Um método para extrair Pigmentos de Squid<em&gt; Pealeii Doryteuthis</em

Resumo

Um protocolo para a extração de pigmentos a partir dos grânulos nanoestruturados em lulas Doryteuthis pealeii cromatóforos é apresentado.

Resumo

Os cefalópodes podem sofrer mudanças rápidas e adaptativas na coloração dérmica para fins de detecção, comunicação, defesa e reprodução. Essas capacidades são apoiadas em parte pela expansão e retração da área de órgãos pigmentados conhecidos como cromatóforos. Embora se saiba que os cromatóforos contêm uma rede amarrada de grânulos pigmentados, suas propriedades estrutura-função não foram totalmente detalhadas. Descrevemos um método para isolar os grânulos nanoestruturados em cromatóforos de lula Doryteuthis pealeii e demonstramos como seus pigmentos associados podem ser extraídos em solventes ácidos. Para conseguir isso, o cromatóforo contendo a camada dérmica é primeiro isolado manualmente usando uma dissecção superficial e os grânulos de pigmento são removidos usando ciclos de sonicação, centrifugação e lavagem. Os pigmentos confinados dentro dos grânulos purificados são então extraídos por meio de soluções ácidas de metanol, deixando nanoestruturas com diâmetros menores que não têm cor visível. Este procedimento de extração produz um rendimento de 58% de pigmentos solúveis isolados de grânulos. Usando este método, a composição dos pigmentos cromatóforos pode ser determinada e usada para fornecer informações sobre o mecanismo de coloração adaptativa em cefalópodes.

Introdução

Cefalópodes, tais como lulas, chocos, polvo e tem a capacidade de alterar dinamicamente a sua aparência para camuflar e sinalização. ^1-6 Esta capacidade é apoiado em parte pela expansão de área seletiva de órgãos pigmentadas conhecidos como cromatóforos. ^4,7-9 Cromatóforos são actuadores macias que contêm uma rede de grânulos de pigmento nanoestruturados confinados dentro de uma sáculo cytoelastic que está ancorado radialmente por fibras musculares. ^1,3 Como eles são actuados, chromatophores expandir por 500% da área de superfície apresentada a distribuição dos grânulos durante todo o órgão. ^{3,7 , 10,11} Quando esta acção co....

Protocolo

estudos com animais invertebrados aqui realizados não são regulamentados nos Estados Unidos; Por conseguinte, o Comité Cuidado e Uso Institucional animal não tem autoridade para revisão de tais protocolos. Em vez de estes não estão sob a jurisdição da regulação nos Estados Unidos, os autores declaram que estes estudos foram realizados com esforço sincero para o uso ético, cuidado e tratamento destes animais, o número de indivíduos foi minimizado e estes esforços são consistentes com a Declaração de Basileia e do Conselho Internacional para a Ciência animal Laboratory (ICLAS) diretrizes de ética.

1. Doryteuthis pealeii (pealeii D.) Dissection

Resultados

Cromatóforos são dissecados a partir do D. pealeii manto dorsal (Figura 1A, 1B). Uma vez que são removidas, chromatophores são lisadas e purificada utilizando ciclos de centrifugação e lavagem para isolar os grânulos pigmentados (Figuras 2A, 2B). Soluções de metanol ácido (HCl-MeOH) são usadas para extrair o pigmento a partir dos grânulos (Figura 2C), obtendo-se um extracto de pigmento solúvel e.......

Discussão

Nós demonstramos um método para extrair pigmentos a partir de grânulos chromatophore lula. Alvejando especificamente os grânulos, o nosso objectivo é determinar seu papel na mediação coloração adaptativa. Este método difere relatórios anteriores concebidos para caracterizar pigmentos cefalópodes utilizando amostras de tecidos em massa ¹⁴ ou liofilizados pele ^15.

Embora este protocolo é eficaz na extração de pigmentos chromatophore, ela é limitada a pequenas escalas de r.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Colagenase	Alfa Aesar	9001-12-1	Sem perigo
Ditiotreitol	Sigma-Aldrich	3482-12-3	Irritante, toxicidade aguda
HEPES	Sigma-Aldrich	7365-45-9	Irritante leve
Ácido clorídrico	EMD Chemicals	7647-01-0
K-Aspartato	Sigma-Aldrich	1115-63-5	Reage violentamente com oxidantes
Cloreto de Magnésio	Sigma-Aldrich	7786-30-3	Irritante ocular leve
Metanol	Pharmco-AAPER	67-56-1	Altamente inflamável
Mini comprimido inibidor de doenças	Sigma-Aldrich	469315-90-01	Corrosivo para metal e pele
Papaína	Sigma-Aldrich	9001-73-4	Irritante

corrosivo