ADSC-hoja de trasplantes para prevenir estenosis esofágica después extendido disección endoscópica submucosa

Summary

El estudio muestra un método endoscópico exitoso de células estromales derivadas de tejido adiposo (ADSC)-hoja de trasplante para la prevención de la estenosis esofágica después de una disección endoscópica submucosa extendida (ESD) en un modelo porcino.

Abstract

En los últimos años, la construcción de la ficha técnica célula ha estimulado un gran interés en la medicina regenerativa, especialmente para procedimientos de cirugía reconstructiva. El desarrollo de tecnologías diversificadas que combinan las células del estroma derivadas de tejido adiposo (ADSC) con diversos biomateriales ha llevado a la construcción de numerosos tipos de sustitutos de la ingeniería tisular, tales como hueso, cartílago, y tejido adiposo de roedores, porcinos, o ADSC humanos. Extendido de esófago disección endoscópica de la submucosa (ESD) es responsable de la formación de estenosis esofágica. la prevención de la estenosis sigue siendo un reto, sin tratamientos eficaces disponibles. Anteriores estudios informaron la eficacia de la mucosa trasplante de lámina de células en un modelo canino y en los seres humanos. ADSC se atribuyen propiedades anti-inflamatorias, efectos de modulación inmune local, la inducción de neovascularización, y capacidades de diferenciación en linajes mesenquimales y no mesenquimales. Este estudio original describe el tra endoscópicansplantation de un constructo de tejido ADSC para prevenir la estenosis esofágica en un modelo porcino. El constructo ADSC se compone de dos hojas ADSC alogénicos en capas una sobre la otra en una membrana de soporte del papel. Los ADSC fueron marcadas con el fluoróforo PKH67 para permitir la monitorización basada en sondeos endomicroscopía láser confocal (pCLE). En el día del trasplante, se realizó una 5-cm y ESD hemi-circunferencial conocido para inducir estenosis esofágica. Los animales fueron inmediatamente endoscópicamente trasplantados con 4 construcciones ADSC. Se obtuvo el completa adhesión de las construcciones ADSC después de 10 min de aplicación suave. Los animales se sacrificaron el día 28. Todos los animales se trasplantaron con éxito. El trasplante se confirmó en el día 3 con una evaluación positiva pCLE. En comparación con los animales trasplantados, los animales de control desarrollaron estenosis severas, con un desarrollo importante tejido fibrótico, problemas alimentario más frecuente, y el aumento de peso reducido. En nuestro modelo, el trasplante de allogenic ADSC, organizadas en láminas de células dobles, después de la EDS extendida fue un éxito y fuertemente asociada con una tasa de estenosis esofágica inferior.

Introduction

El manejo de los tumores de esófago superficiales ha cambiado con el desarrollo de nuevas técnicas endoscópicas. Hoy en día, la resección endoscópica es el tratamiento de primera línea. De hecho, se asocia con menores tasas de morbilidad y mortalidad que una cirugía con resultados oncológicos iguales ^{1, 2, 3.} La resección endoscópica de la mucosa (REM) y la resección endoscópica de la submucosa (ESD) son las técnicas más utilizadas. En el caso de un tumor superficial extendida, se prefiere ESD. En comparación con EMR, EDS permite la resección en bloque, independientemente del tamaño de la lesión y la forma ^{4, 5, 6.} La principal complicación tardía de la EDS es la formación de estenosis esofágica, que ocurre generalmente entre una y dos semanas después de la resección. estudios publicados recientes han demostrado que la formación de estenosis se correlaciona con latamaño de la resección. La Sociedad de Endoscopia japonesa recomienda evitar la EDS tamaño superior a tres cuartas partes de la circunferencia esofágica porque están asociados con el desarrollo de estenosis en más del 90% de los casos y son responsables de los problemas de alimentación graves y un importante deterioro en la calidad de vida.

La prevención de la estenosis esofágica sigue siendo un reto. Mecanismos implicados en la formación de estenosis se conocen sólo parcialmente. Estenosis formaciones parece ser el resultado de la asociación de dos mecanismos diferentes: (1) el reclutamiento celular pro-inflamatoria y (2) el desarrollo de la fibrosis excesiva ^7. Se han propuesto varios tratamientos preventivos. Sin embargo, los resultados no fueron satisfactorios, con pocos beneficios y efectos secundarios severos ^{8, 9.} Recientemente, un equipo japonés, Ohki et al. , Propuesto para trasplantar una lámina de células de una sola capa de células de la mucosa oral autólogas en el Esophageal cicatriz. El trasplante se realizó inmediatamente después de la EDS ^{10, 11.} Se demostró la eficacia de este enfoque innovador, primero en un modelo canino y luego en los pacientes.

las células del estroma derivadas de tejido adiposo (ADSC) son prometedores en la medicina regenerativa. Su aplicación en varios campos ha mostrado resultados interesantes, especialmente en el proceso de cicatrización de heridas. Terapia ADSC ofrece varias ventajas, porque las células son fácilmente aislados y están asociados con propiedades anti-inflamatorias, efectos inmunomoduladores locales, la inducción de neovascularización, y capacidades de diferenciación en linajes mesenquimales y no mesenquimales ^{12, 13, 14.}

En un estudio anterior, nuestro equipo demostró la eficacia de la doble trasplante de ADSC endoscópica de la ficha técnica para prev estenosis esofágicaención después de la EDS prolongada en un modelo porcino ^15. En este artículo, se presentan informes de construcción ADSC hojas y técnica de trasplante endoscópica.

Protocol

Todos los animales fueron tratados de acuerdo con el Comité de Ética de Investigación de Animales (directrices del Ministerio de Agricultura de Francia). El protocolo recibió la aprobación del comité de ética local autorizado para la experimentación con animales en la Universidad de París Descartes (número de registro MESR 2.035,02; Facultad de Medicina de París Descartes, París, Francia). 1. ADSC cultura y Etiquetado Obtener ADSC confirmadas de una institución privada. Cultura ADSC alog?…

Representative Results

La cultura de ADSC y el procedimiento para obtener la hoja de ADSC se muestra en la Figura 1. La Figura 2 muestra la construcción del injerto, compuesto de dos hojas ADSC en capas una sobre la otra en su membrana de soporte del papel. ADSC se marcaron previamente con el fluoróforo PKH67 para permitir el seguimiento del injerto en vivo con pCLE. La Figura 3 muestra los diferentes pasos de extendido disección endoscópica de la…

Discussion

En este modelo de cerdo, el trasplante de hojas ADSC se realizó con éxito, y la evaluación in vivo en pCLE permitido para el monitoreo injerto de células. Las evaluaciones clínicas, endoscópicas, radiológicas, histológicas y demostraron la eficacia de la hoja de ADSC endoscópica en la prevención de la estenosis esofágica después de la EDS extendida.

El trasplante endoscópica de una solución de glicerol ADSC que contiene una hoja de tinte índigo carmín es un enfoque i…

Materials

Transparent endoscopic cap Q180 compatible	Olympus Optical Co
GIF-Q180 gastroscope	Olympus Optical Co
Videoscope System Exera II	Olympus Optical Co
Injection needle 18 G	Olympus Optical Co
Electrosurgery unit ERBE ICC 350	ERBE Technology
Indigo carmin 1%	Life
Endoscopic hybrid knife	Life
Minisonde Z pCLE green probe	Mauna Kea Technology		You must learn how tu use the probe. The manipulation could be difficult
Fetal bovine serum	Sigma Aldrich	12105C
Trypsin	Sigma Aldrich	T146
Alpha minimum essential medium	Thermo Fisher	22561-021
Phosphate-Buffered Salines	Thermo Fisher	10010-023
PKH67 dye kit	Sigma Aldrich	Mini67-KT
12-well temperature responsive cell culture dish	Upcell Thermo Scientific	174900	Feel the weel with 4 mL standard medium culture 30 minutes before seeding cells
Esomeprazole 40 mg	Biogaran
Moprhine sulfate 50 mg/ mL	Lavoisier
Amoxicilline 1 g	Biogaran
Ketamine 250 mg/5 mL	Panpharma
Propofol 10 mg/ mL	Fresenius
Hydrophobic paper	Carrefour