Reproducible lesión arterial Denudación por pinzamiento aórtico abdominal infrarrenal en un modelo murino
Summary
La comprensión de los mecanismos celulares y moleculares de la re-endotelización después de una lesión arterial denudación es de suma importancia en la prevención de la trombosis y la reestenosis de las arterias. Aquí se describe un protocolo para la denudación lesiones arteriales reproducible de la aorta abdominal infrarrenal. El procedimiento fue desarrollado para investigar los mecanismos subyacentes que regulan la regeneración endotelial utilizando modelos de ratón.
Abstract
intervenciones vasculares percutáneos uniformemente resultan en lesiones arteriales de denudación que posteriormente conducen a la trombosis y restenosis. Estas complicaciones pueden atribuirse a deficiencias en la re-endotelización dentro de los márgenes de la herida. Sin embargo, los mecanismos celulares y moleculares de la re-endotelización aún no se han definido. Si bien varios modelos animales para el estudio de la re-endotelización después de la denudación arterial están disponibles, pocos se llevan a cabo en el ratón debido a las limitaciones quirúrgicas. Esto socava la oportunidad de explotar líneas de ratones transgénicos e investigar la contribución de los genes específicos para el proceso de re-endotelización. A continuación, presentamos un protocolo paso a paso para crear un modelo murino de lesión altamente reproducible denudación arterial en la aorta abdominal infrarrenal mediante fijación externa vascular. La tinción inmunocitoquímica de las aortas lesionados para el fibrinógeno y la β-catenina demostrar la exposición de una superficie de un pro-trombóticod la frontera del endotelio intacto, respectivamente. El método presentado aquí tiene las ventajas de velocidad, excelente tasa de supervivencia global, y la facilidad técnica relativa, la creación de una herramienta única práctico para la imposición de lesión arterial denudación en modelos de ratones transgénicos. Usando este método, los investigadores pueden dilucidar los mecanismos de re-endotelización en condiciones normales o patológicas.
Introduction
Trombosis y restenosis son graves complicaciones tempranas y tardías en los pacientes que se someten a intervenciones vasculares percutáneas, como la angioplastia con balón endovascular y la colocación de stents 1,2. Se han empleado varias estrategias para hacer frente a estas complicaciones, terapia antiplaquetaria dual y en particular stents liberadores de fármacos. Sin embargo, poca atención se ha colocado en la causa subyacente de la trombosis y la restenosis, es decir, la pérdida de la cobertura de células endoteliales (denudación). lesión Denudation es una consecuencia inevitable de los procedimientos de intervención, debido a trauma mecánico a la pared del vaso sanguíneo. Este trauma mecánico puede provocar daños y eliminación de la capa endotelial de protección y la exposición de la membrana basal y el músculo liso vascular de la sangre circulante 3. La pérdida de células endoteliales en estas áreas crea un ambiente pro-trombóticos y pro-inflamatoria que no sólo promueve la adhesión plaquetaria y subsiguiente trombosis, sino unalso estimula la migración y proliferación de células del músculo liso vascular que resulta en el engrosamiento de la neoíntima y reestenosis 4. Estas complicaciones, y sus terapias asociadas, conducen a una morbilidad significativa, enfermedad isquémica más notablemente recurrentes y episodios de sangrado que afectan la salud humana.
Re-endotelización de la lesión denudado de los márgenes de la herida es de suma importancia en la prevención de la trombosis y reestenosis 5. Resultados de la autopsia y modelos animales han demostrado efectivamente menores tasas de trombosis de stent con una cobertura de 6,7 puntales. Los stents liberadores de fármacos, concebidos para reducir las tasas de reestenosis mediante la inhibición de la proliferación del músculo liso y la hiperplasia neointimal, dar lugar a alteraciones significativas en la arteria re-endotelización y el aumento de las tasas de trombosis tardía 3. Desafortunadamente, la comprensión de los mecanismos de re-endotelización ha sido un proceso lento, en gran medida limitado por la falta de apmodelos animales apro- 8.
Varios modelos animales para la comprensión de las funciones de las células endoteliales y células del músculo liso vascular después de la lesión arterial se han creado 7,9,10. El modelo de lesión por balón de la arteria carótida de rata es el mejor caracterizado y se ha empleado para estudiar los efectos de la lesión de denudación en el nivel bruto, celular y molecular 11. Sin embargo, un modelo murino altamente reproducible de la denudación lesiones arteriales con excelentes tasas de supervivencia no está y muy necesaria para aprovechar las múltiples líneas transgénicas disponibles para elucidar mejor la regeneración vascular en múltiples configuraciones.
Este manuscrito presenta un modelo murino de lesión arterial denudación que es reproducible y fácil de realizar. El enfoque ha demostrado la morbilidad y la mortalidad mínima en varias líneas transgénicas. Debido a la amplia serie de líneas de ratones modificados genéticamente, este modelo se puede utilizar paradilucidar los mecanismos moleculares que subyacen a re-endotelización después de una lesión denudación.
Protocol
Representative Results
Discussion
Denudación lesiones arteriales debido a las intervenciones percutáneas, como la angioplastia con balón y colocación de stents vasculares, da lugar a trombosis y restenosis vascular temprana y tardía y contribuye a eventos isquémicos recurrentes 3,12. Curiosamente, fijación quirúrgica vascular también ha sido implicado como causa de la denudación arterial, la ampliación del alcance del problema de los pacientes sometidos a ningún procedimiento vascular, ya sea percutánea o abierta 13. M…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por becas de la Eli y Edythe Broad Center de Medicina Regenerativa e Investigación de Células Madre en el Programa de Formación de la UCLA para ASS y AIM, Philip J. Whitcome Beca para apuntar, y los Institutos Nacionales de Salud (HL130290) para MLIA.
Materials
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines – Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 | |
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