Infecção do trato urinário em um modelo Animal de pequeno porte: transuretral cateterismo de ratos machos e fêmeas

Summary

O modelo estabelecido de transuretral cateterismo de ratos permite o estudo das patologias de bexiga, incluindo a infecção do trato urinário, mas só pode ser realizado nas fêmeas. Um novo modelo de instilação transuretral masculino, apresentado aqui, permitirá a pesquisa em uma área marcada por fortes diferenças clínicas e epidemiológicas entre os sexos.

Abstract

Infecções do trato urinário (ITU) são extremamente comuns em todo o mundo, incorrer em despesas associadas a cuidados de saúde e Morbidade significativa. Modelos animais pequenos, que refletem com precisão a progressão e o estabelecimento da doença, permitam a dissecação das interações patógeno-hospedeiro e geração de imunidade à infecção. Em ratos, instilação intravesical de uropathogenic e. coli, o agente causador em mais de 85% da Comunidade adquiriu UTI, recapitula a muitos dos estágios de infecção observada em humanos. Até recentemente, no entanto, UTI pode somente ser modelado em fêmeas. Essa limitação tem dificultado o estudo das diferenças relacionadas ao sexo na UTI, bem como outras patologias de bexiga, como o câncer. Aqui, descrevemos um método para incutir ratos masculinos que permite a comparação direta entre animais masculinos e femininos e fornecer um protocolo detalhado para avaliar o tecido da bexiga por citometria de fluxo como meio para compreender melhor as respostas do hospedeiro à infecção. Juntas, estas abordagens ajudarão na identificação de fatores do hospedeiro que contribuem para sexo enviesamentos observados em UTI e outras doenças associadas a bexiga.

Introduction

Infecções do trato urinário (ITU) são uma das infecções mais comuns em países desenvolvidos¹. Taxas de infecção são semelhantes entre as fêmeas e os machos entre os recém-nascidos e os idosos². Mulheres adultas na pré-menopausa, no entanto, têm uma incidência muito maior de ITU adquirida na Comunidade em comparação com os homens,^2,3. Dado que esta doença afeta principalmente as mulheres, de investigação fundamental e clínica centrou-se esmagadoramente na UTI nas fêmeas. No entanto, a ITU em homens é um desafio de saúde significativos e pouco estudado

Protocol

Mouse experimentos foram conduzidos em conformidade com a aprovação do protocolo número 2012-0024 pelo Comitê d'éthique en expérimentation animale Paris Centre et Sud (Comitê de ética para experimentação animal), em aplicação da Directiva 2010/63 Europeu UE.

1. preparação de cateteres

1. Prepare uma cânula de acesso intravenosa pediátrica para cada grupo de ratos para ser infectado. Usando o mecanismo de mola embutido, alienar cada cânula de sua agulha, conforme as instruções do fabricante. Descarte as agulhas, preservando apenas a plástica cânula intravenosa.
2. Esterilize os cateteres em uma capa de fluxo laminar para o cicl....

Results

No desenvolvimento do presente protocolo, coortes de camundongos C57Bl/6 de feminino e masculinos com idade entre 6 a 8 semanas eram encargos inculcado e bacterianos avaliados em bexigas em pontos de tempo variando de 1 hora a 30 dias. Os resultados destes estudos são detalhados em outro lugar (Zychlinsky Scharff et al., pendente). Aqui, apresentamos dados representativos de infecções 24 hr. Notavelmente, a carga bacteriana foi equivalente entre ratos masculinos e femininos em 24.......

Discussion

Instilação transuretral de ratos masculinos oferece muitas novas oportunidades de pesquisa para a influência do sexo sobre a doença da mucosa da bexiga, mas também apresenta vários desafios. Acima de tudo, uma limitação é que a instilação inicialmente pode provar para ser tecnicamente difícil, resultando em inflamação excessiva durante a inserção do cateter. Melhoria na técnica pode ser conseguida a instilação de ratos mortos com uma solução colorida, como corante de azul de Evans. Para confirmar que a instilação é bem s.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BD Insyte Autoguard Shielded IV Catheters 24 G, 0,7 mm de diâmetro externo, 14 mM de comprimento	BD Medical	381811 ou 381411*	* número de catálogo depende do país
Alça de inoculação	Greiner Bio-One	731171
LB Miller caldo	Difco	244620
LB Miller ágar	Difco	244520
Cuvettes	Bio-rad	223-9955
seringas	B Braun	9166017V
Pinça de polegar (Adson)	Fine Science Tools	11006-12
Tubos de 5 ml, polipropileno	Falcon	352063
Tissue Ruptor sondas descartáveis	Qiagen	990890
Tubos de tampa flip de 15 ml	Thermo Scientific	362694
DNAse	Invitrogen	18047019
Liberase TM	Sigma-Aldrich	5401119001	deve ser alíquota e armazenada a -20 &graus; C para evitar congelamento e descongelamento repetidos
100 µ Filtros M MACS SmartStrainers	Miltenyi	130-098-463	compatível com tubos de 15 ml, preferido
100 µ Filtros de células M	Falcon	352360	compatível com tubos de 50 ml, se os filtros inteligentes MACS não estiverem disponíveis
Placa de 96 poços	Falcon	353077
Fc bloco	BD Pharmingen	553142	anti-CD16/CD32
anti-camundongo anticorpo CD45	BD Biosciences	561487	muitas opções diferentes de conjugação fluorescente estão disponíveis
Tubos de 5 ml de poliestireno com tampa de filtro	Falcon		Seringa de
insulina	352235 Terumo	BS05M2913
homogeneizador portátil	Qiagen	9001272	TissueCitômetro
de fluxo	Biosciences	N/A	Fortessa SORP
Software de citometria de fluxo	BD Biosciences	N/A	Diva