ADSC-sheet transplantatie ter voorkoming Strictuur na Extended slokdarmkanker Endoscopische Submucosale Dissection

Summary

Deze studie meldt een succesvolle methode van endoscopische vetweefsel afgeleide stromale cellen (ADSC)-plaat transplantatie voor oesofageale vernauwing preventie na een verlengde endoscopische submucosale dissectie (ESD) in een varkens model.

Abstract

In de afgelopen jaren, heeft de cel-sheet construct brede interesse in de regeneratieve geneeskunde gestimuleerd, in het bijzonder voor reconstructieve chirurgie procedures. De ontwikkeling van gediversifieerde technologieën combineren vetweefsel afgeleide stromacellen (ADSCs) met verschillende biomaterialen heeft geleid tot de bouw van talrijke soorten weefselengineering substituten, zoals bot, kraakbeen en vetweefsel van knaagdieren, varkens of menselijke ADSCs. Extended slokdarm endoscopische submucosale dissectie (ESD) is verantwoordelijk voor de slokdarm strictuurvorming. Vernauwing preventie blijft uitdagend, zonder efficiënte behandelingen beschikbaar. Vorige studies de effectiviteit van mucosale cel vel transplantatie in een hond model en bij mensen. ADSCs toegeschreven anti-inflammatoire eigenschappen, lokale immuunmodulerende effecten, neovascularisatie inductie en differentiatie vaardigheden in mesenchymale en niet-mesenchymale lineages. Deze originele studie beschrijft de endoscopische transplantation van een ADSC-tissue engineered construct oesofageale vernauwing in een varkens model te voorkomen. De ADSC construct bestond uit twee allogene ADSC bladen lagen op elkaar op een papieren drager membraan. De ADSCs werden gelabeld met de PKH67 fluorofoor to-probe gebaseerde confocale laser endomicroscopy (PCLE) controle mogelijk te maken. Op de dag van transplantatie, een 5-cm en hemi-omtrek ESD bekend oesofageale vernauwing te induceren werd uitgevoerd. Dieren werden onmiddellijk endoscopisch getransplanteerd met 4 ADSC constructen. De volledige hechting van de ADSC constructen werd verkregen na 10 min zachte toepassing. Dieren werden opgeofferd op dag 28. Alle dieren werden met succes getransplanteerd. Transplantatie werd bevestigd op dag 3 met een positieve PCLE evalueren. Vergeleken met getransplanteerde dieren, controle dieren ontwikkelde ernstige vernauwingen, met de belangrijkste fibrotisch weefsel ontwikkeling, vaker voedings- problemen, en verminderde gewichtstoename. In ons model, de transplantatie van allogenic ADSCs, georganiseerd in de dubbele cel vellen, na langere ESD was succesvol en sterk geassocieerd met een lagere oesofageale vernauwing tarief.

Introduction

De behandeling van oppervlakkige oesofageale tumoren veranderd met de ontwikkeling van nieuwe endoscopische technieken. Tegenwoordig endoscopische resectie is de eerste-lijnsbehandeling. Het is inderdaad geassocieerd met een lagere morbiditeit en mortaliteit dan chirurgie met gelijke oncologische resultaten ^{1, 2, 3.} Endoscopische mucosale resectie (EMR) en endoscopische submucosale resectie (ESD) zijn de meest gebruikte technieken. Bij langere oppervlakkige tumor is ESD voorkeur. Vergeleken met EMR, ESD maakt en bloc resectioning, ongeacht de laesie en maat ^{4, 5, 6.} De belangrijkste complicatie van vertraagde ESD oesofageale vernauwing, die meestal optreedt tussen een en twee weken na resectie. Recent gepubliceerde studies hebben aangetoond dat de vorming strictuur houdt verband met degrootte van de resectie. De Japanse Endoscopische Society beveelt het vermijden van ESD maten groter dan ¾ van de slokdarm omtrek, omdat ze worden geassocieerd met vernauwing ontwikkeling in meer dan 90% van de gevallen en zijn verantwoordelijk voor ernstige voeden problemen en grote verslechtering van de kwaliteit van leven.

Het voorkomen van slokdarmkanker strictuur blijft uitdagend. Mechanismen betrokken bij de vorming van vernauwing slechts gedeeltelijk bekend. Vernauwing formaties lijkt voort te vloeien uit de vereniging van twee verschillende mechanismen: (1) pro-inflammatoire cellulaire werving en (2) excessieve ontwikkeling fibrose ^7. Verscheidene preventieve behandelingen zijn voorgesteld. Echter, de resultaten waren onbevredigend, met weinig voordeel en ernstige bijwerkingen ^{8, 9.} Onlangs heeft een Japans team, Ohki et al. , Voorgesteld om een ​​single-layer cellaag in autologe mondslijmvlies cellen te transplanteren naar de esophageal litteken. Transplantatie werd onmiddellijk na ESD ^{10, 11.} Zij toonden de doeltreffendheid van deze innovatieve aanpak, eerst in een hondenmodel en bij patiënten.

Vetweefsel afgeleide stromale cellen (ADSCs) zijn veelbelovend in de regeneratieve geneeskunde. De toepassing ervan op verschillende gebieden heeft aangetoond interessante resultaten, vooral in het wondgenezingsproces. ADSC therapie biedt verschillende voordelen, omdat de cellen eenvoudig geïsoleerd en worden geassocieerd met anti-inflammatoire eigenschappen, lokale immunomodulerende effecten, neovascularisatie inductie en differentiatie vaardigheden in mesenchymale en niet-mesenchymale lijnen ^{12, 13, 14.}

In een eerdere studie, het team aangetoond dat de effectiviteit van de dubbele ADSC-sheet endoscopische transplantatie voor oesofageale vernauwing prevention na langdurig EDO in een varkens model ^15. In dit artikel worden meldingen van ADSC-sheet bouw en endoscopische transplantatie techniek gepresenteerd.

Protocol

Alle dieren werden behandeld volgens de Animal Research Ethics Committee (richtlijnen van het Franse ministerie van Landbouw). Het protocol kreeg de goedkeuring van de lokale ethische commissie bevoegd voor dierlijke experimenten op de Paris Descartes University (registratienummer MESR 2.035,02, Faculteit der Geneeskunde Paris Descartes, Parijs, Frankrijk). 1. ADSC Cultuur en Labeling Verkrijgen bevestigde ADSCs uit een privé-instelling. Cultuur allogene ADSCs bij 37 ° C en 5% CO2 met alf…

Representative Results

De cultuur van ADSCs en de procedure voor de ADSC vel te verkrijgen wordt getoond in figuur 1. Figuur 2 toont de constructie van het implantaat, bestaande uit twee bladen ADSC lagen op elkaar uit papier dragermembraan. ADSCs waren eerder gemerkt met de PKH67 fluorofoor om in vivo graft toezicht met PCLE. Figuur 3 toont de verschillende stappen van uitgebreide slokdarm endoscopische submucosale dissectie, wat resulteert in een 5 …

Discussion

In dit varken model, de ADSC vel transplantatie was technisch succesvol, en de in vivo PCLE evaluatie toegestaan cel innesteling monitoring. Klinische, endoscopische, radiologische en histologische evaluatie getoond van de werkzaamheid van de endoscopische ADSC vel oesofageale vernauwing voorkomen na langdurig ESD.

De endoscopische transplantatie van een ADSC glycerol oplossing die een indigokarmijn kleurstof sheet is een innovatieve aanpak in de regeneratieve geneeskunde. Ohki …

Materials

Transparent endoscopic cap Q180 compatible	Olympus Optical Co
GIF-Q180 gastroscope	Olympus Optical Co
Videoscope System Exera II	Olympus Optical Co
Injection needle 18 G	Olympus Optical Co
Electrosurgery unit ERBE ICC 350	ERBE Technology
Indigo carmin 1%	Life
Endoscopic hybrid knife	Life
Minisonde Z pCLE green probe	Mauna Kea Technology		You must learn how tu use the probe. The manipulation could be difficult
Fetal bovine serum	Sigma Aldrich	12105C
Trypsin	Sigma Aldrich	T146
Alpha minimum essential medium	Thermo Fisher	22561-021
Phosphate-Buffered Salines	Thermo Fisher	10010-023
PKH67 dye kit	Sigma Aldrich	Mini67-KT
12-well temperature responsive cell culture dish	Upcell Thermo Scientific	174900	Feel the weel with 4 mL standard medium culture 30 minutes before seeding cells
Esomeprazole 40 mg	Biogaran
Moprhine sulfate 50 mg/ mL	Lavoisier
Amoxicilline 1 g	Biogaran
Ketamine 250 mg/5 mL	Panpharma
Propofol 10 mg/ mL	Fresenius
Hydrophobic paper	Carrefour