Aqui, apresentamos um protocolo para o mapeamento óptico da atividade elétrica do átrio direito do mouse e, especialmente, o nó sino-atrial, em uma alta resolução espacial e temporal.
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Artigo de método
De alta resolução Mapping Optical do mouse nó sino-atrial
Neste artigo
Resumo
Resumo
As disfunções do nó sino-atrial (SAN) e as complicações associadas constituem importantes causas de morbidade em pacientes com doenças cardíacas. O desenvolvimento de novas terapias farmacológicas para curar esses pacientes depende da compreensão completa da fisiologia normal e da fisiopatologia do SAN. Dentre os estudos de marcapasso cardíaco, o SAN de camundongo é amplamente utilizado devido à sua viabilidade para modificações na expressão de diferentes genes que codificam canais iônicos SAN ou proteínas de manipulação de cálcio. Evidências emergentes de estudos eletrofisiológicos e histológicos também provaram a representatividade e semelhança da estrutura e funções do SAN de camundongos com mamíferos maiores, incluindo a presença de vias de condução especializadas do SAN para o átrio e uma hierarquia complexa de marcapassos dentro do SAN. Recentemente, a técnica de mapeamento óptico facilitou muito a exploração e investigação da origem da excitação e condução dentro e fora da SAN de camundongos, o que, por sua vez, ampliou a compreensão da SAN e beneficiou os tratamentos clínicos de doenças associadas à disfunção da SAN. Neste manuscrito, descrevemos em detalhes como realizar o mapeamento óptico da SAN do camundongo a partir do coração intacto perfundido por Langendorff e do preparado atrial isolado. Este protocolo é uma ferramenta útil para melhorar a compreensão da fisiologia e fisiopatologia do SAN de camundongos.
Introdução
Novos avanços científicos que levam a saltos na compreensão da fisiologia humana são frequentemente precedidos por avanços tecnológicos. O mapeamento óptico fluorescente, por exemplo, permite a investigação de múltiplos parâmetros fisiológicos em células e tecidos. 1,2 Melhorou significativamente nossa compreensão de como a estrutura anatômica está associada a funções e disfunções eletrofisiológicas. No coração, o marcapasso natural e os sistemas de condução, como o nó sinoatrial (SAN) e a junção atrioventricular, consistem em miócitos nodais que são isolados pelos miócitos atriais circundantes. 3-5 Essa organização cria estruturas tridimensionai....
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Protocolo
Todos os experimentos foram conduzidos de acordo com o National Institutes of Health Guide para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (NIH Pub. No. 80-23). Todos os métodos e protocolos utilizados nestes estudos foram aprovados pela Universidade de Wisconsin Animal Care e do Comitê Use Protocolo seguindo as Diretrizes para Cuidado e Uso de Animais de Laboratório publicado pelo NIH (publicação No. 85-23, revista em 1996). Todos os animais utilizados neste estudo receberam cuidados de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório.
1. Remoção Coração e Langendorff Perfusão
- Antes do isolamento do coração, a solução de Tyrode quen....
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Resultados
Mapeamento óptica do SAN Intact do coração perfundido-Langendorff
Um exemplo típico de um mapa de contorno activação RA reconstruída para o ritmo sinusal espontânea é mostrado na Figura 3 para um coração de rato perfundido de Langendorff-. O ponto de activação precoce está localizada dentro da região perto do intercaval SVC onde o SAN é definido anatomicamente. 3,16 mapas de contorno activação Dois RA adquiridos a 1,0 e 0,5 ms taxa de a.......
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Discussão
Aqui, nós apresentamos dois tipos de preparações do rato san: 1) SAN intacta no coração toda Langendorff-perfundidos, e 2) SAN no isolado, abriu preparação atrial. Estes dois tipos de preparação servem diferentes propósitos experimentais. Na preparação do coração inteiro de Langendorff-perfundidos, a estrutura fibrilação intacta é preservado o que torna possível estudar arritmias atriais complexos, tais como fibrilação atrial, bem como as interacções entre o SAN e o átrio durante taquiarritmias reentrantes. 6.......
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Divulgações
Nenhum conflito de interesse é declarado.
Agradecimentos
Somos apoiados pela start-up da University of Wisconsin-Madison Medical School (A.V.G.).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| camisa de água | Radnoti | 1660 Series Banho de tecido para procedimentos de isolamento de órgãos grandes ou células únicas Banho-maria | |
| / circulador | Fisher Scientific | 1016S | |
| amplificador de pressão | AD Instruments | MLT0670 | |
| EMD Millipore Nylon Net Filters | Fisher Scientific | NY1102500 | |
| Transdutor de pressão | AD Instrumentos | MLT0670 | |
| Pinos Minutien de Aço Inoxidável - 0.1 mm de Diâmetro | Ferramentas de Ciência Fina | 26002-10 | |
| Bomba de perfusão | World Precision Instruments | PERIPRO-4LS | |
| Bomba de superfusão | World Precision Instruments | PERIPRO-4HS | |
| Tesouras Vannas Tubingen | Pinça World Precision Instruments | 503379 | |
| Dumont | Precision Instruments | 501201, tesoura Mayo 500085 | |
| World Precision Instruments | 501750 | ||
| Pinça hemostática Kelly | Precision Instruments | 501241 | |
| pinça Iris | World Precision Instruments | 15917 | |
| Iris tesoura | World Precision Instruments | 501263 | |
| ECG 12 mm agulha (29-gauge) eletrodos (monopolar) | AD Instruments | MLA1203 | |
| porta de injeção Luer em linha | Ibidi | 10820 | |
| Ultima-L Câmera CMOS | SciMedia | MiCAM-05 | |
| lâmpada halógena | Moritex USA Inc | MHAB-150W | |
| NaCl | Fisher Scientific | S271-1 | |
| CaCl2 (2H2O) | Fisher Scientific | C79-500 | |
| KCl | Fisher Scientific | S217-500 | |
| MgCl2 (6H2O) | Fisher Scientific | M33-500 | |
| NaH2PO4 (H2O) | Fisher Scientific | S369-500 | |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | S233-3 | |
| D-glicose | Fisher Scientific | D16-1 | |
| Blebbitatina | Tocris Bioscience | 1760 | |
| RH237 | ThermoFisher Scientific | S1109 | |
| Sulfóxido de dimetila (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 |
Referências
- Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. Optical imaging of the heart. Circ Res. 95 (1), 21-33 (2004).
- Herron, T. J., Lee, P., Jalife, J. Optical imaging of voltage and calcium in cardiac cells & tissues. Circ Res. 110 (4), 609-623 (2012).
- Fedorov, V. V., Glukhov, A. V., Chang, R.
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Reimpressões e permissões
