Rápida Detecção Molecular e diferenciação de Influenza vírus A e B
Summary
Descreve-se um ensaio rápido, com base molecular da gripe A e B. O ensaio detecta Influenza cada alvo dentro de 15 min, utilizando amplificação isotérmica com iniciadores específicos de influenza, seguido de detecção do alvo com as sondas farol molecular. O ensaio de Influenza A e B é de fácil utilização e necessário hands-on tempo mínimo para executar.
Abstract
A gripe é uma doença respiratória contagiosa causada por vírus da gripe A e B em seres humanos e faz com que uma quantidade significativa de morbilidade e mortalidade a cada ano. A Influenza A e B do ensaio foi o primeiro teste molecular gripe rápida dispensada-CLIA disponível. O teste de Influenza A e B funciona através do emprego de amplificação isotérmica com iniciadores específicos de influenza, seguido de detecção do alvo com as sondas farol molecular. Aqui, o desempenho do ensaio de Influenza A e B em congelado, arquivado esfregaço nasofaríngeo (NPS) amostras armazenadas no meio de transporte viral (VTM) foram comparados com um ensaio de painel respiratório.
O desempenho do ensaio de Influenza A e B foi avaliada por comparação dos resultados com o método de referência do painel respiratório. A sensibilidade para o vírus total de influenza A foi 67,5% (CI de 95% (IC), 56,6-78,5) e a especificidade foi de 86,9% (Cl, 71,0-100). Para os testes de vírus da gripe B, a sensibilidade e a especificidade foram de 90,2% (Cl, 68,5-100) E 98,8% (Cl, 68,5-100), respectivamente.
Este sistema tem a vantagem de um tempo de teste significativamente mais curto do que qualquer outro ensaio molecular actualmente disponíveis e o processo simples, livre de pipeta é executado em um sistema totalmente integrado, fechada, de pequenas dimensões. No geral, a Influenza A e B ensaio avaliada neste estudo tem o potencial de servir como um teste de diagnóstico da gripe rápida point-of-care.
Introduction
Infecções de vírus da gripe resultar em uma quantidade significativa de morbidade e mortalidade em cada ano 1, 2, 3. Influenza não complicada é caracterizada por sintomas respiratórios e constitucionais, tais como febre, mialgia, dor de cabeça e tosse não produtiva 4, 5. Os indivíduos mais velhos, crianças, doentes imunocomprometidos e pacientes com comorbidades subjacentes correm um risco maior de complicações graves, como pneumonia, miocardite, doença do sistema nervoso central, ou morte 6, 7.
Infecção por influenza é original de outros vírus respiratórios em que a administração rápida de terapêutica antiviral dentro de 48 h do início dos sintomas pode reduzir a gravidade da doença e comprimento 8. A identificação rápida da gripe, também tem sidomostrado para reduzir o uso de antibióticos desnecessários 9, 10. Além disso, pacientes hospitalizados com infecções de gripe devem ser colocados em quartos isolados com precauções de controle de infecção apropriadas. No entanto, doenças respiratórias provocadas por vírus influenza não pode ser difícil distinguir clinicamente de gripe. Por esse motivo, os testes de diagnóstico rápidos e precisos para a gripe é muito importante para a gestão clínica do paciente.
Vários ensaios estão disponíveis para a detecção e identificação dos vírus da gripe. Os testes de detecção de antígeno da gripe rápidas (RIDTs) são amplamente utilizados na prática clínica como testes point-of-care, porque eles são simples de usar e fornecer resultados dentro de 15 a 30 min 11, 12; no entanto, as suas sensibilidades variam muito (10-80%), dependendo do fabricante e da população que está sendo testado, eo tipo de gripe e subtyPE 13, 14, 15. Ensaios de fluorescência direta (DFAS) fornecem sensibilidades superiores sobre RIDTs, mas o tempo de processamento é maior (~ 3 horas) e deve ser concluída por técnicos qualificados 16, 17. A cultura viral tem sido o padrão ouro para o diagnóstico da gripe e melhorou a sensibilidade sobre ambos os RIDTs e DFAs 18. No entanto, a cultura viral influenza pode levar de 2-14 d para completar, diminuindo sua utilidade em ajudar manejo do paciente 19. Por último, os testes de amplificação de ácidos nucleicos (NAAT) substituíram as técnicas de cultura como o novo padrão ouro no diagnóstico da gripe. NASC são considerados como tendo a maior sensibilidade para a detecção de gripe em poucas horas. No entanto, NASC são os ensaios mais caros e exigem equipamentos e técnicos especializados para realizar 5 <sup>, 20, 21, 22, 23, 24, 25.
O ensaio de influenza A e B aqui descrito é o primeiro teste da gripe dispensada-CLIA molecular rápida que está prontamente disponível. Este ensaio trabalha utilizando uma Reacção nicking endonuclease de amplificação (NEAR) que utiliza amplificação isotérmica com iniciadores específicos de influenza, seguido de detecção do alvo com as sondas farol molecular. Este ensaio diferencia influenza A com B, requer dois minutos para configurar e processar uma amostra, e exige um total de 15 minutos para se completar.
Aqui, apresentamos o protocolo para o ensaio Influenza A & B. Além disso, nós fornecemos um conjunto de dados de amostra definida comparando o desempenho da Influenza A e B do ensaio de swab nasofaríngeo arquivado (NPS) amostras armazenadas em meio de transporte viral (VTM) para outro ensaio painel patógeno respiratório.
Protocol
Representative Results
Discussion
Os vírus da gripe são causas mundiais de morbidade e mortalidade. diagnóstico rápido e preciso da gripe é uma das principais chaves para gerir surtos de gripe durante a temporada respiratória. Outros testes à base de antigene é rápido e fácil de realizar; no entanto, eles têm baixa sensibilidade 13. Por outro lado, os testes moleculares tradicionais têm melhorado a sensibilidade, mas requerem técnicos de laboratório mais experientes para realizar e são mais dispendiosas. O ensaio d…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank the Clinical Microbiology Service staff of the Memorial Sloan-Kettering Cancer Center for help in collecting clinical specimens. This study was supported in part by a research agreement between MSKCC and Alere Scarborough (SK2013-0262).
Materials
| Alere i Instrument | Alere | NAT-000 (Global), NAT-024 (US) | |
| Alere i Influenza A & B 24 Test Kit | Alere | 425-000 (Global), 425-024 (US) | |
| Alere i Barcode Scanner | Alere | EQ001001 | |
| Alere Universal Printer | Alere | 55115 (Global), alereiprinter (US) | |
| 200 µL precision pipette | |||
| 200 µL disposable pipette tips | |||
| Viral transport medium | Remel | M4-RT |
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