Este estudo demonstra a preparação cirúrgica do músculo cremaster de rato para a visualização da camada livre de células in vivo. Fatores consideráveis que afetam a precisão da medição da largura da camada livre de células são discutidos neste estudo.
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Artigo de método
Visualização e quantificação da Camada de livre-Cell nas arteríolas do músculo Rat Cremaster
Neste artigo
Resumo
Resumo
A camada livre de células é definida como a camada de plasma parietal no fluxo de microvasos, que é desprovida de glóbulos vermelhos. A medição da largura da camada livre de células in vivo e suas variações espaço-temporais podem fornecer uma compreensão abrangente da hemodinâmica na microcirculação. Neste estudo, usamos um sistema microscópico intravital acoplado a uma câmera de vídeo de alta velocidade para quantificar as larguras das camadas livres de células nas arteríolas in vivo. O músculo cremaster de ratos Sprague-Dawley foi exteriorizado cirurgicamente para visualizar o fluxo sanguíneo. Um script de imagem personalizado também foi desenvolvido para automatizar o processamento de imagens e a análise da largura da camada livre de células. Essa abordagem permite a quantificação das variações espaço-temporais de forma mais consistente do que as medições manuais anteriores. A precisão da medição, no entanto, depende em parte do uso de um filtro azul e da seleção de um algoritmo de limiar apropriado. Especificamente, avaliamos o contraste e a qualidade das imagens adquiridas com e sem o uso de filtro azul. Além disso, comparamos cinco diferentes algoritmos de limiar baseados em histograma de imagem (Otsu, mínimo, intermodo, seleção iterativa e limiar entrópico difuso) e ilustramos as diferenças em sua determinação da largura da camada livre de células.
Introdução
Estudos em animais in vivo são fundamentais para a ciência básica para a compreensão da fisiologia e patologia humanas. Em particular, estudos micro-hemodinâmicos in vivo podem elucidar o potencial comprometimento das funções microcirculatórias alteradas por condições reológicas anormais do sangue. Vários estudos micro-hemodinâmicos anteriores1 usaram o modelo do músculo cremaster de rato para visualizar o fluxo sanguíneo microvascular. O músculo cremaster é uma fina camada de músculo estriado ao redor dos testículos. Assim, o fluxo sanguíneo no músculo pode ser visualizado com um microscópio de transiluminação por meio de exposição cirúrg....
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Protocolo
Este estudo está de acordo com a Universidade Nacional de Singapura Institutional Animal Care e Use Committee (protocolo aprovado no. R15-0225).
1. Preparação cirúrgica do Modelo Animal
- canulações navio
- Anestesiar a ratazanas macho Sprague-Dawley (6 - 7 semanas de idade) de pesagem (203 ± 20) g com cetamina (37,5 mg / ml) e xilazina (5 mg / ml) cocktail através de injecção intraperitoneal (ip) de injecção (2 ml / kg) . Não recapitular a agulha ou removê-lo a partir da seringa, após a injecção.
- Uma vez que o animal foi anestesiado (confirmado por dedo do pé que comprime a), colocá-la sobre uma....
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Resultados
A visualização da CFL in vivo é largamente dependente das preparações cirúrgicos do animal. perda excessiva de sangue ou duração da cirurgia estendida pode sujeitar o animal ao choque e aberrações do fluxo sanguíneo. Manutenção da temperatura do tecido usando uma almofada de aquecimento, bem como uma plataforma de personalização durante a cirurgia e experiência também é crucial para manter as condições fisiológicas do rato. Por utilização de uma lâmpada de halogéneo de 100 W no sistema de microscópio, sem danos.......
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Discussão
A medição da largura CFL é essencial para uma melhor compreensão da hemodinâmica na microcirculação. Em particular, a medição de larguras CFL tem sido realizada em mesentérica 6, espinhotrapézio 24 e cerebrais 25 microcirculations. Medição convencional de in vivo larguras CFL foi restrita a estimativas por inspeção manual dos quadros de vídeo gravadas. As medições manuais necessários a média de vários quadros de vídeo sucessivas antes de identificar visualmente os limites das ce.......
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Divulgações
Os autores declaram não haver interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo National Medical Research Council (NMRC)/Cooperative Basic Research Grant (CBRG)/0078/2014.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Microscópio intravital | Olympus | BX51WI | Equipamento |
| Câmera de alta velocidade | Photron | 1024PCI | Equipamento |
| Filtro azul | HOYA | B390 | |
| Equipamento Sensor de pressão e sistema biopac | Sistema Biopac | TSD104A, MP100 | |
| Equipamento Controlador de temperatura | Shimaden | SR 1 | Equipamento |
| Plasma Lyte A | Baxter | NDC:0338-0221 | Quente em 37 ° C banho-maria antes do uso |
| Solução salina 0,9% | Braun | ||
| Heparina (5.000 UI/ml) | Tubo | ||
| PE-10 | Becton Dickinson | 427400.024 | " OD x .011" ID |
| Tubo de polietileno PE-50 | Becton Dickinson | 427411.038" OD x .023" ID | |
| Tubo de polietileno PE-205 | Becton Dickinson | 427446.082" OD x .062" ID | |
| 2-0 sutura de seda não absorvível | Deknatel | 113-S | |
| 5-0 sutura de seda não absorvível | Deknatel | 106-S | |
| Almofada de aquecimento de circulação de água | Gaymar | ||
| Banho de água | Fisher Scientific | Isotemp 205 | Equipamento |
| de Algodão Estéril | Fisher Scientific | 22-415-468 | |
| Aplicadores com ponta de algodão | Fisher Scientific | 23-400-124 | |
| Pinça Dumont | Scientific | INS14188 | Instrumento cirúrgico |
| Pinça de microdissecação | Kent Scientific | INS15915 | Instrumento cirúrgico |
| Pinça de íris 1 x 2 dentes | Kent Scientific | INS15917 | Surgical instrumento |
| Pinça de canulação de vasos | Kent Scientific | INS500377 | Instrumento cirúrgico |
| Micro tesoura | Kent Scientific | INS14177 | Instrumento cirúrgico |
| Tesoura de íris | Kent Scientific | INS14225 | Instrumento cirúrgico |
| Clipe de vaso | Kent Scientific | INS14120 | Instrumento cirúrgico |
| Sistema de cautério Gemini | Braintree Scientific | GEM 5917 | Instrumento cirúrgico |
Referências
- Kim, S., Kong, R. L., Popel, A. S., Intaglietta, M., Johnson, P. C. Temporal and spatial variations of cell-free layer width in arterioles. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 293 (3), H1526-H1535 (2007).
- Ong, P. K., Namgung, B., Johnson, P. C., Kim, S.
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Reimpressões e permissões
