תרכובות לשבש האנדוקרינית (EDC) להוות סיכון ממשי של הסביבה המימית. מתקני טיהור שפכים עירוניים הם תורמים עיקריים העצמה אסטרוגניים של מים עיליים. המתודולוגיה הניתן במאמר זה מאפשר הערכה של היעילות וההתאמה של תהליכי טיפול בשפכים ביחס להסרת EDC.
Endocrine Disrupting Compounds pose a substantial risk to the aquatic environment. Ethinylestradiol (EE2) and estrone (E1) have recently been included in a watch list of environmental pollutants under the European Water Framework Directive. Municipal wastewater treatment plants are major contributors to the estrogenic potency of surface waters. Much of the estrogenic potency of wastewater treatment plant (WWTP) effluents can be attributed to the discharge of steroid estrogens including estradiol (E2), EE2 and E1 due to incomplete removal of these substances at the treatment plant. An evaluation of the efficacy of wastewater treatment processes requires the quantitative determination of individual substances most often undertaken using chemical analysis methods. Most frequently used methods include Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GCMS/MS) or Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LCMS/MS) using multiple reaction monitoring (MRM). Although very useful for regulatory purposes, targeted chemical analysis can only provide data on the compounds (and specific metabolites) monitored. Ecotoxicology methods additionally ensure that any by-products produced or unknown estrogenic compounds present are also assessed via measurement of their biological activity. A number of in vitro bioassays including the Yeast Estrogen Screen (YES) are available to measure the estrogenic activity of wastewater samples. Chemical analysis in conjunction with in vivo and in vitro bioassays provides a useful toolbox for assessment of the efficacy and suitability of wastewater treatment processes with respect to estrogenic endocrine disrupting compounds. This paper utilizes a battery of chemical and ecotoxicology tests to assess conventional, advanced and emerging wastewater treatment processes in laboratory and field studies.
חששות לגבי תופעות לוואי של תרכובות משיבוש האנדוקרינית על בריאות חיות הבר הרבייה הוביל את האיחוד האירופי להציב שני חומרים אסטרוגניים (אסטרדיול אתיניל-אסטרדיול) על "לרשימת מעקב" במסגרת הנחיית Framework מים (WFD). EDC להקיף מגוון רחב של שיעורים כימיים, כוללים אסטרוגנים סטרואידים טבעיים וסינטטיים, תרופות, חומרי הדברה, כימיקלים תעשייתיים ורכב מוצרים צריכים עם תופעות לוואי ידועות על חיות בר. חלק תרכובות אלה עשויים להשפיע על בריאות האדם פוטנציאל 1.
המחקרים הראו כי קולחי WWTP הם אסטרוגניים לדוג 2 וכתוצאה מכך רבי מי קבלה הם גם אסטרוגניים לדגים 3. זה הוצג לראשונה באמצעות סקרים לאומיים בבריטניה שהראה ריכוזי vitellogenin מוגברים (חלבון חלמון נקבה לנקבה מבשר 4) בדם של דגי ים זכר מראש גבוהערכיויות של אינטרסקס (פיתוח ביצים ו / או צינוריות רבייה נשיות ב testis של דג זכר) במיני דגים gonochoristic בדרך כלל 5,6.
לטיפול בשפכים מקובל הוא בדרך כלל תהליך בן שלושה שלב מורכב סינון ראשוני ואחריו טיפול יסודי ותיכון אשר מסיר הן נמוגות מושעות חומר אורגני. היעילות של הסרת פרט EDC תלויה מאפייני physicochemical של חומרים על האפקטיביות של תהליך הטיפול מיושם. למען סר רבים EDC באמצעות ספיחה והשפלה ביולוגית עשויים להיות משמעותי, אך לא שלם. טיפול שליישונים, כגון סינון חול, יכול להיות יעילה להגדלת הסרת EDC 7 ואילו טיפול מתקדם באמצעות חמצון מתקדם (עבור אוזון למשל) או פחם פעיל יכול להיות יעיל ולהשיג ליד הסרה מלאה 7.
ההערכה של כל טכנולוגיה חדשה לבית טיפול בשפכיםds כדי לקבוע את היעילות של התהליך המוצע להסרת EDC. סוללת בדיקות, כולל ניתוח כימי ממוקדות לצד בדיקות ecotoxicology, באמצעות de vivo ו bioassays במבחנה, מספק מידע מקיף למטרה זו. אמנם מאוד שימושי למטרות רגולטוריות, אנליזה כימית ממוקדת יכולה לספק רק נתונים על התרכובות (מטבוליטים ספציפיים) פיקוח. Bioassays בנוסף לאפשר "גילוי" של תופעות לוואי של מטבוליטים וטרנספורמציה שפכים שנוצר טיפול תוצרי לוואי שאחרת מבלי שיבחינו 8,9. מאמר זה מתאר את השימוש בסוללה של מבחנים כימיים ecotoxicity מעבדה כדי להעריך את היעילות של מספר תהליכים לטיפול בשפכים מתקדמים ומתפתחים הסרת האונות האסטרוגנית של גולמי הביוב מטוהר וקבלת מים.
מתקני טיהור שפכים הם התוואי העיקרי של זיהום מים עיליים עם EDC. הערכת היעילות של הסרת פעילות אנדוקרינית של תהליכי הטיפול הקונבנציונלי, מתקדמים או המתעוררים מחייב שימוש במגוון של מבחני כימי וביולוגי. ניתוח כימי באמצעות ניתוח הלא ממוקד וממוקד מספק מידע איכותי או כמוני על היעילות של הסרת רכיבים בודדים ולכן מאפשר הערכה להתבצע נגד תקני איכות הסביבה או חזה אין ריכוזי אפקט ליצירת התמציות או התערובות של תרכובות המנותחות.
הדור של מוצרי שינוי נובעים מינרליזציה שלם של חומרים לאחר טיפול ואת הנוכחות של רכיבים פעילים ביולוגי ידועים בשפכים מגביל את השימושיות של בדיקות כימיות לבד. שילוב של de vivo ו bioassays במבחנה בשילוב עם כימאי אנליטיהקרנה ר"י מספקת ארגז כלים שימושי כדי לקבוע את היעילות של הסרת EDC ידי תהליכי טיפול בשפכים מתעוררים. בדיקות אלו, כאשר שנערכו לצד פרמטרים של איכות מים מסורתיים נקודות קצה טוקסיקולוגית מיקרוביולוגית אחרות מאפשרות הערכה ביקורתית של טכנולוגיות טיפול בשפכים נוכחיות ועתידיות.
חשוב לציין כי מסכי אסטרוגן מבוסס שמרים (למשל, YES) אינם רק במבחנה מבחני לקבוע עוצמה האסטרוגנית של כימיקלים wastewaters. מספר מבחני מבוססי תאים יונקים transfected ביציבות פותחו מדי, למשל, ER-CALUX 27 ו hERα-הלה-9903 28 עם תאי סרטן שד אנושיים או תאים סרטניים בצוואר הרחם בהתאמה. ה'כן הושווה מבחני יונקים דומים מבוססי תאים ונמצא יש רמה גבוהה המקביל שחזור, שיעורי זיהוי אסטרוגניים שלילי חיובי אמת אמת 29, althoאיכס זה נחשב לפעמים להיות מעט פחות רגיש 27. אחד היתרונות של מבחני הכתב מבוסס שמרים היא כי במעבדות ללא ניסיון משמעותי עם תרבית תאים יונקים ה'כן ניתן לאמץ בקלות רבה יותר, כפי שהוא דורש אמצעים ביו-בקרה מחמירים פחות וטכניקות סטרילי (YES יכול להתבצע על גבי ספסל במידת הצורך) . בתא האנושי מבוסס המבחנים גם דורשים CO 2 חממות ו luminometers לעומת קוראי חממת microplate התקניים הנהוגים YES. שני שמרים המבוססים אסטרוגן כתב מבחנים (YES, שמר אפייה וא-כן, adeninivorans Arxula) כרגע עוברים שבילים בין-מעבדת תיקוף ISO 19,040 "איכות מים – קביעת הפוטנציאל אסטרוגניים של מים ושפכים" המדגיש את התעשיות עניין הטכניקות הללו.
ישנן מספר המגבלות של השיטות שתוארו הכולל זיהום הפוטנציאלישל דגימות במהלך דגימה, מדגם אחסון וניתוח עם חומרים אסטרוגניים שמקורם בסביבת השדה או מעבדה או על ידי זיהום אדם (למשל, plasticizers, פעיל שטח, מוצרי טיפוח אישי). סוג זה של זיהום ב assay YES (או מבחני כתב מבוססים תאים אחרים) יהיה להעלות את הרקע ואת להשפיע על השימוש של assay. דגימות מים או ממסים מאוחסנים בבקבוקי פלסטיק יכולות לגרום חיוביות שגויות בקלות. שלילי שווא הם גם דאגה היא LCMS / MS ואת assay YES דורשים SPE להתרכז אסטרוגנים לרמות לזיהוי. המטריצה, הבחירה של ממס sorbent ו elution SPE יכול להשפיע על יעילות מיצוי סוגי תרכובות eluted. באמצעות מחסניות SPE C18 עבור חילוץ באמצעות בתנאים המתוארים בפרוטוקול זה עלול ליצור דעה קדומה שלילית, כמו תרכובות קוטב והבסיסיות ביותר היו להישמר היטב על ידי הסופג. יתר על כן, פרוטוקול זה דורש כינון מחדש של eluent YES eluted מ methanol כדי אתנול באמצעות אידוי ליובש חנקן למממן וכתוצאה מכך אובדן של תרכובות נדיפות. כתוצאה מכך הפרוטוקול יכול לספק לזלזל פעילות האסטרוגנית של בדגימות שנבדקו. מגבלות אלה חשובות במיוחד כאשר בוחנים את assay YES באופן תרכובות ידועות או לא צפויות עלול לפספס, כי הם לא חולצו או שהם אבדו בשל התאדות. יתר על כן, טכניקת LCMS / MS עושה שימוש סטנדרטים פנימיים שכותרתו לתקן להתאוששות; גישה זו לא ניתן להשתמש עם assay YES.
מגבלות משמעותיות של בדיקות de vivo קולחים כוללות גבוהה עלות וזמן הנדרשים להערכה בהשוואה לשיטות במבחנה. כיום השימוש במבחני עובר דגים על מנת לאתר פעילות אסטרוגנית מוגבל. עם זאת, יש כבר כמה הצלחה עם ההפקה מהונדסת תגובת אסטרוגן זוהרת עוברי דגים 30, אשר יכולים לשמש ליישומים עתידיים. דגיגים פאטהד (ששימשו protoc זהol) הוא זן מעבדה משותף ואינדוקצית VTG בדגי זכר היא סמן ביולוגי מתועדת היטב של חשיפה אסטרוגנית מידה לכימות של estrogenicity שפכים הקולח 22 או תרכובות אסטרוגניים אחרות או תערובות 31. הנחיות בדיקת OECD לכימיקלים לשבש האנדוקרינית אומתו באמצעות דגיג פאטהד מבוגר, Medaka היפני ו דג זברה 32,33, עם היותו VTG סמן רגיש חשיפה אסטרוגן בכל שלושת המינים. עם זאת, אינדוקציה VTG אינו תואם ישירות פגיעה ברבייה ולכן ההשלכות האקולוגיות של חשיפה בשפכים, כפי שניתן לראות אינטרסקס קשות מקק 3. מצד השני, מקק אינם 'מיני מעבדה "קלסיים למחקר ecotoxicology בשל הגודל הגדול שלהם, זמן דור ארוך (2-3 שנים להגיע לבגרות מינית), בסגנון רבייה; השרצת קבוצה (רבייה) מתקיימת אחת לשנה, ועל הקושי לזהות זכרים ונקבות (למעט בזמןעונת ההשרצה). עם זאת, בדרך כלל זה מינים gonochoristic נחקרו היטב בבריטניה, בשל הגילוי כי זרם של שפכי שפכים אסטרוגניים, דג זכר הציג הפרעות כדי אנדוקרינולוגיה שלהם (למשל, נוכחות של vitellogenin נקבה הספציפית בדמן) ו histopathology (ovotestes – פיתוח ביצים ב testis ו / או צינוריות רבייה נשיות) 5,6. לכן, כיישום עתיד של הפרוטוקולים הללו, מקק (או מינים דומים) יכול להיות מיני זקיף ברים שימושיים כדי להראות אם שיפורים של ממש איכות שפכים (ו estrogenicity המופחת) נראים בנהרות קבלת קולחים מתקדמים. הם יכולים גם להיות מועסקים סוף הצנרת לפקח שפכים משופרים מבחינת טכנולוגי מצמחי פיילוט בהיקף 7. כאשר שוקלים אילו מינים להשתמש ב בהערכות שפכי vivo קיימת תחלופה בין שימוש במיני מעבדת בדיקה מהיר יחסית ומבוקר לעומתכבר בשדה מבוסס, אבל יותר לסביבה רלוונטית, בדיקות באמצעות מינים מקומיים. עם זאת, כגון בהערכות vivo הוא עלות גבוהה וצריכים להיחשב רק במערכה האחרונה של בדיקות בעקבות שומות באמצעות אנליזה כימית וב מבחני חוץ גופייה.
צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול המתואר כוללים הכנה וטיפול בדגימות וכלי הזכוכית (כלומר, בקבוקים וציוד דגימה צריכים להיות מראש שטופלו משטח מתאים חומר ניקוי פעיל) כדי למנוע זיהום של דגימות מפני מזהמים סביבתיים לרבות הגבלת קשר של דגימות עם פלסטיק חומרים אחרים שיכולים לייצר תוצאות חיוביות שגויות. זה חשוב לא פחות בעת תכנון ובניית מערכות חשיפה באקווריומים ודגים. באופן אידיאלי באקווריומים (מניות הדיור במהלך חשיפות) צריך להיות בנוי מחומרים עם ספיחה נמוכה 32 עם סיכון זיהום מינימלי. נירוסטה ניתן להשתמש לקערות החזקה בשפכים או מים.בעוד טנקים של בניית זכוכית עדיפים על טנקי דגים (כמו זה גם מספק התבוננות קלה של הדג). השימוש בצינורות פלסטיק נמוך כיתה או צינורות יש להימנע 32, PVC 34 ו- ABS יכול לשמש אם מתובל כמו שצריך ", כלומר, משמאל לדלוף החוצה מזהמים כל במים זורמים דילול לפחות 12 שעות לפני השימוש. צינורות סיליקון כיתה רפואית הועסקו בהצלחה במתקן שלנו למסירת משאבת נפיחה של כימיקלים ומי שפכים / דילול לטנקים. וכן בהתחשב זיהום אסטרוגניים בבנייה והפעלה של מערכת Aquatics, חשוב גם לחשוב על דיאטה של דגים; מזונות תקינות דגים רבים כבר מצאו להיות אסטרוגניים לדגים. לכן חשוב לבדוק מזונות כלשהם עקב פעילות (למשל, במסך אסטרוגן שמרים, ראה ברספורד ואח '. 14) לפני השימוש בהם בסוגים אלה של מחקרים.
פתרון בעיותפרוטוקולי assay כימי ניתוח או YES תארו הוא פשוט אם דגימות לאבטחת איכות ובכלל זה נסיעות, מעבדה מרובות ואת חסר ממס מנותח לצד בקרות חיוביות דגימות אמיתיות לחסל תוצאות שליליות חיוביות שקר שקר. חיובי (למשל, EE2) ושלילי (רק מי דילול) שליטה צריכה גם תמיד לשמש מבחני vivo כדי לאשר רגישות של סמן ביולוגי או נקודות קצה ביולוגיים צפויים (דהיינו, VTG או histopathology), ולאפשר כל זיהום בלתי צפוי כדי להתגלות ( למשל, ממערכת ניסיוני עד, דיאטה, או מי דילול). כל שינוי בפרוטוקול צריך להיות מאומת לפני ביצוע כל מחקר.
עם רגולציה של תרכובות אסטרוגניים שתיכנסנה לסביבה באמצעות מי קולחי WWTP זה חוזה כי טכנולוגיות טיפול בשפכים יעילות יותר תהיינה צורך מפותח. סוללת הבדיקות המתוארות בכתב היד הזה להחמיאבדיקות הערכת ecotoxicological והכימיות שתוחלנה על פריקות שפכים למתקן טיפול בשפכים. לכן, יישום עתידי של סוג זה של סוללה הוליסטית של מבחן צריך לאפשר למפתחי טכנולוגית שפכים, ומפעילי צמח, כדי ליישם את העיצובים בטוחים האקולוגיים ביותר בהתחשב השיטות הטובות ביותר כדי להסיר את שני ספציפי מוסדר כימיקלים אסטרוגניים ופעילות ביולוגית הכוללת.
The authors have nothing to disclose.
Projects presented in this paper were funded by Severn Trent Water and Brunel University London. The authors would like to thank Alan Henshaw and John Churchley for providing field and laboratory assistance. T.J.C. thanks the Heinz Endowments for support. M.R.M. thanks the Steinbrenner Institute for a Steinbrenner Doctoral Fellowship and Carnegie Mellon University for a Presidential Fellowship.
Wellwash Versa plate washer | Thermo Scientific | 5165010 | |
Plate reader | Molecular Devices | SpectraMax 340PC | |
Incubator | Memmert | INB 400 | 37oC incubation required for carp assay |
Fisherbrand whirlimixer | Fisher Scientific | 13214789 | |
Icemaker | Scotsman | AF80 | |
12-Channel F1 digital multichannel pipette | Thermo Scientific Finnpipette | 4661070 | |
ELISA kits | Biosense Laboratories | V01018401-096 (Fathead minnow) V01003402-096 (Carp) |
|
Microfuge tubes, 0.5ml | Alpha labs | LW2372 | |
Microfuge tubes, 1.5ml | Alpha labs | LW2375 | |
Sulphuric acid, 95-98% | Sigma-Aldrich | 258105 | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Histology | |||
Tissue processor | Leica Biosystems | TP1020 | |
Wax dispenser | Thermo Scientific Raymond Lamb | E66HC | |
Metal embedding mold | Leica Biosystems | Various | |
Hot plate | Thermo Scientific Shandon | 3120063 | |
Cold plate (EG1150 C) | Leica Biosystems | 14038838037 | |
Heated forceps (EG F) | Leica Biosystems | 14038835824 | |
Microtome | Leica Biosystems | RM2235 | |
Paraffin section floatation bath | Electrothermal | MH8517 | |
Slide drying bench | Electrothermal | MH6616 | |
Stainmate automated stainer | Thermo Scientific Shandon | E103/S10L | |
Cassettes, Histosette II, biopsy | Simport | M493 | |
Paraffin wax | Thermo Scientific Raymond Lamb | W1 | |
Histo-Clear II | National Diagnostics | HS-202 | |
IMS (ethanol mix), IDA99 | Tennants | ID440 | |
Polysine adhesion slides | Thermo Scientific Gerhard Menzel | J2800AMNZ | |
Cover slips, 22x50mm | VWR | 631-0137 | |
Histomount | National Diagnostics | HS-103 | |
Haematoxylin Harris GURR | VWR | 351945S | |
Eosin, 1%, aqueous | Pyramid Inovation | S20007-E | |
Fisherbrand slide boxes | Fisher Scientific | 11701486 | |
Microtome blades, MB35 | Thermo Scientific Shandon | 3050835 | |
Bouin’s solution | Sigma Aldrich | HT10132-1L | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Yeast screen | |||
Flow cabinet | Labcaire Systems Ltd | SC12R | |
Cooled incubator | LMS Cooled Incubator | 303 | |
Incubator | Memmert | INB 400 | |
Shaker | Grant | PSU-10i | |
Fisherbrand whirlimixer | Fisher Scientific | 13214789 | |
Plate shaker | Heidolph Titramax 100 | 544-11200-00 | |
12-Channel F1 digital multichannel pipette | Thermo Scientific Finnpipette | 4661070 | |
12-channel pipette, electronic | Sartorius | 735441 | |
96-well flat-bottom microplates | MP Biomedicals Thermo Scientific Nunc Sarstedt |
76-232-05 260860 82.1581.001 |
We have found that these multiwell plates all produce low backgrounds |
HPLC grade water | Rathburn | RH1020 | |
Absolute ethanol | Hayman Kimia | F200238 | |
Potassium phosphate monobasic anhydrous | Sigma-Aldrich | P-5655 | |
Ammonium sulphate | Sigma-Aldrich | A-2939 | |
Potassium hydroxide, pellets | Sigma-Aldrich | P-1767 | |
Magnesium sulfate, anhydrous | Sigma-Aldrich | M-2643 | |
Iron (III) sulfate | Sigma-Aldrich | 307718 | |
L-Leucine | Sigma-Aldrich | L-8912 | |
L-Histidine | Sigma-Aldrich | H-6034 | |
Adenine | Sigma-Aldrich | A-2786 | |
L-Argenine, hydrochloride | Sigma-Aldrich | A-6969 | |
L-Methionine | Sigma-Aldrich | M-5308 | |
L-Tyrosine | Sigma-Aldrich | T-8566 | |
L-Isoleucine | Sigma-Aldrich | I-7403 | |
L-Lysine, hydrochloride | Sigma-Aldrich | L-8662 | |
L-Phenylalanine | Sigma-Aldrich | P-5482 | |
L-Glutamic acid | Sigma-Aldrich | G-8415 | |
L-Valine | Sigma-Aldrich | V-0513 | |
L-Serine | Sigma-Aldrich | S-4311 | |
Thiamine, hydrochloride | Sigma-Aldrich | T-1270 | |
Pyridoxine | Sigma-Aldrich | P-5669 | |
D-Pantothenic acid, hemicalcium salt | Sigma-Aldrich | P-5155 | |
Inositol | Sigma-Aldrich | I-5125 | |
d-Biotin | Sigma-Aldrich | B-4639 | |
D-(+)-Glucose anhydrous; mixed anomers | Sigma-Aldrich | G-7021 | |
L-Aspartic acid | Sigma-Aldrich | A-4534 | |
L-Threonine | Sigma-Aldrich | T-8441 | |
Copper (II) sulfate, anhydrous | Sigma-Aldrich | C-1297 | |
Chlorophenolred-b-D galactopyranoside (CPRG) | Sigma-Aldrich | 10884308001 | |
Glycerol | Sigma-Aldrich | G-2025 | |
17 β-Estradiol | Sigma-Aldrich | E-8875 | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Steroids | |||
Acetone | Rathburn | ||
Acetonitrile | Rathburn | ||
Ammonia solution | Rathburn | ||
Ethylacetate | Rathburn | ||
Copper(II) nitrate. | Sigma-Aldrich | ||
Acetone | Rathburn | ||
Dichloromethane | Rathburn | ||
2, 4, 16, 16-d4-17b-estradiol | CDN Isotopes | ||
2, 4, 16, 16-d4-estrone | CDN Isotopes | ||
2, 4, 16, 16-d4-17a-ethynyl oestradiol. | CDN Isotopes | ||
17b-estradiol | Sigma-Aldrich | ||
Estrone | Sigma-Aldrich | ||
17a-ethynyl oestradiol. | Sigma-Aldrich | ||
Hexane | Rathburn | ||
Hydrochloric acid | Sigma-Aldrich | ||
Methanol | Sigma-Aldrich | ||
Sodium hydrogen carbonate | Sigma-Aldrich | ||
Sodium hydroxide | Sigma-Aldrich | ||
Styrene divinyl benzene cartridge (Isolute ENV+) solid phase extraction cartridge (200 mg/6 ml) | Biotage | ||
Isolute aminopropyl solid phase extraction cartridge (500 mg/6 ml) | Biotage | ||
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Fish study | |||
orange-white silicon manifold tubing 0.63 bore pk 6 | watson marlow | 982.0063.000 | |
straight connectors for 0.5/0.8 bore pk 20 | watson marlow | 999.2008.000 | |
pumsil silicon tubing 0.8 bore 15m | watson marlow | 913.A008.016 | |
200 series multi-channel persitaltic pump | watson marlow | 205CA | |
Silicone tubing x15m (dosing tanks) | vwr | SFM1-3250 | |
silicone tubing x 15m (large for inflow/outflow) | vwr | SFM1-5450 | |
2.5L glass winchester pk 4 | Fisher Scienctific | BTF-505-050B | |
magnetic stir bar 51x8mm pk 10 | Fisher Scienctific | FB55595 | |
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MS222) | sigma aldrich | E10521-10G | |
17α-Ethynylestradiol | sigma aldrich | E4876-100MG | |
Absolute ethanol | Hayman Kimia | F200238 | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
SPE | |||
1/8 inch PTFE tubes 'straws' colour coded pk4 | sigma aldrich | 57276 | |
disposable liners for manifold | sigma aldrich | 57059 | |
filtration tubes without frits 6ml pk 30 | sigma aldrich | 57242 | |
reservior adaptors pk 12 | sigma aldrich | 57020-U | |
stainless steel weight for manifold pk 4 | sigma aldrich | 57278 | |
male luer plug for manifold pk12 | sigma aldrich | 504351 | |
SPE Vacuum Manifold | sigma aldrich | 57265 | |
stop cocks for extraction mainfold (supelco) pk 12 | waters | WAT054806 | |
Sep-Pak Plus C18 cartridge box 50 | waters | WAT020515 | |
Methanol HPLC grade 2.5L | fisher scientific | M/4056/17 | |
7ml glass vials with lids (58x17mm) pk 399 | fisher scientific | TUL-520-031K | |
Absolute ethanol | Hayman Kimia | F200238 | |
vacuum pump e.g. VP Series Vacuum Pump | Camlab | 1136915 |