Nós descrevemos um protocolo para induzir gratificante e nonrewarding experiências em moscas da fruta (Drosophila melanogaster), utilizando o consumo de etanol voluntária como uma medida de mudanças nos estados de recompensa.
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Artigo de método
Uma maneira simples para medir alterações na Recompensa comportamento de busca Usando
Neste artigo
Resumo
Resumo
Nós descrevemos um protocolo para a medição do etanol auto-administração em moscas da fruta (Drosophila melanogaster) como um proxy para mudanças nos estados de recompensa. Nós demonstramos uma forma simples de explorar o sistema de recompensa mosca, modificar experiências relacionadas a recompensa natural, e use o consumo de etanol voluntária como uma medida de mudanças nos estados de recompensa. A abordagem serve como uma importante ferramenta para estudar os neurônios e genes que desempenham um papel nas mudanças mediada por experiência de estado interno. O protocolo é composto de duas partes distintas: expor as moscas para experiências gratificantes e nonrewarding, e ensaiando o consumo voluntário de etanol como uma medida da motivação para obter uma recompensa de droga. As duas partes podem ser utilizadas de forma independente para induzir a modulação da experiência como um passo inicial para mais ensaios a jusante ou como um ensaio de alimentação de duas escolha independente, respectivamente. O protocolo não requer uma instalação complicada e, portanto, pode ser aplicada em qualquer LABORATORY com ferramentas básicas de cultura de mosca.
Introdução
Modificação do comportamento em resposta à experiência permite animais para ajustar seu comportamento às mudanças no seu ambiente 1. Durante este processo, os animais integrar o seu estado fisiológico interno com as condições variáveis do ambiente externo e, posteriormente, escolher uma ação sobre o outro para aumentar suas chances de sobrevivência e reprodução. Sistemas de recompensa evoluído para motivar comportamentos que são necessários para a sobrevivência dos indivíduos e das espécies, reforçando comportamentos que aumentam a sobrevivência imediata, como comer ou beber, ou aqueles que garantir a sobrevivência a longo prazo, tais como o comportament....
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Protocolo
Nota: Visão geral do desenho experimental: O delineamento experimental inclui um protocolo adaptado para a supressão de corte 7-9 em que as moscas macho são expostos a experiências gratificantes e nonrewarding em 3 sessões de treino consecutivas ao longo de 4 d. No final da fase de experiência, as moscas são testados num ensaio de consumo voluntário de etanol em duas escolha para 3-4 d. O protocolo aqui inclui vários passos preparatórios, alguns dos quais pode ser efectuada previamente, para ser utilizado em mais do que uma experiência, enquanto outros devem ter lugar de uma forma atempada, antes do início da experiência (Tabela 1).
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Resultados
FPreviously, Devineni et ai. mostrou que, quando as moscas de fruta são dadas a opção de consumir alimentos contendo etanol, eles exibem uma forte preferência por alimentos contendo etanol sobre nonethanol contendo alimentos 6. Mostrado aqui estão alguns resultados representativos que obtivemos quando se examina a preferência etanol inato de moscas macho ingênuos que não foram submetidos ao protocolo de treinamento.
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Discussão
Aqui, ilustramos os detalhes de uma abordagem integrada para medir alterações no comportamento de busca de recompensa, com base em trabalhos anteriores descritos por Devineni et al.6 e Shohat-Ophir et al5. A primeira seção do protocolo usa diferentes tipos de interações sexuais como entrada de experiência, e a segunda seção usa um ensaio de alimentação de duas opções para avaliar o efeito da experiência na preferência pelo consumo de etanol.
Como mostrad.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Agradecemos U. Heberlein e A. Devineni para discussões de longa duração e assessoria técnica. Agradecemos também aos membros do laboratório Shohat-Ophir, A. Benzur, L. Kazaz, e O. Shalom, pela ajuda em demonstrar o método. Um reconhecimento especial vai para Eliezer Costi para o estabelecimento dos sistemas de mosca no laboratório. Este trabalho foi apoiado pelo Israel Science Foundation (384/14) e Marie Curie carreira Bolsas de Integração (CIG 631.127).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Frascos de Poliestireno 25 x 95 mm FlyStuff | 32-109 | ||
| frascos de plástico estreito flugs | FlyStuff | 42-102 | |
| 18 G e 27 G | pode ser adquirido por qualquer empresa | 1,20 X 38 mm (18 G x 1 1/2") , 0,40 X 13 mm (27 G x 1/2") | |
| 10 x 75 mm Tubos de Cultura Descartáveis de Vidro Borosilicato | Kimble Chase | 73500-1075 | |
| pipetas calibradas 5 μ L | VWR | 53432-706 | codificado por cores brancas para conter 5 μ L |
| Óleo Mineral | Sigma-Aldrich | M5904 | |
| Sacarose, Grau de Biologia Molecular | CALBIOCHEM | 573113 | |
| Extrato de levedura em pó para microbiologia | pode ser adquirido por qualquer empresa | ||
| Etanol | Sigma-Aldrich | 32221 | |
| pipetas padrão Ponteiras (micropipetas) | ThermScientific | T114R-Q | volume: 0,1 - 20 μ L (ultramicro) |
| IDENTI-PLUGS (Plugs de Tubo de Espuma) | Jaece | L800-A | se encaixa na abertura de 6 - 13 mm |
| IDENTI-PLUGS (Plugs de Tubo de Espuma) | Jaece | L800-D | se encaixa na abertura de 35 - 45 mm |
| virginator fly stock | bloomington drosophila stock center | #24638 | |
| Frascos Estreitos, Bandeja Embalada (PS) | Genesee Scientific Corporation | # 32-109BR | |
| Drosophila Media Recipes and Methods | Bloomington Drosophila Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.htm | |
| ácido propiônico | Sigma-Aldrich | P5561 | |
| ácido fosfórico | Sigma-Aldrich | ||
| 4-hidroxibenzoato de Methl | Sigma-Aldrich | H3647 | |
| Agar Agar pode | ser adquirido por qualquer empresa | ||
| farinha de milho | pode ser adquirido por qualquer empresa | ||
| Melaço da vovó | B & G Foods, Inc | não indicou | |
| que fermento seco instantâneo | pode ser adquirido por qualquer empresa |
Referências
- Robinson, G. E., Fernald, R. D., Clayton, D. F. Genes and social behavior. Science. 322, 896-900 (2008).
- Koob, G. F. Neurobiological substrates for the dark side of compulsivity in addiction. Neuropharmacol. 56, Suppl 1 18-31 (2009).
- Kaun, K. R., Devineni, A. V., Heberlein, U.
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Reimpressões e permissões
