53561

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Artigo de método

Monte todo Dissecção e Imunofluorescência do mouse cóclea Adulto

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DOI:

10.3791/53561

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1 de janeiro de 2016

Scott C. Montgomery¹ , Brandon C. Cox¹^,²

¹Department of Surgery, Division of Otolaryngology, Southern Illinois University, School of Medicine, ²Department of Pharmacology, Southern Illinois University, School of Medicine

Neste artigo

Resumo

Nós apresentamos um método para isolar o órgão de Corti adulto como três voltas intactas cocleares (Apex, médio e base). Nós também demonstrar um procedimento para a imunocoloração com anticorpos marcados por fluorescência. Em conjunto estas técnicas permitem o estudo de células ciliadas, células de suporte, e outros tipos de células encontradas na cóclea.

Resumo

O órgão de Corti, alojado na cóclea do ouvido interno, contém células ciliadas mecanossensoriais e células de suporte circundantes que são organizadas em forma de espiral e têm um gradiente tonotópico para detecção de som. A cóclea do camundongo tem aproximadamente 6 mm de comprimento e geralmente é dividida em três voltas (ápice, meio e base) para análise. Para investigar a perda celular, divisão celular ou expressão gênica em mosaico, toda a montagem ou preparação da superfície da cóclea é útil. Este método de dissecção permite a visualização de todas as células dentro do órgão de Corti quando combinado com imunocoloração e microscopia confocal para obter imagens de células em diferentes planos no eixo z. Várias seções transversais ópticas também podem ser obtidas a partir dessas imagens de pilha z. Além disso, o método de dissecção de montagem completa pode ser usado para microscopia eletrônica de varredura, embora seja necessário um método de fixação diferente. Aqui, apresentamos um método para isolar o órgão de Corti em três voltas cocleares intactas (ápice, meio e base). Este método pode ser usado para camundongos com idade variando de uma semana de idade até a idade adulta e difere da técnica usada para amostras neonatais onde a calcificação da cóclea é incompleta. Uma versão ligeiramente modificada pode ser usada para dissecção da cóclea do rato. Também demonstramos um procedimento para imunocoloração com anticorpos marcados com fluorescência.

Introdução

A cóclea em forma de espiral do ouvido interno, contida dentro do osso temporal, abriga o órgão de Corti, o órgão auditivo final sensorial em mamíferos. A cóclea é tonotopically organizado e comumente dividido em apical, médio e basal voltas correspondente a regiões de frequência diferentes, com a detecção de som de alta freqüência na base e detecção de baixa frequência no ápice ^1. As células ciliadas, as células mecanosensorial do órgão de Corti, executar o comprimento da cóclea, que é de aproximadamente 6 mm de comprimento de ^ratos 2,3. Estas células converter a energia mecânica de ondas sonoras, que são transmitidas através do labirinto membr....