सहायक कारक के उत्थान और बेहतर reusability के लिए Alginate मोती में मल्टी biocatalysts का स्थिरीकरण
Summary
प्रस्तुत सहायक कारक के उत्थान और बेहतर reusability के लिए सह immobilizing पूरे सेल biocatalysts, एक उदाहरण के रूप में एल xylulose के उत्पादन प्रयोग करने के लिए प्रोटोकॉल है। सहायक कारक के उत्थान दो कोलाई कार्यात्मक पूरक एंजाइमों व्यक्त उपभेदों युग्मन द्वारा हासिल की है; पूरे सेल biocatalyst स्थिरीकरण कैल्शियम alginate मोती में सेल encapsulation द्वारा हासिल की है।
Abstract
हमने हाल ही में सुधार के उत्पादन उपज और निरंतर संश्लेषण के लिए सहायक कारक के उत्थान और biocatalyst स्थिरीकरण की क्षमता के साथ एक सरल, पुन: प्रयोज्य और मिलकर पूरे सेल biocatalytic प्रणाली विकसित की है। इसके साथ वर्णित ई दो से मिलकर एक ऐसी प्रणाली के विकास के लिए प्रयोगात्मक प्रक्रिया है कोलाई उपभेदों कि कार्यात्मक पूरक एंजाइमों व्यक्त करते हैं। साथ में, इन दो एंजाइमों bioreaction के उत्पाद उपज में सुधार के लिए महंगा सहकारकों के उत्थान मध्यस्थता करने के लिए कार्य कर सकते हैं सह ऑपरेशन। इसके अलावा, कैल्शियम alginate मोती में पूरे कोशिकाओं के encapsulation से मिलकर biocatalytic प्रणाली का एक स्थिर रूप synthesizing की विधि बताई गई है। एक उदाहरण के रूप में, हम ई युग्मन द्वारा एल arabinitol से एल xylulose के बेहतर जैवसंश्लेषण पेश कोलाई कोशिकाओं एंजाइमों एल arabinitol डिहाइड्रोजनेज या NADH oxidase व्यक्त। इष्टतम शर्तों के तहत और 150 के एक प्रारंभिक एकाग्रता का उपयोगमिमी एल arabinitol, अधिक से अधिक एल xylulose उपज 96% है, जो साहित्य रिपोर्ट में उन लोगों की तुलना में अधिक है पर पहुंच गया। मिलकर पूरे सेल biocatalysts के स्थिर प्रपत्र अच्छा परिचालन स्थिरता का प्रदर्शन किया, उपज लगातार फिर से उपयोग के 7 चक्र के बाद पहले चक्र में प्राप्त की 65% को बनाए रखने, जबकि मुक्त सेल प्रणाली लगभग पूरी तरह से उत्प्रेरक गतिविधि खो दिया है। इसलिए, तरीकों यहां बताया दो रणनीतियों एल xylulose के औद्योगिक उत्पादन के साथ-साथ अन्य मूल्य वर्धित यौगिकों सामान्य में सहकारकों के उपयोग की आवश्यकता को बेहतर बनाने में मदद कर सकता है प्रदान करता है।
Introduction
3 – reductive पूरे सेल सूक्ष्मजीवों का उपयोग कर biotransformation व्यावसायिक और चिकित्सा के महत्वपूर्ण biomolecules 1 की केमो-enzymatic संश्लेषण के लिए एक व्यापक तरीका बन गया है। 7 – यह अलग एंजाइमों के इस्तेमाल को लेकर कई फायदे हैं, विशेष रूप से लागत गहन बहाव के शुद्धिकरण की प्रक्रिया के उन्मूलन और एक विस्तारित जीवन भर के 4 का प्रदर्शन प्रस्तुत करता है। Biocatalytic रास्ते जहां सहकारकों उत्पाद गठन के लिए आवश्यक हैं के लिए, पूरे सेल सिस्टम संभावित सस्ती इलेक्ट्रॉन दान सह substrates 5,8,9 के अलावा के माध्यम से सीटू सहायक कारक के उत्थान में प्रदान किया है। 13 – हालांकि, इस क्षमता प्रतिक्रियाओं है कि दुर्लभ या महंगा सह substrates 10 की एक stoichiometric एकाग्रता की आवश्यकता के लिए कम है। एक साथ पूरे कोशिकाओं के गरीब reusability के साथ, यह एक स्केलेबल और निरंतर उत्पादों होगा की स्थापना में बाधा उत्पन्नction प्रणाली। इन सहायक कारक पर निर्भर biotransformations के लिए पूरे सेल प्रणालियों के सामरिक संशोधनों के ऊपर उल्लिखित सीमाओं को पार करने के लिए आवश्यक हैं। विशेष रूप से, पूरे सेल biocatalysts कि मिलकर काम का संयोजन काफी उत्पादकता और harbored एंजाइमों 14 की स्थिरता को बढ़ाने के लिए दिखाया गया है। ये कारक है, जो अक्सर वाणिज्यिक रूप से व्यवहार्य उत्पादों का बड़े पैमाने पर उत्पादन को सक्रिय करने के लिए महत्वपूर्ण हैं, सह immobilizing biocatalytic रोगाणुओं 15 से आगे अनुकूलित किया जा सकता। हमने हाल ही में एक सरल और पुन: प्रयोज्य पूरे सेल biocatalytic प्रणाली है कि एल xylulose उत्पादन 16 के लिए दोनों सहायक कारक के उत्थान और biocatalyst स्थिरीकरण की अनुमति देता है विकसित किया है। इस अध्ययन में, इस प्रणाली में सुधार के लिए एक उदाहरण biotransformation उत्पादन उपज और biocatalyst reusability के लिए इन दो रणनीतियों को लागू करने की प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं को वर्णन करने के रूप में उपयोग किया गया था।
एल xylulose एक सीएलए के अंतर्गत आता हैजैविक रूप से उपयोगी अणुओं के एसएस दुर्लभ शर्करा नाम दिया है। दुर्लभ शर्करा अद्वितीय monosaccharides या चीनी डेरिवेटिव है कि प्रकृति में बहुत कम ही होते हैं, लेकिन बायोएक्टिव अणुओं 17,18 में मान्यता तत्व के रूप में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। वे मिठास, कार्यात्मक खाद्य पदार्थों से संभावित चिकित्सा 19 से लेकर आवेदनों की एक किस्म है। एल xylulose कई α-glucosidases का एक संभावित अवरोध के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, और भी हेपेटाइटिस या लीवर सिरोसिस 17,20 का एक संकेतक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। पूरे सेल प्रणाली में एल xylulose को xylitol के उच्च दक्षता रूपांतरण Pantoea में पहले से सूचित कर दिया गया है 21,22, Alcaligenes सपा ananatis। 701B 23, बेसिलस पैलीडस Y25 24,25 और 26 कोलाई। ई में कोलाई, हालांकि, यह केवल कम (<67 मिमी) xylitol सांद्रता 26 का उपयोग कर 1 से अधिक एक प्रारंभिक xylitol एकाग्रता की क्षमता निरोधात्मक प्रभाव के कारण हासिल की थीXylitol-4-डिहाइड्रोजनेज गतिविधि 21,26 पर 00 मिमी। Xylulose और xylitol के बीच संतुलन thermodynamic जोरदार xylitol 25,27 के गठन के पक्ष में दिखाया गया है। इसके अतिरिक्त, xylulose उपज महंगा सहकारकों है कि सीटू सहायक कारक के उत्थान प्रणाली में एक के अभाव में आपूर्ति की जा की राशि तक सीमित है। साथ में, इन कारकों एल xylulose जैवसंश्लेषण के लिए स्थायी प्रणालियों में स्केलिंग के लिए क्षमता की सीमा।
इन सीमाओं को पार और एल xylulose biotransformation उपज में सुधार करने के लिए, सहायक कारक के उत्थान की रणनीति एक मिलकर पूरे सेल biocatalytic प्रणाली की स्थापना से पहले नियुक्त किया गया था। विशेष रूप से, एल Arabinitol 4-डिहाइड्रोजनेज (ईसी 1.1.1.12) Hypocrea jecorina से (HjLAD), एल arabinose कवक के catabolic मार्ग में एक एंजाइम, एल xylulose 28,29 में एल arabinitol के रूपांतरण को उत्प्रेरित करने के लिए चयनित किया गया था । कई biosynthetic एंजाइमों की तरह, एक प्रमुख limitatioHjLAD के एन कि यह इस रूपांतरण बाहर ले जाने के लिए महंगा निकोटिनामाइड एडेनाइन डाईन्यूक्लियोटाइड सहायक कारक (NAD +, NADH का ऑक्सीकरण फार्म) की एक stoichiometric राशि की आवश्यकता है। NADH oxidase स्ट्रेप्टोकोकस प्योगेनेस (SpNox) में पाया उच्च cofactor-उत्थान गतिविधि 30,31 प्रदर्शित करने के लिए दिखाया गया है। SpNox, ई की इस विशेषता का लाभ उठाते हुए कोलाई कोशिकाओं एल xylulose के उत्पादन के लिए HjLAD व्यक्त ई के साथ मिलकर कर रहे थे कोलाई कोशिकाओं NAD + के उत्थान के लिए SpNox व्यक्त एल xylulose उत्पादन चित्रा 1 ए में दिखाया गया मिलकर प्रतिक्रिया द्वारा दर्शाया बढ़ावा देने के लिए। इष्टतम स्थितियों और 150 मिमी एल arabinitol की एक प्रारंभिक एकाग्रता का उपयोग कर के तहत अधिक से अधिक एल xylulose उपज 96% तक पहुँच गया है, इस प्रणाली बहुत साहित्य रिपोर्ट में उन लोगों की तुलना में अधिक कुशल बनाने।
पूरे सेल स्थिरीकरण की रणनीति अगले नियुक्त किया गया था और आगे मिलकर biocatalyt के reusability को बढ़ाने के लिएआईसी प्रणाली। पूरे सेल स्थिरीकरण के लिए इस्तेमाल किया तरीकों सोखना / सहसंयोजक ठोस matrices, पार से जोड़ने / फंसाने और बहुलक नेटवर्क 32 में encapsulation को जोड़ने शामिल हैं। इन तरीकों के अलावा, सेल स्थिरीकरण के लिए सबसे उपयुक्त विधि कैल्शियम alginate मोती में encapsulation है। उनके हल्के जमाना गुण, अक्रिय जलीय मैट्रिक्स और उच्च porosity शारीरिक गुणों और समझाया बायोलॉजिकल 33 की कार्यक्षमता को बनाए रखने में मदद। इसलिए, मिलकर biocatalyst प्रणाली दोनों ई युक्त HjLAD या SpNox शरण कोलाई कोशिकाओं कैल्शियम alginate मोती में स्थिर था एल xylulose उत्पादन की कई चक्र सक्षम करने के लिए (चित्रा 2) व्याप्ति स्थिर biocatalyst प्रणाली अच्छी परिचालन स्थिरता का प्रदर्शन किया, पहले चक्र के रूपांतरण उपज का 65% बनाए रखने के 7 चक्र के बाद लगातार फिर से उपयोग करते हैं, जबकि मुक्त सेल प्रणाली लगभग पूरी तरह से अपनी उत्प्रेरक गतिविधि खो दिया है।
Protocol
Representative Results
Discussion
हाल ही में तकनीकी प्रगति पुनः संयोजक biotherapeutics के व्यावसायीकरण में वृद्धि के लिए सक्षम है, जैव प्रौद्योगिकी उद्योग में उनके बाजार मूल्य में एक क्रमिक वृद्धि हो जाती है। ऐसा ही एक उन्नति पुनः संयोजक सूक्ष?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस शोध कोरिया के नेशनल रिसर्च फाउंडेशन (एनआरएफ) शिक्षा, विज्ञान और प्रौद्योगिकी (एनआरएफ-2013R1A1A2012159 और एनआरएफ-2013R1A1A2007561), Konkuk विश्वविद्यालय के मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित है, और केमिकल इंजीनियरिंग और MCubed विभाग के माध्यम से बेसिक साइंस रिसर्च प्रोग्राम द्वारा समर्थित किया गया मिशिगन विश्वविद्यालय में कार्यक्रम।
Materials
| LB broth | Sigma Aldrich | L3022-6X1KG | |
| Kanamycin | Fisher | BP906-5 | |
| Isopropyl β-D-thiogalactopyranoside (IPTG) | Sigma Aldrich | I6758-10G | |
| Tris base | Fisher | BP1521 | |
| B-Nicotinamide adenine dinucleotide hydrate | Sigma Aldrich | N7004-1G | |
| L-Arabinitol | Sigma Aldrich | A3506-10G | |
| L-Cysteine | Sigma Aldrich | 168149 | |
| Sulfuric acid | Sigma Aldrich | 320501-500ML | |
| Carbazole | Sigma Aldrich | C5132 | |
| Ethanol | Fisher | BP2818-4 | |
| Sodium alginate | Sigma Aldrich | W201502 | |
| Calcium chloride dihydrate | Sigma Aldrich | 223506-500G | |
| Excella E24 shaker incubator | New Brunswick Scientific | ||
| Cary 60 UV-Vis Spectrophotometer | Agilent Technologies | ||
| Centrifuge 5810R | Eppendrof | ||
| Beakers | Fisher | ||
| Syringe | Fisher | ||
| Needle | Fisher | ||
| Pioneer Analytical and Precision Weighing Balance | Ohaus |
Referências
- Carballeira, J. D., et al. Microbial cells as catalysts for stereoselective red-ox reactions. Biotech Adv. 27 (6), 686-714 (2009).
- Sun, B., Kantzow, C., Bresch, S., Castiglione, K., Weuster-Botz, D. Multi-enzymatic one-pot reduction of dehydrocholic acid to 12-keto-ursodeoxycholic acid with whole-cell biocatalysts. Biotechnol. Bioeng. 110 (1), 68-77 (2013).
- Smith, M. R., Khera, E., Wen, F. Engineering novel and improved biocatalysts by cell surface display. Ind. Eng. Chem. Res. 54 (16), 4021-4032 (2015).
- Wen, F., Sun, J., Zhao, H. Yeast surface display of trifunctional minicellulosomes for simultaneous saccharification and fermentation of cellulose to ethanol. Appl. Environ. Microbiol. 76 (4), 1251-1260 (2009).
- Siedler, S., Bringer, S., Bott, M. Increased NADPH availability in Escherichia coli: improvement of the product per glucose ratio in reductive whole-cell biotransformation. Appl. Microbiol. Biotechnol. 92 (5), 929-937 (2011).
- Kim, C. S., Seo, J. H., Kang, D. G., Cha, H. J. Engineered whole-cell biocatalyst-based detoxification and detection of neurotoxic organophosphate compounds. Biotech Adv. 32 (3), 652-662 (2014).
- Tufvesson, P., Lima-ramos, J., Nordblad, M., Woodley, J. M. Guidelines and cost analysis for catalyst production in biocatalytic processes. Org. Process Res. Dev. 15 (1), 266-274 (2011).
- Mouri, T., Michizoe, J., Ichinose, H., Kamiya, N., Goto, M. A recombinant Escherichia coli whole cell biocatalyst harboring a cytochrome P450cam monooxygenase system coupled with enzymatic cofactor regeneration. Appl Microbiol Bioechnol. 72 (3), 514-520 (2006).
- Xiao, Z., et al. A novel whole-cell biocatalyst with NAD+ regeneration for production of chiral chemicals. PloS one. 5 (1), e8860 (2010).
- Zhao, H., van der Donk, W. A. Regeneration of cofactors for use in biocatalysis. Curr. Opin. Biotechnol. 14 (6), 583-589 (2003).
- Thomas, S. M., Dicosimo, R., Nagarajan, V. Biocatalysis: applications and potentials for the chemical industry. Trends Biotechnol. 20 (6), 238-242 (2002).
- Wang, Y., Li, L., Ma, C., Gao, C., Tao, F., Xu, P. Engineering of cofactor regeneration enhances (2S,3S)-2,3-butanediol production from diacetyl. Sci Rep. 3, 2643 (2013).
- Uppada, V., Bhaduri, S., Noronha, S. B. Cofactor regeneration – an important aspect of biocatalysis. Curr. Sci. India. 106 (7), 946-957 (2014).
- Fu, N., Peiris, P., Markham, J., Bavor, J. A novel co-culture process with Zymomonas mobilis and Pichia stipitis for efficient ethanol production on glucose/xylose mixtures. Enzyme Microb. Technol. 45 (3), 210-217 (2009).
- Chen, H. -. Y., Guan, Y. -. X., Yao, S. -. J. A novel two-species whole-cell immobilization system composed of marine-derived fungi and its application in wastewater treatment. J. Chem. Technol. Biotechnol. 89 (11), 1733-1740 (2014).
- Gao, H., et al. Repeated production of L-xylulose by an immobilized whole-cell biocatalyst harboring L-arabinitol dehydrogenase coupled with an NAD+ regeneration system. Biochem. Eng. J. 96, 23-28 (2015).
- Beerens, K., Desmet, T., Soetaert, W. Enzymes for the biocatalytic production of rare sugars. J Ind Microbiol Biotechnol. 39 (6), 823-834 (2012).
- Poonperm, W., Takata, G., Izumori, K. Polyol conversion specificity of Bacillus pallidus. Biosci., Biotechnol., Biochem. 72 (1), 231-235 (2008).
- Leviiz, G., Zehner, L., Saunders, J., Beedle, J. Sugar substitutes: their energy values, bulk characteristics and potential health benefits. Am. J. Clin. Nutr. 62 (5), 1161S-1168S (1995).
- Zhang, Y. -. W., Tiwari, M. K., Jeya, M., Lee, J. -. K. Covalent immobilization of recombinant Rhizobium etli CFN42 xylitol dehydrogenase onto modified silica nanoparticles. Appl Microbiol Bioechnol. 90 (2), 499-507 (2011).
- Aarnikunnas, J. S., Pihlajaniemi, A., Palva, A., Leisola, M., Nyyssölä, A. Cloning and expression of a Xylitol-4-Dehydrogenase gene from Pantoea ananatis. Appl. Environ. Microbiol. 72 (1), 368-377 (2006).
- Doten, R. C., Mortlock, R. P. Production of D- and L-Xylulose by mutants of Klebsiella pneumoniae and Erwinia uredovora. Appl. Environ. Microbiol. 49 (1), 158-162 (1985).
- Khan, A. R., Tokunaga, H., Yoshida, K., Izumori, K. Conversion of Xylitol to L-Xylulose by Alcaligenes sp. 701B-cells. J. Ferment. Bioeng. 72 (6), 488-490 (1991).
- Poonperm, W., Takata, G., Morimoto, K., Granström, T. B., Izumori, K. Production of L-xylulose from xylitol by a newly isolated strain of Bacillus pallidus Y25 and characterization of its relevant enzyme xylitol dehydrogenase. Enzyme Microb. Technol. 40 (5), 1206-1212 (2007).
- Takata, G., Poonperm, W., Morimoto, K., Izumori, K. Cloning and overexpression of the xylitol dehydrogenase gene from Bacillus pallidus and its application to L-xylulose production. Biosci., Biotechnol., Biochem. 74 (9), 1807-1813 (2010).
- Usvalampi, A., Kiviharju, K., Leisola, M., Nyyssölä, A. Factors affecting the production of L-xylulose by resting cells of recombinant Escherichia coli. J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 36 (10), 1323-1330 (2009).
- Rizzi, M., Harwart, K., Bui-Thananh, N. -. A., Dellweg, H. A kinetic study of the NAD+-Xylitol-Dehydrogenase from the yeast Pichia stipitis. J. Ferment. Bioeng. 67 (1), 25-30 (1989).
- Pail, M., et al. The metabolic role and evolution of L-arabinitol 4-dehydrogenase of Hypocrea jecorina. Eur. J. Biochem. 271 (10), 1864-1872 (2004).
- Tiwari, M. K., et al. pH-rate profiles of L-arabinitol 4-dehydrogenase from Hypocrea jecorina and its application in L-xylulose production. Bioorg. Med. Chem. Lett. 24 (1), 173-176 (2014).
- Gao, H., et al. Role of surface residue 184 in the catalytic activity of NADH oxidase from Streptococcus pyogenes. Appl. Microbiol. Biotechnol. 98 (16), 7081-7088 (2014).
- Gao, H., Tiwari, M. K., Kang, Y. C., Lee, J. -. K. Characterization of H2O-forming NADH oxidase from Streptococcus pyogenes and its application in L-rare sugar production. Bioorg. Med. Chem. Lett. 22 (5), 1931-1935 (2012).
- Roy, I., Gupta, M. N. Hydrolysis of starch by a mixture of glucoamylase and pullulanase entrapped individually in calcium alginate beads. Enzyme Microb. Technol. 34 (1), 26-32 (2004).
- Gombotz, W. R., Wee, S. F. Protein release from alginate matrices. Adv Drug Deliv Rev. 31 (3), 267-285 (1998).
- Smrdel, P., Bogataj, M., Mrhar, A. The influence of selected parameters on the size and shape of alginate beads prepared by ionotropic Gelation. Sci Pharm. 76 (1), 77-89 (2008).
- Idris, A., Wahidin, S. Effect of sodium alginate concentration, bead diameter, initial pH and temperature on lactic acid production from pineapple waste using immobilized Lactobacillus delbrueckii. Process Biochem. 41 (5), 1117-1123 (2006).
- Lee, K. Y., Mooney, D. J. Alginate: properties and biomedical applications. Prog. Polym. Sci. 37 (1), 106-126 (2012).
- Chen, X. -. H., Wang, X. -. T., et al. Immobilization of Acetobacter sp. CCTCC M209061 for efficient asymmetric reduction of ketones and biocatalyst recycling. Microb. Cell Fact. 11 (1), 119-131 (2012).
- Yadav, V. G., et al. The future of metabolic engineering and synthetic biology: Towards a systematic practice. Metab. Eng. 14 (3), 233-241 (2012).
- Demain, A. L. From natural products discovery to commercialization: a success story. J Ind Microbiol Biotechnol. 33 (7), 486-495 (2006).
- Baneyx, F., Mujacic, M. Recombinant protein folding and misfolding in Escherichia coli. Nature Biotechnol. 22 (11), 1399-1408 (2004).
- De Marco, A., Deuerling, E., Mogk, A., Tomoyasu, T., Bukau, B. Chaperone-based procedure to increase yields of soluble recombinant proteins produced in E. coli. BMC Biotechnol. 7, 32-40 (2007).
- Terpe, K. Overview of bacterial expression systems for heterologous protein production: from molecular and biochemical fundamentals to commercial systems. Appl. Microbiol. Biotechnol. 72 (2), 211-222 (2006).
- Alper, H., Fischer, C., Neviogt, E., Stephanopoulos, G. Tuning genetic control through promoter engineering. PNAS. 103 (8), 12678-12683 (2006).
- Salis, H. M., Mirsky, E. A., Voigt, C. A. Automated design of synthetic ribosome binding sites to control protein expression. Nat. Biotechnol. 27 (10), 946-950 (2009).
- Riaz, Q. U., Masud, T. Recent trends and applications of encapsulating materials for probiotic stability. Crit Rev Food Sci Nutr. 53 (3), 231-244 (2013).
- Hossain, G. S., Li, J., et al. One-step biosynthesis of α-keto-γ-methylthiobutyric acid from L-methionine by an Escherichia coli whole-cell biocatalyst expressing an engineered L-amino acid deaminase from Proteus vulgaris. PloS one. 9 (12), e114291 (2014).
- Bhushan, B., Pal, A., Jain, V. Improved enzyme catalytic characteristics upon glutaraldehyde cross-linking of alginate entrapped xylanase Isolated from Aspergillus flavus MTCC 9390. Enzyme Res. (218704), (2015).
- Chen, R. Bacterial expression systems for recombinant protein production: E. coli and beyond. Biotech Adv. 30 (5), 1102-1107 (2012).
- Truppo, M. D., Hughes, G. Development of an improved immobilized CAL-B for the enzymatic resolution of a key intermediate to odanacatib. Org. Process Res. Dev. 15 (5), 1033-1035 (2011).
- Twala, B. V., Sewell, B. T., Jordaan, J. Immobilisation and characterisation of biocatalytic co-factor recycling enzymes, glucose dehydrogenase and NADH oxidase, on aldehyde functional ReSyn polymer microspheres. Enzyme Microb. Technol. 50 (6-7), 331-336 (2012).
- Wang, X. -. T., et al. Biocatalytic anti-Prelog stereoselective reduction of ethyl acetoacetate catalyzed by whole cells of Acetobacter sp. CCTCC M209061. J. Biotechnol. 163 (3), 292-300 (2013).
- Rios-Solis, L., et al. Modelling and optimisation of the one-pot, multi-enzymatic synthesis of chiral amino-alcohols based on microscale kinetic parameter determination. Chem. Eng. Sci. 122, 360-372 (2015).
- Wang, B., Barahona, M., Buck, M. A modular cell-based biosensor using engineered genetic logic circuits to detect and integrate multiple environmental signals. Biosens Bioelectron. 40 (1), 368-376 (2013).
- Saratale, R. G., Saratale, G. D., Kalyani, D. C., Chang, J. S., Govindwar, S. P. Enhanced decolorization and biodegradation of textile azo dye Scarlet R by using developed microbial consortium-GR. Bioresour. Technol. 100 (9), 2493-2500 (2009).
- Malik, A. Metal bioremediation through growing cells. Environ. Int. 30 (2), 261-278 (2004).
- Bazot, S., Lebeau, T. Effect of immobilization of a bacterial consortium on diuron dissipation and community dynamics. Bioresour. Technol. 100 (18), 4257-4261 (2009).
- Brethauer, S., Studer, M. H. Consolidated bioprocessing of lignocellulose by a microbial consortium. Energy Environ Sci. 7 (4), 1446 (2014).
- Malusá, E., Sas-Paszt, L., Ciesielska, J. Technologies for beneficial microorganisms inocula used as biofertilizers. Sci World J. 2012 (491206), (2012).
- Brune, K. D., Bayer, T. S. Engineering microbial consortia to enhance biomining and bioremediation. Front Microbiol. 3 (203), (2012).
