A estimulação do nervo vago provou ter uma forte eficácia na diminuição da inflamação periférica. Aqui, apresentamos um protocolo de estimulação do nervo vago modificado que permite exames adicionais dos mecanismos anti-inflamatórios colinérgicos em respostas inflamatórias limitadas.
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Artigo de método
Aumento do tempo de recuperação e diminuição da Administração LPS para estudar o nervo vago Estimulação Mecanismos em respostas inflamatórias Limitada
Neste artigo
Resumo
Resumo
A inflamação é uma resposta local à infecção e dano tecidual mediada por macrófagos, monócitos e outras células imunes ativadas que liberam citocinas e outros mediadores da inflamação. Por muito tempo, os mecanismos humorais e celulares foram estudados por seu papel na regulação da resposta imune, mas avanços recentes no campo da imunologia e da neurociência também desvendaram mecanismos neurais específicos com potencial terapêutico interessante. A chamada via anti-inflamatória colinérgica (PAC) foi descrita para controlar as respostas imunes inatas e a inflamação de maneira muito potente. No início dos anos 2000, Tracey e colaboradores desenvolveram uma técnica que estimula o nervo vago e imita o efeito da via. A metodologia baseia-se na estimulação elétrica do nervo vago em baixa voltagem e frequência, a fim de evitar quaisquer efeitos colaterais da superestimulação, como a desregulação da variabilidade da frequência cardíaca. Dispositivos elétricos para estimulação já estão disponíveis, facilitando a configuração da metodologia no laboratório. O objetivo desta pesquisa foi investigar o potencial envolvimento das prostaglandinas na PAC. Infelizmente, com base em tentativas anteriores, não conseguimos usar o protocolo original, pois a resposta inflamatória induzida era muito alta ou não era adequada para propriedades do metabolismo enzimático. As diferentes configurações do protocolo de cirurgia original permaneceram praticamente inalteradas, mas as condições relativas à indução inflamatória e ao momento antes do sacrifício foram melhoradas para atender aos nossos propósitos (ou seja, investigar o envolvimento do PAC em respostas inflamatórias mais limitadas).
A versão modificada do protocolo original, apresentada aqui, inclui um intervalo de tempo mais longo entre a estimulação e a análise do nervo vago, o que está associado a uma menor indução de respostas inflamatórias. Além disso, ao diminuir o nível de lipopolissacarídeos (LPS) para injetar, também encontramos novas observações sobre propriedades mecanicistas no baço.
Introdução
A imunidade inata fornece uma primeira linha imediato de defesa contra infecções e doenças em uma ampla gama de organismos. Não só inicia a resposta imunitária primária para eliminar a ameaça, mas que também desempenha um papel central na activação e educar a imunidade adaptativa, que leva a cabo as respostas imunitárias secundárias em uma maneira específica para o agente patogénico. A inflamação é orquestrado por uma variedade de citocinas e quimiocinas, que por sua vez tem a capacidade para atrair outras culas imunitias para o local da infecção e para induzir os sinais cardinais da inflamação, tais como vermelhidão, inchaço, dor, perda de função e febre . A duração....
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Protocolo
Todos os experimentos com animais foram realizados de acordo com as diretrizes para o cuidado e uso de animais aprovados pelo Comitê de Ética local no Instituto Karolinska, de Estocolmo. O comitê de ética local segue as directivas da União Europeia sobre cuidados com animais.
NOTA: As principais alterações do protocolo original são o tempo de recuperação após a cirurgia (6 h versus 1 hr) e o nível de LPS injectada (2 mg / kg versus 15 mg / kg). Caso contrário, as diferentes definições relacionadas com a cirurgia em si não foram alteradas.
1. Preparar material para a estimulação
- Lig....
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Resultados
Nível de TNFa e Interleucina-1β (IL-1β) depois de aumentar o espaço de tempo após a cirurgia e a diminuição da dose de LPS
Como mostrado previamente, utilizando o protocolo original, VNS diminuiu os níveis de TNFa (169,3 ± 24,9 pg / mg em SHAM contra 39,7 ± 10,8 pg / mg em VNS, p <0,001) e IL-1β (360,0 ± 40,21 pg / mg em SHAM contra 191,7 ± 27,2 pg / mg em VNS, p <0,01) no baço após injecção intraperitoneal de LPS (15 mg / .......
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Discussão
Desde a sua descoberta no início de 2000, os mecanismos da PAC, foram exaustivamente estudados. Temos agora uma boa imagem da via, e em particular, o órgão-alvo, o baço, onde NE, as células T de memória, Ach, e macrófagos trabalho em equipa muito eficiente para regular negativamente a mediadores inflamatórios 2. Temos também recentemente publicada dados sobre a importância de um sistema funcional de prostaglandinas em ratinhos, em particular, de PGE 2, que é, obviamente, um componente .......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
O estudo foi apoiado pelo Conselho Sueco de Pesquisa, pela Associação Sueca de Reumatismo, pelas Fundações do Instituto Karolinska, pelo Conselho do Condado de Estocolmo, pela Fundação Wallenberg e pela Fundação GV 80 Anos para pesquisa. Os autores também gostariam de agradecer a Hannah Aucott pela revisão do manuscrito.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Computador | Toshiba-Qualquer | computador é realmente compatível | |
| com o sistema de aquisição de dados MP-150 | Biopac Systems | MP150WSW | |
| software de reconhecimento | Biopac Systems | ||
| Mice C57Bl / 6 | Charles River | ||
| Máquina anestésica | Simtec Engineering | ||
| Garrafa de oxigênio médico | Garrafa de | médica | |
| AGA | 108639 | ||
| Vetflurano (1.000 mg/g) | Virbac | 137317 | |
| LPS | Sigma-Aldrich | L2630 | |
| Solução salina | Merck Millipore | 1024060080 | |
| PBS 10x | Sigma-Aldrich | P5493 | Diluído 10 vezes para concentração usada |
| Seringa (1 ml) | BD Plastipak | 303172 | |
| Agulhas 23 G | KD-FINE | 0,6 x 30 mm (azul) | |
| Pinça de microdissecação (curva) | Sigma-Aldrich | F4142 | |
| Tesoura de dissecação | Sigma-Aldrich | Z265969 | |
| Sutura cirúrgica 4-0 | Ethicon | G667G | |
| Unidade de eutanásia | Euthanex Smartbox | EA-32000 | |
| Cavilon Filme | de barreira sem picada3M Health Care | 3346N | |
| TH1/TH2 9-Plex ensaio, kit ultrassensível | MesoScale Discovery | K15013C-1 | |
| Dispositivo de eletrodo estimulante | Biopac Systems | STIMSOC | |
| Aesculap Isis barbeador | Agnthos | GT420 | |
| R70 | Dieta para roedores de Lantmannen, Estocolmo, Suécia |
Referências
- Nathan, C. Points of control in inflammation. Nature. 420 (6917), 846-852 (2002).
- Rosas Ballina, M., et al. Acetylcholine-synthesizing T cells relay neural signals in a vagus nerve circuit. Science. 334 (6052), 98-101 (2011).
- Le Maître, E., et al.
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Reimpressões e permissões
