Возпроизводимо Артериальная Денудация Травма от ИНФРАРЕНАЛЬНОГО брюшного отдела аорты зажимное в мышиной модели
Summary
Понимание клеточных и молекулярных механизмов повторного эндотелизации после повреждения артерии денудационного имеет первостепенное значение для профилактики тромбоза и рестеноза артерий. Здесь мы опишем протокол для воспроизводимой артериальной денудационного травмы инфраренального брюшной аорты. Процедура была разработана, чтобы исследовать основные механизмы, которые регулируют эндотелиальную регенерацию с использованием модели мыши.
Abstract
Чрескожная сосудистых вмешательств равномерно приводят к артериальной денудационными травм, которые впоследствии приводят к тромбозу и рестеноз. Эти осложнения могут быть отнесены к ухудшений в повторной эндотелизации в пределах краев раны. Тем не менее, клеточные и молекулярные механизмы повторной эндотелизации еще предстоит определить. В то время как несколько моделей на животных для изучения повторного эндотелиализацию после артериальной денудации доступны, некоторые из них выполнены в мыши из-за хирургических ограничений. Это подрывает возможность использовать трансгенные линии мышей и исследовать вклад специфических генов в процессе повторного эндотелизации. Здесь мы приводим протокол шаг за шагом для создания хорошо воспроизводимый мышиной модели повреждения артерии денудационного в инфраренального брюшной аорты с использованием внешнего сосудистого зажима. Иммуноцитохимическая окрашивания поврежденных аорте для фибриногена и бета-катенина демонстрируют экспозицию про-тромботические поверхностью соd границу неповрежденного эндотелия, соответственно. Изложенный здесь метод имеет преимущества скорости, отличной общей выживаемости, а также относительной технической простотой, создавая уникальный практический инструмент для наложения артериальной травмы денудации в трансгенных мышах. С помощью этого метода исследователи могут пролить свет на механизмы повторного эндотелизации при нормальных или патологических состояниях.
Introduction
Тромбоз и рестеноз серьезные ранние и поздние осложнения у пациентов , которые подвергаются подкожных сосудистых вмешательств, таких как эндоваскулярной баллонной ангиопластики и стентирования 1,2. Существует несколько стратегий были использованы для устранения этих осложнений, в частности двойной антитромбоцитарной терапии и стенты с лекарственным покрытием. Тем не менее, мало внимания было уделено основной причиной тромбоза и рестеноза, а именно потери покрытия эндотелиальных клеток (денудации). травмы Денудация является неизбежным следствием интервенционных процедур вследствие механической травмы стенки кровеносных сосудов. Эта механическая травма может привести к повреждению и снятия защитного слоя эндотелиальной и воздействия базальной мембраны и гладкой мускулатуры сосудов к циркулирующей крови 3. Потеря эндотелиальных клеток в этих областях создает про-тромботические и провоспалительных среду, которая не только способствует адгезии тромбоцитов и последующий тромбоз, ноLSO стимулирует миграцию и пролиферацию клеток гладких мышц сосудов , приводящих к утолщению неоинтимы и рестеноза 4. Эти осложнения, и связанные с ними методы лечения, приводят к значительной заболеваемости, особенно рецидивирующей ишемической болезни и кровотечения событий, оказывающих вредное воздействие на здоровье человека.
Re-эндотелиализацию обнаженную травмы от краев раны имеет первостепенное значение для профилактики тромбоза и рестеноза 5. Вскрытие результаты и модели на животных продемонстрировали , эффективно применение пониженных ставок тромбоза с охватом стента распорки 6,7. Стенты с лекарственным покрытием, разработанный для уменьшения скорости рестеноза путем ингибирования пролиферации гладких мышц и гиперплазию неоинтимы, приводят к значительным нарушениями в артериальной ре-эндотелизации и возрастающих темпов поздних тромбозов 3. К сожалению, понимание механизмов для повторного эндотелизации был медленный процесс, в значительной степени ограничен отсутствием армодели на животных. 8 щих образовательных
Существует несколько моделей на животных для понимания роли эндотелиальных клеток и клеток гладкой мускулатуры сосудов после повреждения артерии были созданы 7,9,10. Крыса сонной артерии на воздушном шаре модель травмы лучше характеризует и был использован для изучения влияния травмы денудационного на валовой, клеточном и молекулярном уровне 11. Тем не менее, хорошо воспроизводимым мышиной модели повреждения артерий денудационного с отличной выживаемости не хватает, и многое необходимо использовать несколько трансгенных линий, доступных, чтобы лучше выяснить регенерацию сосудов в различных условиях.
Эта рукопись представляет собой мышиную модель повреждения артерий денудации, что воспроизводим и прост в исполнении. Подход показал минимальную заболеваемость и смертность в нескольких трансгенных линий. Из-за широкого ряда генетически модифицированных линий мышей, эта модель может быть использована длявыяснить молекулярные механизмы, лежащие в основе повторной эндотелиализацию после травмы денудации.
Protocol
Representative Results
Discussion
Артериальное травма оголение вследствие чрескожных вмешательств, таких как баллонной ангиопластики и стентирования сосудов, приводит к ранней и поздней тромбоза сосудов и рестеноза и способствует повторных ишемических событий 3,12. Интересно, что хирургическое сосудистая зажим…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантами от Эли и Edythe Широкий Центр регенеративной медицины и исследований стволовых клеток в программе подготовки к UCLA САБ и AIM, Philip J. Whitcome стипендий для AIM, и Национальные институты здравоохранения (HL130290) к MLIA.
Materials
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines – Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 | |
Referências
- Farooq, V., Gogas, B. D., Serruys, P. W. Restenosis: delineating the numerous causes of drug-eluting stent restenosis. Circ Cardiovasc Interv. 4, 195-205 (2011).
- Tada, T., et al. Risk of stent thrombosis among bare-metal stents, first-generation drug-eluting stents, and second-generation drug-eluting stents: results from a registry of 18,334 patients. JACC Cardiovasc Interv. 6, 1267-1274 (2013).
- Otsuka, F., et al. The importance of the endothelium in atherothrombosis and coronary stenting. Nat Rev Cardiol. 9, 439-453 (2012).
- Kipshidze, N., et al. Role of the endothelium in modulating neointimal formation: vasculoprotective approaches to attenuate restenosis after percutaneous coronary interventions. J Am Coll Cardiol. 44, 733-739 (2004).
- Finn, A. V., et al. Pathological correlates of late drug-eluting stent thrombosis: strut coverage as a marker of endothelialization. Circulation. 115, 2435-2441 (2007).
- Joner, M., et al. Pathology of drug-eluting stents in humans: delayed healing and late thrombotic risk. J Am Coll Cardiol. 48, 193-202 (2006).
- Joner, M., et al. Endothelial cell recovery between comparator polymer-based drug-eluting stents. J Am Coll Cardiol. 52, 333-342 (2008).
- McDonald, A. I., Iruela-Arispe, M. L. Healing arterial ulcers: Endothelial lining regeneration upon vascular denudation injury. Vascul Pharmacol. 72, 9-15 (2015).
- Fingerle, J., Tina Au, Y. P., Clowes, A. W., Reidy, M. A. Intimal Lesion Formation in Rat Carotid Arteries after Endothelial Denudation in Absence of Medial Injury. Arteriosclerosis. 10, 1082-1087 (1990).
- Granada, J. F., et al. Vascular response to zotarolimus-coated balloons in injured superficial femoral arteries of the familial hypercholesterolemic Swine. Circ Cardiovasc Interv. 4, 447-455 (2011).
- Tulis, D. A. Rat carotid artery balloon injury model. Methods Mol Med. 139, 1-30 (2007).
- Bavry, A. A., Bhatt, D. L. Appropriate use of drug-eluting stents: balancing the reduction in restenosis with the concern of late thrombosis. Lancet (London, England). 371, 2134-2143 (2008).
- Gucu, A., et al. Effects of temporary vascular occluder poloxamer 407 Gel on the endothelium. J Cardiothorac Surg. 8, (2013).
- Holt, A. W., Tulis, D. A. Experimental Rat and Mouse Carotid Artery Surgery: Injury & Remodeling Studies. ISRN Minim Invasive Surg. 2013, (2013).
- Nam, D., et al. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297, 1535-1543 (2009).
- Lindner, V., Fingler, J., Reidy, M. A. Mouse Model of Arterial Injury. Circ Res. 73, 792-796 (1993).
- Kumar, A., Lindner, V. Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).
- Hehrlein, C., Weinschenk, I., Metz, J. Long period of balloon inflation and the implantation of stents potentiate smooth muscle cell death. Possible role of chronic vascular injury in restenosis. Int J Cardiovasc Intervent. 2, 21-26 (1999).
