自发性乳腺癌转移的原位小鼠模型
Summary
原位乳腺癌原发肿瘤模型和手术切除原发肿瘤，延长生命鼠标产生自发转移的描述。肿瘤的生长和发展进行监测和通过萤光素酶荧光成像定量。
Abstract
转移是乳腺癌患者的死亡的首要原因。该机制癌细胞转移，包括乳腺癌转移底层，在很大程度上是未知的，是在癌症研究的焦点。各种乳腺癌自发转移小鼠模型已经建立。在这里，我们报告的简化程序，建立原位移植乳腺癌原发灶和由此产生的自发转移，模仿人类乳腺癌转移。用生物发光活肿瘤成像相结合，该小鼠模型允许肿瘤生长和进展动力学进行监测和定量。在这种模式下，4T1-吕克乳腺癌细胞的低剂量（1×10 4个细胞），使用结核菌素注射器注入BALB / c小鼠乳腺脂肪垫。小鼠用萤光素注射，并在使用生物发光成像系统的不同时间点成像。当原发肿瘤生长的大小限制为在IACUC批准的协议（APPRoximately 30天），将小鼠在2％异氟烷和氧气的流量恒定麻醉。肿瘤区域用70％乙醇灭菌。肿瘤周围的小鼠皮肤切除以暴露其用一对无菌剪刀除去肿瘤。原发肿瘤的切除延伸的4T-1荷瘤小鼠的存活一个月。小鼠然后重复成像的转移性肿瘤扩散到远处器官。治疗剂可施用在这一点上，以抑制肿瘤的转移。这种模式是在主站点和进展动力学远处器官量化乳腺癌细胞的生长简单而敏感，因此是研究乳腺癌的生长和恶化，并在体内测试抗转移治疗和免疫治疗剂的优秀典范。
Introduction
根据美国癌症协会，乳腺癌是女性癌症在美国是最常见的诊断形式。在最近开发的靶向疗法组合早期检测已经显著减少乳腺癌的死亡率在过去二十年。然而，乳腺癌仍然是妇女在美国1癌症相关死亡的第二大原因。大多数乳腺癌患者的死亡是由于肿瘤细胞转移。不幸的是，大多数的乳腺癌是浸润性和经常转移至淋巴结，并随后到远处器官，包括骨，肺，肝和脑。1,2-目前转移性乳腺癌没有有效的治疗方法。因此，化疗和免疫治疗剂的发展来抑制转移性乳腺癌具有十分重要的意义。
各种乳腺癌自发转移小鼠模型bEEN开发研究乳腺肿瘤细胞进展和转移，也可以用作模型治疗剂的发展的分子机制。1,3-5然而，大多数这些小鼠模型是遗传肿瘤模型，虽然优良模型机械研究，不适合用于测试治疗剂，因为转移需要几个月在这些遗传模型来开发，因此需要的抗癌剂的昂贵长期施用。在活体小鼠6,7-监测肿瘤进展也是技术上具有挑战性。相反，移植乳腺癌转移模型具有短期肿瘤进展和在活体小鼠的肿瘤进展的容易跟踪的优点。在4T1原位乳腺癌自发转移的小鼠模型是这样的移植肿瘤模型8在这个模型中，乳腺肿瘤细胞移植到乳房脂肪垫建立原发性肿瘤结节。原发性肿瘤然后可在人类乳腺癌患者进行手术切除。 4T1肿瘤细胞是高度侵入性的。8,9，3,10几乎所有携带肿瘤的小鼠发展转移在30天后肿瘤移植到乳房脂肪垫后。然而，4T1肿瘤的原发部位长出积极与肿瘤大小往往超出了允许的大多数动物协议的限制。在这个阶段中，转移往往是微转移。因此，重要的是去除原发肿瘤，以允许用于测试治疗剂转移的进展。这里，我们报告建立原发性肿瘤移植，手术切除原发肿瘤和4T1肿瘤的生长和发展在体内的生物发光基于成像的量化的一个简单且敏感的程序。
Protocol
Representative Results
Discussion
许多类型的乳腺癌转移的转基因小鼠模型已经被开发。1这些转基因小鼠具有高的肿瘤的发病率范围从60到100％。然而，这些转基因小鼠的转移发生率比肿瘤发病率要低得多（14 – 100％）。肿瘤细胞转移至LN和肺中的大多数乳腺癌转移的这些转基因小鼠模型。转移延迟从模型变化以模拟和从2〜8个月的范围内。6,11-16乳腺癌转移的这些转基因小鼠模型可用于研究乳腺癌转移基础的遗传…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Supported by grants from the National Institute of Health grants CA133085, CA182518 and CA185909 (to KL) and VA Merit Review Award BX001962 (to KL).
Materials
| Ami-X Imaging System | Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ | ||
| IsoTec SurgiVet | Anesthesia Service & Equipment , Inc., Atlanta, GA | ||
| AutoClip Physicians Kit | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427638 | |
| 9 MM AutoClip Applier | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427630 | |
| 9 MM AutoClip Remover | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427637 | |
| 9 MM AutoClip Wound Clip | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427631 | |
| Sharp-Pointed Dissecting Scissors | Fisher | 8940 | |
| Dissecting Fine-Pointed Forceps | Fisher | 8875 | |
| 1/2 CC 27G1/2 tuberculin syringe | Becton Dickinson and Co. NJ | 305620 | |
| RPMI 1640 medium | Mediatech Inc | 10-040-CV | |
| PBS | Mediatech Inc | 21-040-CV | |
| 70% Ethanol | Ultrapure-usa.com | ||
| Trypsin-EDTA | Mediatech Inc | 25-040-CI |
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