الغدد الصماء المركبات (EDC) تشكل خطرا كبيرا على البيئة المائية. محطات معالجة مياه الصرف الصحي البلدية المساهمين في قوة استروجين من المياه السطحية. منهجية المنصوص عليها في هذه الورقة يسمح لتقييم فعالية وملاءمة عمليات معالجة مياه الصرف الصحي، فيما يتعلق بسحب EDC.
Endocrine Disrupting Compounds pose a substantial risk to the aquatic environment. Ethinylestradiol (EE2) and estrone (E1) have recently been included in a watch list of environmental pollutants under the European Water Framework Directive. Municipal wastewater treatment plants are major contributors to the estrogenic potency of surface waters. Much of the estrogenic potency of wastewater treatment plant (WWTP) effluents can be attributed to the discharge of steroid estrogens including estradiol (E2), EE2 and E1 due to incomplete removal of these substances at the treatment plant. An evaluation of the efficacy of wastewater treatment processes requires the quantitative determination of individual substances most often undertaken using chemical analysis methods. Most frequently used methods include Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GCMS/MS) or Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LCMS/MS) using multiple reaction monitoring (MRM). Although very useful for regulatory purposes, targeted chemical analysis can only provide data on the compounds (and specific metabolites) monitored. Ecotoxicology methods additionally ensure that any by-products produced or unknown estrogenic compounds present are also assessed via measurement of their biological activity. A number of in vitro bioassays including the Yeast Estrogen Screen (YES) are available to measure the estrogenic activity of wastewater samples. Chemical analysis in conjunction with in vivo and in vitro bioassays provides a useful toolbox for assessment of the efficacy and suitability of wastewater treatment processes with respect to estrogenic endocrine disrupting compounds. This paper utilizes a battery of chemical and ecotoxicology tests to assess conventional, advanced and emerging wastewater treatment processes in laboratory and field studies.
المخاوف بشأن الآثار الضارة للمركبات الغدد الصماء على الحياة البرية في مجال الصحة الإنجابية وأدى الاتحاد الأوروبي لوضع اثنين من المواد استروجين (استراديول وايثينيل استراديول) على "قائمة المراقبة" تحت الإطار التوجيهي للمياه (WFD). EDC تشمل مجموعة متنوعة من فئات الكيميائية، بما في ذلك الاستروجين الطبيعية والاصطناعية الستيرويد، والأدوية، والمبيدات الحشرية، والمواد الكيميائية الصناعية ومكونات المنتجات الاستهلاكية مع الآثار السلبية المعروفة على الحياة البرية. بعض هذه المركبات قد يحتمل أن تؤثر على الصحة البشرية 1.
وقد أظهرت الأبحاث أن مياه الصرف من محطة معالجة مياه الصرف هي استروجين لصيد السمك (2) ونتيجة لذلك العديد من المياه المستقبلة أيضا استروجين لصيد السمك 3. وقد تجلى ذلك أولا من خلال المسوحات الوطنية في المملكة المتحدة والتي أظهرت زيادة تركيزات vitellogenin (أ الإناث محدد البروتين صفار السلائف 4) في الدم من الذكور الاسماك البرية وقبل ارتفاعالتكافؤ من ثنائيي (وضع البيض و / أو القنوات التناسلية للإناث في الخصية من الأسماك الذكور) في أنواع الأسماك كثير البيض عادة 5،6.
معالجة مياه الصرف الصحي التقليدية هي عملية من ثلاث مراحل تتكون من الفحص الأولي تليها المعالجة الأولية والثانوية التي يزيل المنحل والمواد العالقة العضوية على حد سواء. فعالية إزالة الفردية EDC تعتمد على الخصائص الفيزيائية للمواد وعلى فعالية عملية المعالجة المطبقة. بالنسبة لكثير من إزالة EDC عبر الامتزاز والتدهور البيولوجي يمكن أن تكون كبيرة ولكن غير مكتملة. المعالجة الثلاثية، مثل ترشيح الرمل، يمكن أن تكون فعالة في زيادة إزالة EDC 7 في حين معالجة متقدمة باستخدام الأكسدة المتقدمة (على سبيل المثال الأوزون) أو الكربون المنشط يمكن أن تكون فعالة في تحقيق الإزالة الكاملة بالقرب 7.
تقييم أي تكنولوجيا جديدة لمعالجة مياه الصرف الصحي نيس لتحديد مدى فعالية العملية المقترحة في إزالة EDC. بطارية من الاختبارات، بما في ذلك التحليل الكيميائي المستهدفة إلى جانب اختبار السمية الإيكولوجية، وذلك باستخدام المجراة في اختبارات بيولوجية المختبر، وتوفر بيانات شاملة لهذا الغرض. على الرغم من المفيد جدا لأغراض تنظيمية، أن التحليل الكيميائي المستهدفة فقط توفير بيانات عن المركبات (ونواتج محددة) رصدها. اختبارات بيولوجية تسمح بالإضافة إلى "الكشف" من الآثار السلبية لنواتج الأيض ولدت معالجة مياه الصرف الصحي التحول من المنتجات التي لولاها يمكن كشفها 8،9. وتصف هذه الورقة استخدام بطارية من فحوصات مختبر السمية الكيميائية وتقييم فعالية عدد من عمليات معالجة مياه الصرف الصحي المتقدمة والناشئة في إزالة قوة استروجين من النفط الخام ومياه الصرف الصحي المعالجة والمياه المستقبلة.
محطات معالجة مياه الصرف الصحي هي الطريق الرئيسي لتلوث المياه السطحية مع EDC. تقييم فعالية إزالة النشاط الغدد الصماء من عمليات المعالجة التقليدية والمتقدمة أو الناشئة يتطلب استخدام مجموعة متنوعة من فحوصات الكيميائية والبيولوجية. التحليل الكيميائي باستخدام التحليل غير المستهدفة واستهدفت يوفر البيانات النوعية أو الكمية على فعالية إزالة المكونات الفردية، وبالتالي يتيح إجراء تقييم ليتم وفقا لمعايير الجودة البيئية أو توقع أي تركيز تأثير للمركبات أو مخاليط من مركبات تحليلها.
جيل من منتجات التحول الناتجة من تمعدن غير الكامل للمواد التالية العلاج ووجود مكونات النشطة بيولوجيا غير معروفة في مياه الصرف الصحي يحد من جدوى الاختبارات الكيميائية وحدها. مزيج من المجراة في اختبارات بيولوجية المختبر في تركيبة مع كيمياء تحليليةيوفر فحص راي مجموعة أدوات مفيدة لتحديد مدى فعالية إزالة EDC من خلال عمليات معالجة مياه الصرف الصحي الناشئة. هذه الاختبارات، عندما أجرت جنبا إلى جنب مع معايير الجودة المائية التقليدية وغيرها من النقاط النهائية السمية والميكروبيولوجية تسمح لتقييم نقدي لتقنيات معالجة مياه الصرف الصحي الحالية والناشئة.
من المهم أن نلاحظ أن الخميرة شاشات هرمون الاستروجين على أساس (على سبيل المثال، YES) ليست فقط فحوصات في المختبر لتحديد قوة استروجين من المواد الكيميائية ومياه الصرف الصحي. وقد تم تطوير عدد من المقايسات ستابلي مقرها خلايا الثدييات أيضا، على سبيل المثال، ER-CALUX 27 و hERα-هيلا-9903 28 مع خلايا سرطان الثدي البشرية أو الخلايا السرطانية في عنق الرحم على التوالي. وقد قارن نعم لفحوصات خلية مقرها الثدييات مماثلة، وقد وجدت لديهم مستوى عال مماثل من التكاثر، والحقيقية السلبية الأسعار تعريفا استروجين الإيجابية والحقيقية 29، althoلاف يعتبر في بعض الأحيان إلى أن تكون أقل قليلا حساسة 27. واحد يستفيد من الخميرة مقرها المقايسات مراسل هي أنه في مختبرات بدون خبرة كبيرة مع ثقافة خلايا الثدييات ونعم يمكن اعتمادها بشكل أكثر سهولة، كما أنه يتطلب تدابير المكافحة الحيوية أقل صرامة وتقنيات معقمة (نعم يمكن القيام بها على أعلى مقاعد البدلاء إذا لزم الأمر) . تتطلب فحوصات الخلية البشرية يستند أيضا CO 2 الحاضنات وluminometers مقارنة مع الحاضنة وصفيحة القراء القياسية المستخدمة في نعم. المقايسات مراسل هرمون الاستروجين على أساس اثنين من الخميرة (نعم، خميرة الخباز وA-نعم، adeninivorans Arxula) يجري حاليا مسارات بين المختبرات للتحقق من صحة ISO 19040 "جودة الماء – تقدير للإمكانات استروجين من المياه والصرف الصحي" تسليط الضوء على الصناعات الفائدة في هذه التقنيات.
وهناك عدد من أوجه القصور في الأساليب المذكورة والتي تشمل تلوث محتملللعينات أثناء أخذ العينات، وتخزين العينات وتحليلها مع المواد استروجين النابعة من البيئة الحقل أو المختبر أو عن طريق التلوث البشري (على سبيل المثال، المواد البلاستيكية، السطحي، ومنتجات العناية الشخصية). وهذا النوع من التلوث في مقايسة نعم (أو غيرها من الخلية المقايسات مراسل أساس) رفع الخلفية وتؤثر على استخدام الفحص. عينات الماء أو المذيبات المخزنة في زجاجات البلاستيك يمكن أن يؤدي بسهولة ايجابيات كاذبة. السلبيات كاذبة هي أيضا مثيرة للقلق كما تتطلب كلا LCMS / MS وفحص نعم SPE للتركيز هرمون الاستروجين إلى مستويات يمكن اكتشافها. مصفوفة، واختيار SPE الماصة وشطف المذيبات يمكن أن تؤثر على كفاءة الاستخراج وأنواع المركبات مزال. استخدام خراطيش C18 SPE لاستخراج باستخدام الشروط المبينة في هذا البروتوكول قد تولد التحيز السلبي، والمركبات القطبية العالية والأساسية وسيتم الاحتفاظ سيئة من قبل الماصة. وعلاوة على ذلك، هذا البروتوكول يتطلب إعادة تشكيل شاطف نعم مزال من methanرأ إلى الايثانول عن طريق التبخر إلى جفاف النيتروجين ممول مما أدى إلى فقدان المتطايرة. ونتيجة لذلك البروتوكول يمكن أن توفر التقليل من النشاط استروجين من العينات التي تم فحصها. هذه القيود هي أهمية خاصة عند النظر في فحص نعم كمركبات غير معروفة أو غير متوقعة قد غاب، لأنهم لم يتم استخراجها أو ضائعون بسبب التبخر. وعلاوة على ذلك، فإن تقنية LCMS / MS يجعل استخدام المعايير الداخلية وصفت لتصحيح الإنعاش؛ هذا النهج لا يمكن استخدامها مع مقايسة نعم.
وتشمل قيودا كبيرة في الجسم الحي اختبار النفايات السائلة عالية التكلفة والوقت اللازم لتقييم بالمقارنة مع الطرق في المختبر. حاليا استخدام اختبارات الجنين الأسماك للكشف عن النشاط استروجين محدودة. ومع ذلك، كان هناك بعض النجاح في إنتاج هرمون الاستروجين المعدلة وراثيا استجابة متوهجة أجنة الأسماك 30، والتي يمكن أن تكون لها تطبيقات في المستقبل. البلم المنوة (المستخدمة في هذا protocرأ) هي الأنواع مختبر المشتركة وVTG الاستقراء في ذكور السمك هو موثقة جيدا، علامة الحيوي من التعرض للاستروجين ومقياس كمي من المياه العادمة إيداق 22 أو غيرها من المركبات استروجين أو مخاليط 31. تم التحقق من صحة المبادئ التوجيهية للاختبار منظمة التعاون والتنمية للمواد الكيميائية الغدد الصماء باستخدام الكبار المنوة، الميداكا اليابانية والزرد 32،33، مع VTG كونه العلامات البيولوجية الحساسة من التعرض هرمون الاستروجين في جميع الأنواع الثلاثة. ومع ذلك، VTG تحريض لا ترتبط مباشرة إلى انخفاض الإنجاب وذلك من عواقب بيئية التعرض مياه الصرف الصحي، كما رأينا في المبرح روتش ثنائيي 3. من ناحية أخرى، الصرصار ليست كلاسيكية "الأنواع المختبر للبحث السمية الإيكولوجية بسبب الحجم الكبير، والوقت جيل طويل (2-3 سنوات لتصل إلى مرحلة النضج الجنسي)، على غرار الإنجاب. وضع البيض مجموعة (تربية) يحدث مرة واحدة في السنة، وصعوبة تحديد الذكور من الإناث (بخلاف خلالموسم وضع البيض). ومع ذلك، فقد هذا النوع كثير البيض عادة يتم دراستها بشكل جيد جدا في المملكة المتحدة، ويرجع ذلك إلى اكتشاف أن المصب من المياه المستعملة استروجين، أظهرت ذكور السمك اضطرابات في الغدد الصماء الخاصة بهم (على سبيل المثال، وجود vitellogenin أنثى محددة في دمائهم) والتشريح المرضي (ovotestes – وضع البيض في الخصية و / أو القنوات التناسلية للإناث) 5،6. ولذلك، وتطبيقها في المستقبل من هذه البروتوكولات، روتش (أو الأنواع المماثلة) يمكن أن تكون مفيدة الأنواع الحارس البرية لإظهار إذا شهدت تحسينات حقيقية إلى نوعية مياه الصرف الصحي (وانخفاض إيداق) في الأنهار تلقي نفايات السائلة المعالجة المتقدمة. أنها يمكن أيضا أن تستخدم في نهاية أنظمة الأنابيب لمراقبة وتحسين تكنولوجيا النفايات السائلة من المصانع نطاق تجريبي 7. وعند النظر في أي الأنواع لاستخدامها في عمليات التقييم في مياه الصرف الصحي الجسم الحي هناك علاقة تبادلية بين اختبار باستخدام الأنواع مختبر سريعة نسبيا والتي تسيطر عليها مقارنةيعد ميداني قائم، ولكن أكثر أهمية للبيئة، اختبار باستخدام الأنواع المحلية. ومع ذلك، مثل في التقييمات المجراة ذات تكلفة مرتفعة وينبغي أن ينظر فقط كما وتقام المباراة النهائية للاختبارات التقييم باستخدام التحليل الكيميائي التالية وفي فحوصات المختبر.
وتشمل الخطوات الحاسمة ضمن البروتوكولات المذكورة إعداد والتعامل مع العينات والأواني الزجاجية (أي والزجاجات ومعدات أخذ العينات يجب أن تكون مرحلة ما قبل المعالجة مع سطح مناسب نشط عامل تنظيف) لتجنب تلوث عينات من الملوثات البيئية بما في ذلك الحد من الاتصال من العينات مع البلاستيك و غيرها من المواد التي يمكن أن تنتج ايجابيات كاذبة. وهذا هو نفس القدر من الأهمية عند تصميم وبناء نظم تعرض الأحواض المائية والأسماك. من الناحية المثالية أحواض (أسهم الاسكان وأثناء التعرض) يجب أن تبنى من مواد مع انخفاض امتصاص 32 مع خطر التلوث الحد الأدنى. الفولاذ المقاوم للصدأ يمكن استخدامها لخزانات النفايات السائلة أو الماء.في حين يفضل دبابات من الزجاج والبناء للدبابات الأسماك (لأن هذا يوفر أيضا مراقبة سهلة من الأسماك). وينبغي تجنب استخدام أنابيب من البلاستيك درجة منخفضة أو أنابيب 32، بولي كلوريد الفينيل 34 و ABS يمكن استخدامها إذا "محنك بشكل صحيح"، أي، من اليسار إلى يتسرب أي ملوثات في المياه الجارية تخفيف لا يقل عن 12 ساعة قبل استخدامها. وقد استخدمت الطبية الصف سيليكون أنابيب بنجاح في منشأتنا لتسليم مضخة تحوي المواد الكيميائية والمياه العادمة / التخفيف من الدبابات. فضلا عن النظر في تلوث استروجين في بناء وتشغيل النظام المائية، فمن المهم أيضا أن نفكر في النظام الغذائي من الأسماك. تم العثور على العديد من الأطعمة الأسماك ملاءمة لتكون استروجين لصيد السمك. ولذلك فمن المهم لاختبار أي الأطعمة للنشاط (على سبيل المثال، في شاشة الاستروجين الخميرة، انظر بيريسفورد وآخرون. 14) قبل استخدامها في هذه الأنواع من الدراسات.
استكشاف الأخطاء وإصلاحهاالتحليل الكيميائي أو نعم بروتوكولات الفحص يتم تبسيط إذا عينات ضمان الجودة بما في ذلك السفر متعددة، والمختبرات ويتم تحليل الفراغات المذيبات جنبا إلى جنب مع الضوابط الإيجابية وعينات حقيقية للقضاء على النتائج السلبية الإيجابية الكاذبة والزائفة وصفها. إيجابي (على سبيل المثال، EE2) والسلبية وينبغي أيضا دائما أن تستخدم (الماء فقط تمييع) التحكم في المجراة فحوصات للتأكد من حساسية من العلامات البيولوجية البيولوجية المتوقعة أو نقطة النهاية (أي VTG أو التشريح المرضي)، والسماح لأي تلوث غير متوقع ليتم الكشف عن ( على سبيل المثال، من مجموعة تجريبية تصل، والنظام الغذائي، أو المياه تمييع). يجب التحقق من صحة أي تعديلات في البروتوكول قبل إجراء أي دراسة.
مع تنظيم أكثر صرامة للمركبات استروجين تدخل إلى البيئة من خلال نفايات محطات معالجة مياه الصرف فمن يتصور أن تقنيات معالجة مياه الصرف الصحي أكثر فعالية وسوف تحتاج إلى تطوير. بطارية من الاختبارات وصفها في هذه المخطوطة مجاملة للاختبارات تقييم السمية البيئية والكيميائية تطبق عادة لمعالجة مياه الصرف الصحي تصريف مياه الصرف. لذلك، تطبيقها في المستقبل من هذا النوع من البطاريات شاملة للاختبار يجب تمكين مطوري التكنولوجيا مياه الصرف الصحي، ومشغلي المصانع، لتنفيذ التصاميم الأكثر آمنة بيئيا النظر في أفضل الطرق لإزالة كل من المواد الكيميائية استروجين ينظم محددة والنشاط البيولوجي بشكل عام.
The authors have nothing to disclose.
Projects presented in this paper were funded by Severn Trent Water and Brunel University London. The authors would like to thank Alan Henshaw and John Churchley for providing field and laboratory assistance. T.J.C. thanks the Heinz Endowments for support. M.R.M. thanks the Steinbrenner Institute for a Steinbrenner Doctoral Fellowship and Carnegie Mellon University for a Presidential Fellowship.
Wellwash Versa plate washer | Thermo Scientific | 5165010 | |
Plate reader | Molecular Devices | SpectraMax 340PC | |
Incubator | Memmert | INB 400 | 37oC incubation required for carp assay |
Fisherbrand whirlimixer | Fisher Scientific | 13214789 | |
Icemaker | Scotsman | AF80 | |
12-Channel F1 digital multichannel pipette | Thermo Scientific Finnpipette | 4661070 | |
ELISA kits | Biosense Laboratories | V01018401-096 (Fathead minnow) V01003402-096 (Carp) |
|
Microfuge tubes, 0.5ml | Alpha labs | LW2372 | |
Microfuge tubes, 1.5ml | Alpha labs | LW2375 | |
Sulphuric acid, 95-98% | Sigma-Aldrich | 258105 | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Histology | |||
Tissue processor | Leica Biosystems | TP1020 | |
Wax dispenser | Thermo Scientific Raymond Lamb | E66HC | |
Metal embedding mold | Leica Biosystems | Various | |
Hot plate | Thermo Scientific Shandon | 3120063 | |
Cold plate (EG1150 C) | Leica Biosystems | 14038838037 | |
Heated forceps (EG F) | Leica Biosystems | 14038835824 | |
Microtome | Leica Biosystems | RM2235 | |
Paraffin section floatation bath | Electrothermal | MH8517 | |
Slide drying bench | Electrothermal | MH6616 | |
Stainmate automated stainer | Thermo Scientific Shandon | E103/S10L | |
Cassettes, Histosette II, biopsy | Simport | M493 | |
Paraffin wax | Thermo Scientific Raymond Lamb | W1 | |
Histo-Clear II | National Diagnostics | HS-202 | |
IMS (ethanol mix), IDA99 | Tennants | ID440 | |
Polysine adhesion slides | Thermo Scientific Gerhard Menzel | J2800AMNZ | |
Cover slips, 22x50mm | VWR | 631-0137 | |
Histomount | National Diagnostics | HS-103 | |
Haematoxylin Harris GURR | VWR | 351945S | |
Eosin, 1%, aqueous | Pyramid Inovation | S20007-E | |
Fisherbrand slide boxes | Fisher Scientific | 11701486 | |
Microtome blades, MB35 | Thermo Scientific Shandon | 3050835 | |
Bouin’s solution | Sigma Aldrich | HT10132-1L | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Yeast screen | |||
Flow cabinet | Labcaire Systems Ltd | SC12R | |
Cooled incubator | LMS Cooled Incubator | 303 | |
Incubator | Memmert | INB 400 | |
Shaker | Grant | PSU-10i | |
Fisherbrand whirlimixer | Fisher Scientific | 13214789 | |
Plate shaker | Heidolph Titramax 100 | 544-11200-00 | |
12-Channel F1 digital multichannel pipette | Thermo Scientific Finnpipette | 4661070 | |
12-channel pipette, electronic | Sartorius | 735441 | |
96-well flat-bottom microplates | MP Biomedicals Thermo Scientific Nunc Sarstedt |
76-232-05 260860 82.1581.001 |
We have found that these multiwell plates all produce low backgrounds |
HPLC grade water | Rathburn | RH1020 | |
Absolute ethanol | Hayman Kimia | F200238 | |
Potassium phosphate monobasic anhydrous | Sigma-Aldrich | P-5655 | |
Ammonium sulphate | Sigma-Aldrich | A-2939 | |
Potassium hydroxide, pellets | Sigma-Aldrich | P-1767 | |
Magnesium sulfate, anhydrous | Sigma-Aldrich | M-2643 | |
Iron (III) sulfate | Sigma-Aldrich | 307718 | |
L-Leucine | Sigma-Aldrich | L-8912 | |
L-Histidine | Sigma-Aldrich | H-6034 | |
Adenine | Sigma-Aldrich | A-2786 | |
L-Argenine, hydrochloride | Sigma-Aldrich | A-6969 | |
L-Methionine | Sigma-Aldrich | M-5308 | |
L-Tyrosine | Sigma-Aldrich | T-8566 | |
L-Isoleucine | Sigma-Aldrich | I-7403 | |
L-Lysine, hydrochloride | Sigma-Aldrich | L-8662 | |
L-Phenylalanine | Sigma-Aldrich | P-5482 | |
L-Glutamic acid | Sigma-Aldrich | G-8415 | |
L-Valine | Sigma-Aldrich | V-0513 | |
L-Serine | Sigma-Aldrich | S-4311 | |
Thiamine, hydrochloride | Sigma-Aldrich | T-1270 | |
Pyridoxine | Sigma-Aldrich | P-5669 | |
D-Pantothenic acid, hemicalcium salt | Sigma-Aldrich | P-5155 | |
Inositol | Sigma-Aldrich | I-5125 | |
d-Biotin | Sigma-Aldrich | B-4639 | |
D-(+)-Glucose anhydrous; mixed anomers | Sigma-Aldrich | G-7021 | |
L-Aspartic acid | Sigma-Aldrich | A-4534 | |
L-Threonine | Sigma-Aldrich | T-8441 | |
Copper (II) sulfate, anhydrous | Sigma-Aldrich | C-1297 | |
Chlorophenolred-b-D galactopyranoside (CPRG) | Sigma-Aldrich | 10884308001 | |
Glycerol | Sigma-Aldrich | G-2025 | |
17 β-Estradiol | Sigma-Aldrich | E-8875 | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Steroids | |||
Acetone | Rathburn | ||
Acetonitrile | Rathburn | ||
Ammonia solution | Rathburn | ||
Ethylacetate | Rathburn | ||
Copper(II) nitrate. | Sigma-Aldrich | ||
Acetone | Rathburn | ||
Dichloromethane | Rathburn | ||
2, 4, 16, 16-d4-17b-estradiol | CDN Isotopes | ||
2, 4, 16, 16-d4-estrone | CDN Isotopes | ||
2, 4, 16, 16-d4-17a-ethynyl oestradiol. | CDN Isotopes | ||
17b-estradiol | Sigma-Aldrich | ||
Estrone | Sigma-Aldrich | ||
17a-ethynyl oestradiol. | Sigma-Aldrich | ||
Hexane | Rathburn | ||
Hydrochloric acid | Sigma-Aldrich | ||
Methanol | Sigma-Aldrich | ||
Sodium hydrogen carbonate | Sigma-Aldrich | ||
Sodium hydroxide | Sigma-Aldrich | ||
Styrene divinyl benzene cartridge (Isolute ENV+) solid phase extraction cartridge (200 mg/6 ml) | Biotage | ||
Isolute aminopropyl solid phase extraction cartridge (500 mg/6 ml) | Biotage | ||
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Fish study | |||
orange-white silicon manifold tubing 0.63 bore pk 6 | watson marlow | 982.0063.000 | |
straight connectors for 0.5/0.8 bore pk 20 | watson marlow | 999.2008.000 | |
pumsil silicon tubing 0.8 bore 15m | watson marlow | 913.A008.016 | |
200 series multi-channel persitaltic pump | watson marlow | 205CA | |
Silicone tubing x15m (dosing tanks) | vwr | SFM1-3250 | |
silicone tubing x 15m (large for inflow/outflow) | vwr | SFM1-5450 | |
2.5L glass winchester pk 4 | Fisher Scienctific | BTF-505-050B | |
magnetic stir bar 51x8mm pk 10 | Fisher Scienctific | FB55595 | |
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MS222) | sigma aldrich | E10521-10G | |
17α-Ethynylestradiol | sigma aldrich | E4876-100MG | |
Absolute ethanol | Hayman Kimia | F200238 | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
SPE | |||
1/8 inch PTFE tubes 'straws' colour coded pk4 | sigma aldrich | 57276 | |
disposable liners for manifold | sigma aldrich | 57059 | |
filtration tubes without frits 6ml pk 30 | sigma aldrich | 57242 | |
reservior adaptors pk 12 | sigma aldrich | 57020-U | |
stainless steel weight for manifold pk 4 | sigma aldrich | 57278 | |
male luer plug for manifold pk12 | sigma aldrich | 504351 | |
SPE Vacuum Manifold | sigma aldrich | 57265 | |
stop cocks for extraction mainfold (supelco) pk 12 | waters | WAT054806 | |
Sep-Pak Plus C18 cartridge box 50 | waters | WAT020515 | |
Methanol HPLC grade 2.5L | fisher scientific | M/4056/17 | |
7ml glass vials with lids (58x17mm) pk 399 | fisher scientific | TUL-520-031K | |
Absolute ethanol | Hayman Kimia | F200238 | |
vacuum pump e.g. VP Series Vacuum Pump | Camlab | 1136915 |