Rotulagem de cancro da mama xenoenxertos derivados do paciente com rastreáveis ​​Repórteres para o crescimento de tumores e metástases Estudos

Colton Hanna; Letty Kwok; Jessica Finlay-Schultz; Carol A. Sartorius; Diana M. Cittelly

doi:10.3791/54944

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Artigo de método

Rotulagem de cancro da mama xenoenxertos derivados do paciente com rastreáveis Repórteres para o crescimento de tumores e metástases Estudos

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DOI:

10.3791/54944

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30 de novembro de 2016

Colton Hanna¹ , Letty Kwok¹ , Jessica Finlay-Schultz¹ , Carol A. Sartorius¹ , Diana M. Cittelly¹

¹Department of Pathology, School of Medicine, University of Colorado Anschutz Medical Campus

Neste artigo

Resumo

Descreve-se um método para rotulagem de xenoenxertos estável derivado do doente (PDXs) com partículas lentivirais que expressam a proteína e repórteres de luciferase fluorescente verde. Este método permite acompanhar o crescimento de PDXs no sítio primário, bem como a detecção de metástases espontâneas e experimentais que utilizam em sistemas de imagem in vivo.

Resumo

O uso de modelos pré-clínicos para estudar a biologia do tumor e a resposta ao tratamento é fundamental para a pesquisa do câncer. Linhagens de células humanas estabelecidas há muito tempo e muitos modelos de camundongos transgênicos muitas vezes não conseguem recapitular os principais aspectos das malignidades humanas. Assim, modelos alternativos que melhor representam a heterogeneidade dos tumores dos pacientes e suas metástases estão sendo desenvolvidos. Modelos de xenoenxerto derivado de pacientes (PDX) nos quais amostras de tumor ressecadas cirurgicamente são enxertadas em camundongos imunocomprometidos tornaram-se uma alternativa atraente, pois podem ser transplantados por várias gerações e refletem com mais eficiência a heterogeneidade do tumor do que os xenoenxertos derivados de linhagens de células cancerígenas humanas. Uma limitação ao uso de PDXs é que eles são difíceis de transfectar ou transduzir para introduzir repórteres rastreáveis ou para manipular a expressão gênica. O protocolo atual descreve métodos para transduzir células tumorais dissociadas de PDXs com alta eficiência de transdução e o uso de PDXs marcados para modelos experimentais de metástases de câncer de mama. O protocolo também demonstra o uso de PDXs marcados em modelos experimentais de metástase para estudar o processo de colonização de órgãos da cascata metastática. As metástases para diferentes órgãos podem ser facilmente visualizadas e quantificadas usando imagens bioluminescentes em animais vivos ou expressão de GFP durante a dissecção e em órgãos excisados. Esses métodos fornecem uma ferramenta poderosa para estender o uso de vários tipos de PDXs à pesquisa de metástases.

Introdução

O desenvolvimento de xenoenxertos de tumor derivadas de doentes (PDXs), onde as amostras de tumor cirurgicamente ressecado são enxertadas directamente em ratinhos imunocomprometidos, oferece várias vantagens em relação a modelos de xenoenxerto padrão de linha de célula, e representa um avanço importante na investigação do cancro ^1,2. PDXs pode ser mantido e ampliado por passagens sucessivas com alteração mínima das características genéticas e biológicas do tumor cresceu na primeira passagem; e reflectir com maior precisão do que a heterogeneidade do tumor xenotransplantes derivados de linhas celulares de cancro humano ^3-8. Estes modelos são agor....