A largo plazo de medida de la presión arterial en ratones con libertad de movimientos mediante telemetría
Summary
The goal of this protocol is to assess systemic blood pressure in conscious freely moving mice using implantable radio-telemetry devices.
Abstract
Durante el desarrollo de nuevos agentes vasoactivos, control de la presión sanguínea arterial es crucial para evaluar la eficacia de los nuevos fármacos propuestos. De hecho, la investigación se centra en el descubrimiento de nuevas dianas terapéuticas potenciales utilizando ratones alterados genéticamente requiere una evaluación fiable a largo plazo de la variación de la presión arterial sistémica. Actualmente, el estándar de oro para la obtención de mediciones a largo plazo de la presión arterial en ratones ambulatorios utiliza implantables de radio-transmisores, que requieren canulación de la arteria. Esta técnica elimina la necesidad de inmovilización, de restricción, o anestesiar los animales que introducen el estrés y artefactos durante el muestreo de datos. Sin embargo, el seguimiento de la presión arterial en ratones a través de cateterismo puede ser bastante difícil debido al pequeño tamaño de las arterias. Aquí presentamos una guía paso a paso para ilustrar los pasajes claves cruciales para una exitosa implantación subcutánea de radio-transmisores y c arteria carótidaanulación en ratones. También se incluyen ejemplos de la actividad de la presión arterial a largo plazo tomadas de ratones con libertad de movimientos después de un período de recuperación post-cirugía. Después de este procedimiento permitirá que los registros de presión arterial directa fiables de varios animales al mismo tiempo.
Introduction
La hipertensión es uno de los principales factores de riesgo para enfermedades cardiovasculares, podría decirse que se trata de un importante problema de salud pública tanto en los países desarrollados y en desarrollo 1. Varios modelos animales de hipertensión experimental se han desarrollado para imitar las respuestas hipertensivas como los observados en los seres humanos 2. Entre otros, el ratón ambulatoria representa un modelo excelente para estudiar la génesis y la progresión de la hipertensión que permite en el análisis in vivo de las consecuencias de la exposición crónica a la hipertensión.
La presión sanguínea (BP) de vigilancia en ratones ha ayudado a los investigadores a desentrañar varios mecanismos involucrados en la fisiología y la patofisiología de enfermedades tales como la hipertensión y la insuficiencia cardíaca 3, 4. De hecho, la manipulación del genoma de ratón permitió la generación de modelos de genes transgénicos o de orientación adecuado para el estudio de la hipertensión 5, 6. Sin embargo, incluso una manipulación suavede los ratones conscientes induce emociones que potencialmente pueden introducir artefactos durante la adquisición de datos, mientras que el uso de la sedación o tranquilizantes afectan profundamente la presión arterial 7. Estos aspectos son particularmente importantes y deben tenerse en cuenta a la hora de intentar monitorización de la PA a largo plazo.
Hay varias maneras de grabar BP en ratones, y una comparación entre las técnicas más comunes disponibles en la actualidad se ha discutido en otra parte 8, 9. Sin embargo, las recomendaciones de la AHA para la medición BP concluyeron que la medición intra-arterial de la presión arterial se prefiere generalmente debido a su capacidad para medir directamente BP durante un período prolongado de tiempo 10. Radiotelemetría junto con la medición directa de la presión arterial es el método del estado de la técnica para el control de las funciones fisiológicas del despierta y se mueve libremente animales de laboratorio y reducir al mínimo el estrés y artefactos asociados con el medio ambiente-9, 11.Radiotelemetría ofrece la posibilidad de recopilar automáticamente la presión arterial, la frecuencia cardíaca, la temperatura corporal y la actividad de los animales de varios animales conscientes.
Aunque esta metodología se está volviendo muy popular en muchos laboratorios, la implantación de radio-telemetría en ratones puede ser técnicamente difícil. Aquí se muestra un protocolo de paso a paso que ilustra cómo implantar un transductor de presión en ratones. La técnica implica la inserción subcutánea de la sonda en el cuerpo del ratón, el canal del catéter hasta el cuello y hacia adelante cerca del arco aórtico a través de la arteria carótida izquierda. datos remotamente capturadas se muestran en vivo en el monitor de la computadora. Los datos también se almacenan para su análisis "fuera de línea".
Protocol
Representative Results
Discussion
Implantable radiotelemetría ha mejorado significativamente en la última década; tamaño de la sonda más pequeño hace que el implante menos traumático para el animal, vida de la batería prolongada ayuda a reducir los costes, y las frecuencias telémetro independientes eliminar la diafonía entre los receptores. La telemetría se considera el método del estado de la técnica para recoger una amplia variedad de parámetros fisiológicos se mueva libremente animales sin los artefactos asociados con el uso de restric…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by the National Institutes of Health (NIH/NHLBI) [Grant no. HL114869] and the support from UTHSC to SM.
Materials
| Small animal anesthesia system | Kent Scientific Corp, Torrington, Connecticut, USA | low-Flow small animal anesthesia system | |
| Pad warmer and mouse termometer | Kent Scientific Corp, Torrington, Connecticut, USA | allows monitoring body temperature, and homeothermic control in small animals. | |
| Binocular Microscope | Kent Scientific Corp, Torrington, Connecticut, USA | KSCXTS-1121 | binocular body with boom stand pole and top LED. |
| Hemostat Forceps | Kent Scientific Corp, Torrington, Connecticut, USA | INS750451 | used to clamp blood vessels or tag sutures |
| Small metal Clips, 7mm, Stainless Steel | Kent Scientific Corp, Torrington, Connecticut, USA | INS750344 | used for skin closure |
| Betadine solution | Purdue Products L.P., Stamford, CT, USA | NDC-67618-150-01 | 10% povidone iodine topical solution |
| Normal saline solution | Abott Laboratories | 04930-04-10 | Needed for preventing tissue from drying. |
| Nair (Hair remover lotion) | Needed for fur removal from the site of incision/surgery. | ||
| Braide silk suture | Teleflex Medical OEM, Coventry, Connecticut, USA | Size 5.0, 6.0, 7.0 | |
| Ethanol | 2716 | 70% ethanol for disinfection | |
| Spring scissors | Fine Science Tool | 15000-10 | for minor dissection |
| Scissors (angled to side) | Fine Science Tool | 14063-011 | No. 3 handle |
| Scalpel blade | 2976-0 | No. 10 | |
| Forceps (curved) | Fine Science Tool | 11150-10 | for holding tissue |
| Forceps (straight) | Fine Science Tool | 11151-10 | for holding tissue |
| Needle holder | Fine Science Tool | 12002-12 | for suturing |
| Fine needle nose Forceps | Fine Science Tool | ||
| Isoflurane | Henry Schein Animal Health, Melville, New York, USA | a general inhalation anesthetic agent | |
| Sterilizer | Benchmark Scientific, 116 Corporate Blvd, South Plainfield, NJ, USA | B1000 | sterilize surgical tools in 5-10 seconds using infrared heating |
| Gauze Pads | Johnson & Johnson, New Brunswick, NJ, USA | JJ8513 | to use for wound cleaning, prepping, scrubbin or dressing. |
| Telemetry Device | Data Sciences International, St. Paul, MN, USA | DSI-PA-C10 | to record blood pressure in freely moving mice |
| Telemetry receiver system coumpled with a PC | Data Sciences International, St. Paul, MN, USA | ||
| small Tubing | Instech Laboratories, Plymouth Meeting, PA USA | BTPE-90 | |
| Vessel Cannulation Forceps, 13cm, 0.5mm OD | World Precision Instruments | 503374 | special vessel cannulation forceps. |
| Tissue adhesive | 3M Animal Care Products, St. Paul, MN, USA | NAC No.: 11380041 | use to close minor wounds, often eliminating the need for sutures and/or bandages |
| Weighing scale | BB300 | Precision Analytical Laboratory Balance |
Referências
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