استنساخه الشرياني التعرية الإصابات وذلك Infrarenal البطن الأبهري لقط في نموذج الفئران
Summary
فهم الآليات الخلوية والجزيئية إعادة تبطنن التالية إصابة تعرية الشرايين هو من أهمية قصوى في منع تجلط الدم وعودة التضيق في الشرايين. نحن هنا وصف بروتوكول لاستنساخه إصابة الشرايين تعرية من الشريان الأورطي البطني infrarenal. وقد وضعت إجراءات للتحقيق في الآليات الكامنة التي تنظم تجديد البطانية باستخدام نماذج الماوس.
Abstract
التدخلات الأوعية الدموية عن طريق الجلد يؤدي بشكل موحد في إصابات تعرية الشرايين التي تؤدي بعد ذلك إلى تجلط الدم وعودة التضيق. ويمكن أن يعزى هذه المضاعفات إلى ضعف في إعادة تبطنن ضمن هامش الجرح. ومع ذلك لا تزال الآليات الخلوية والجزيئية لإعادة تبطنن إلى تعريف. في حين أن العديد من نماذج حيوانية لدراسة إعادة تبطنن بعد تعرية الشرايين المتاحة، يتم تنفيذ عدد قليل في الماوس بسبب القيود الجراحية. هذا يقوض فرصة لاستغلال خطوط الماوس المعدلة وراثيا وفحص مدى مساهمة الجينات المحددة لعملية إعادة تبطنن. هنا، نقدم بروتوكول خطوة بخطوة لإنشاء نموذج الفئران تكرار للغاية من إصابة الشرايين تعرية في الشريان الأورطي البطني infrarenal باستخدام لقط الأوعية الدموية الخارجي. تلطيخ Immunocytochemical من aortas الجرحى الفيبرينوجين وβ-كاتينين تثبت تعرض على سطح الموالية للالخثاريد حدود البطانة سليمة، على التوالي. الطريقة المعروضة هنا يحتوي على مزايا السرعة وممتازة معدل البقاء على قيد الحياة، وسهولة التقنية النسبية، وخلق أداة عملية فريدة لفرض إصابة تعرية الشرايين في نماذج الفئران المعدلة وراثيا. باستخدام هذه الطريقة، قد المحققين توضيح آليات إعادة تبطنن في ظل ظروف طبيعية أو مرضية.
Introduction
تجلط الدم وعودة التضيق مضاعفات المبكرة والمتأخرة خطيرة لدى المرضى الذين خضعوا لتدخلات الأوعية الدموية عن طريق الجلد، مثل قسطرة البالون اللف والدعامات 1،2. وقد استخدمت عدة استراتيجيات لمعالجة هذه المضاعفات، ولا سيما المزدوج علاج مضاد للصفيحات والدعامات يبلغ حجمه المخدرات. ومع ذلك، فقد تم التركيز بشكل كبير على السبب الكامن وراء تجلط الدم وعودة التضيق، وهي فقدان التغطية الخلايا البطانية (تعرية). إصابة التعرية هي نتيجة حتمية للإجراءات التدخلية بسبب الصدمة الميكانيكية لجدار الوعاء الدموي. هذه الصدمة الميكانيكية يمكن أن يؤدي إلى الأضرار وإزالة طبقة الخلايا البطانية وقائية وتعرض الغشاء القاعدي والعضلات الملساء الوعائية إلى تعميم الدم 3. فقدان الخلايا البطانية في هذه المناطق يخلق بيئة الموالية الجلطة والمؤيدة للالتهابات التي لا تعزز التصاق الصفائح الدموية وتخثر لاحق، ولكنيسوتو يحفز الهجرة وانتشار خلايا العضلات الملساء الوعائية مما أدى إلى سماكة neointimal وعودة التضيق 4. هذه المضاعفات، والعلاجات المرتبطة بها، يؤدي إلى اعتلال كبير، مرض نقص تروية الأكثر المتكررة خصوصا ونزيف الأحداث التي تؤثر على صحة الإنسان.
إعادة تبطنن الإصابة المعراة من هامش الجرح هو من أهمية قصوى في منع تجلط الدم وعودة التضيق 5. وقد أظهرت نتائج التشريح والنماذج الحيوانية بفعالية انخفاض معدلات الاصابة بتجلط مع تغطية الدعامات الدعامات 6،7. الدعامات يبلغ حجمه المخدرات، ابتكر لخفض معدلات عودة التضيق عن طريق تثبيط السلس انتشار العضلات وتضخم neointimal، تؤدي إلى ضعف في كبيرة في الشرايين إعادة تبطنن وتزايد معدلات أواخر تخثر 3. للأسف، كان فهم آليات لإعادة تبطنن-عملية بطيئة، محدودة إلى حد كبير بسبب عدم وجود أبنماذج حيوانية propriate 8.
تم إنشاء عدة نماذج حيوانية لفهم أدوار الخلايا البطانية وخلايا العضلات الملساء الوعائية عقب إصابة الشرايين 7،9،10. الفئران السباتي بالون الشريان نموذج الاصابة هو أفضل وصف واستخدمت لدراسة الآثار المترتبة على الإصابة تعرية على المستوى الإجمالي، الخلوية والجزيئية 11. ومع ذلك، وهذا نموذج الفئران تكرار للغاية الإصابة تعرية الشرايين مع بقاء معدلات ممتازة مفقود وتمس الحاجة إليها للاستفادة من خطوط المعدلة وراثيا متعددة متاحة لتوضيح أفضل تجديد الأوعية الدموية في أماكن متعددة.
تقدم هذه المخطوطة نموذج الفئران من الإصابة تعرية الشرايين التي هي قابلة للتكرار وبسيطة للأداء. وقد أظهرت نهج الحد الأدنى من معدلات الاعتلال والوفيات في العديد من خطوط المعدلة وراثيا. نظرا لوجود عدد واسع من خطوط الماوس المعدلة وراثيا، وهذا النموذج يمكن أن تستخدم لتوضيح الآليات الجزيئية الكامنة وراء إعادة تبطنن بعد إصابة تعرية.
Protocol
Representative Results
Discussion
إصابة تعرية الشرايين بسبب التدخلات عن طريق الجلد، مثل قسطرة البالون والدعامات الأوعية الدموية، يؤدي إلى تخثر الأوعية الدموية المبكرة والمتأخرة وعودة التضيق ويسهم في الأحداث الدماغية المتكررة 3،12. ومن المثير للاهتمام، كما تورطت لقط الأوعية الدموية الجراحية ك…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من ايلي ومركز اسع Edythe الطب التجديدي وأبحاث الخلايا الجذعية في برنامج التدريب في جامعة كاليفورنيا إلى ASS و AIM، فيليب ج Whitcome زمالة إلى الهدف، والمعاهد الوطنية للصحة (HL130290) إلى MLIA.
Materials
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines – Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 | |
Referências
- Farooq, V., Gogas, B. D., Serruys, P. W. Restenosis: delineating the numerous causes of drug-eluting stent restenosis. Circ Cardiovasc Interv. 4, 195-205 (2011).
- Tada, T., et al. Risk of stent thrombosis among bare-metal stents, first-generation drug-eluting stents, and second-generation drug-eluting stents: results from a registry of 18,334 patients. JACC Cardiovasc Interv. 6, 1267-1274 (2013).
- Otsuka, F., et al. The importance of the endothelium in atherothrombosis and coronary stenting. Nat Rev Cardiol. 9, 439-453 (2012).
- Kipshidze, N., et al. Role of the endothelium in modulating neointimal formation: vasculoprotective approaches to attenuate restenosis after percutaneous coronary interventions. J Am Coll Cardiol. 44, 733-739 (2004).
- Finn, A. V., et al. Pathological correlates of late drug-eluting stent thrombosis: strut coverage as a marker of endothelialization. Circulation. 115, 2435-2441 (2007).
- Joner, M., et al. Pathology of drug-eluting stents in humans: delayed healing and late thrombotic risk. J Am Coll Cardiol. 48, 193-202 (2006).
- Joner, M., et al. Endothelial cell recovery between comparator polymer-based drug-eluting stents. J Am Coll Cardiol. 52, 333-342 (2008).
- McDonald, A. I., Iruela-Arispe, M. L. Healing arterial ulcers: Endothelial lining regeneration upon vascular denudation injury. Vascul Pharmacol. 72, 9-15 (2015).
- Fingerle, J., Tina Au, Y. P., Clowes, A. W., Reidy, M. A. Intimal Lesion Formation in Rat Carotid Arteries after Endothelial Denudation in Absence of Medial Injury. Arteriosclerosis. 10, 1082-1087 (1990).
- Granada, J. F., et al. Vascular response to zotarolimus-coated balloons in injured superficial femoral arteries of the familial hypercholesterolemic Swine. Circ Cardiovasc Interv. 4, 447-455 (2011).
- Tulis, D. A. Rat carotid artery balloon injury model. Methods Mol Med. 139, 1-30 (2007).
- Bavry, A. A., Bhatt, D. L. Appropriate use of drug-eluting stents: balancing the reduction in restenosis with the concern of late thrombosis. Lancet (London, England). 371, 2134-2143 (2008).
- Gucu, A., et al. Effects of temporary vascular occluder poloxamer 407 Gel on the endothelium. J Cardiothorac Surg. 8, (2013).
- Holt, A. W., Tulis, D. A. Experimental Rat and Mouse Carotid Artery Surgery: Injury & Remodeling Studies. ISRN Minim Invasive Surg. 2013, (2013).
- Nam, D., et al. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297, 1535-1543 (2009).
- Lindner, V., Fingler, J., Reidy, M. A. Mouse Model of Arterial Injury. Circ Res. 73, 792-796 (1993).
- Kumar, A., Lindner, V. Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).
- Hehrlein, C., Weinschenk, I., Metz, J. Long period of balloon inflation and the implantation of stents potentiate smooth muscle cell death. Possible role of chronic vascular injury in restenosis. Int J Cardiovasc Intervent. 2, 21-26 (1999).
