Forskolin-الناجم عن تورم في الأمعاء Organoids: ل<em> في المختبر</em> الفحص لتقييم الاستجابة للدواء في التليف الكيسي المرضى
Summary
This protocol describes an assay for measuring CFTR function and CFTR modulator responses in cultured tissue from subjects with cystic fibrosis (CF). Biopsy-derived intestinal organoids swell in a cAMP-driven fashion, a response that is defective (or strongly reduced) in CF organoids and can be restored by exposure to CFTR modulators.
Abstract
Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant CFTR channel in subjects with cystic fibrosis (CF). Identification of subjects that may benefit from these drugs is challenging because of the extensive heterogeneity of CFTR mutations, as well as other unknown factors that contribute to individual drug efficacy. Here, we describe a simple and relatively rapid assay for measuring individual CFTR function and response to CFTR modulators in vitro. Three dimensional (3D) epithelial organoids are grown from rectal biopsies in standard organoid medium. Once established, the organoids can be bio-banked for future analysis. For the assay, 30-80 organoids are seeded in 96-well plates in basement membrane matrix and are then exposed to drugs. One day later, the organoids are stained with calcein green, and forskolin-induced swelling is monitored by confocal live cell microscopy at 37 °C. Forskolin-induced swelling is fully CFTR-dependent and is sufficiently sensitive and precise to allow for discrimination between the drug responses of individuals with different and even identical CFTR mutations. In vitro swell responses correlate with the clinical response to therapy. This assay provides a cost-effective approach for the identification of drug-responsive individuals, independent of their CFTR mutations. It may also be instrumental in the development of future CFTR modulators.
Introduction
ويتسبب CF عن طفرات في جين التليف الكيسي الغشاء تصرف المنظم (CFTR) الذي يشفر قناة أنيون الظهارية. CF يؤثر على ما يقرب من 85،000 شخص حول العالم 1. وقد تم تحديد أكثر من 2،000 طفرات CFTR ( www.genet.sickkids.on.ca ). هذا التنوع يفسر جزئيا طائفة واسعة من الظواهر المرض لوحظ ( www.CFTR2.org ) 2 و 3. يتم تعريف يستند ستة فصول من طفرات CFTR على تأثيرها على التعبير البروتين CFTR وظيفة: (I) لا التوليف، (الثاني) الاتجار ضعاف، (الثالث) المعيبة قناة النابضة، (رابعا) تصرف تتغير (V) مستويات عادة انخفاض الأداء CFTR، و (السادس) خلية ضعف استقرار سطح 4. على الرغم من أن الطفرات CFTR المشتركة ومدروسة، وظيفة CFTR والعلاقة مع الحالة السريرية لا تزال poorlفهم ذ على مستوى الفرد، لا سيما بالنسبة لمجموعة كبيرة من نادرة "اليتيمة" الطفرات ( www.CFTR2.org ) 1 و 3.
مؤخرا، تم تطوير عقاقير تستهدف بروتين CFTR في أزياء طفرة معينة. فئتين من CFTR الأدوية التي تستهدف البروتينات هي حاليا في الاستخدام السريري ولها طرق متميزة للعمل. Potentiators، مثل VX-770، وتعزيز الاحتمال مفتوحا من CFTR الطافرة المحلية apically وتعمل مباشرة على إضافة لخلايا 5. المصححين، مثل VX-809، واستعادة الاتجار اندوبلازمية مترجمة شبكية تتجمع CFTR وتتطلب مرحلة ما قبل الحضانة مع ويلاحظ الخلايا قبل آثار 6. وpotentiator CFTR، VX-770، وقد تم تسجيل للمواد الدراسية مع الطفرة G551D 7، 8، فضلا عن ثمانية أخرىCFTR النابضة الطفرات، بما في ذلك S1251N 9؛ معا، وتتم هذه الطفرات بنسبة 5٪ من جميع المواد CF. وقد أشارت التجارب السريرية الأخرى التي VX-770، جنبا إلى جنب مع مصحح VX-809، ويقتصر آثار بعد هامة على وظيفة الرئة ويؤدي إلى انخفاض في معدلات تفاقم في مواضيع متماثل لطفرة F508del التي يحملها 45-50٪ من المرضى 10، 11.
التجارب السريرية التقليدية لتحديد المواضيع التي تستجيب للأدوية داخل 50٪ المتبقية من مرضى التليف الكيسي مكلفة وتستغرق وقتا طويلا وليست ذات جدوى بالنسبة للأفراد مع الأنماط الوراثية CFTR نادرة للغاية. الرواية، وطرق شخصية فعالة من حيث التكلفة ضرورية لتتناسب مع عدد متزايد من جهري CFTR إلى الأفراد تحمل أي نوع من CFTR التحور. حتى الآن، وقد استرشد إدراج محاكمة مجموعات المرضى تحمل طفرات CFTR محددة من الدراسات باستخدام متحولة ترنسفكأيشن CFTR الجينات في ح نظم خلايا eterologous، تليها الدراسات الكهربية في غرفة أوسينج 5 و 6 و 12. ونظرا لعدم وجود نماذج CF الحيوانية الكافية والدراسات فعالية الدواء في الخلايا الظهارية القصبية متباينة الهواء السائل واجهة المستمدة من المواد يزدرع CF الرئة استخدمت لتطوير العقاقير 13 و 14 و 15. ومع ذلك، فإن محدودية توافر أنسجة الرئة يزدرع وإجراءات الغازية للحصول على خلايا الشعب الهوائية من المواد دون المرض في نهاية المرحلة تعرقل تحليل طفرات CFTR أقل شيوعا ومنع اختبار المخدرات بطريقة شخصية. للتغلب على هذه القيود، الأنسجة "سهولة الوصول"، مثل organoids القولون والمستقيم، وخلايا الشعب الهوائية الأنفية، وخلايا الشعب الهوائية المشتقة من الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها، ويجري حاليا التنقيب فيها عن العلاج بالعقاقير شخصية.
<p class= "jove_content"> سابقا، أنشأنا بروتوكولات للخلايا الجذعية ثقافة الظهارية من أي جهاز الهضمي في شكل 3D organoids 16 و 17. عوامل النمو في القولون البشري / المستقيم، والظروف ثقافة تنطوي على تعريف (طلائي عامل النمو (EGF)، الغاسترين، WNT-3A، R-spondin 3 (Rspo3)، ورأس) جنبا إلى جنب مع جزيئات صغيرة (نيكوتيناميد، A83-01، وSB202190) في مصفوفة الغشاء القاعدي. في ظل هذه الظروف، والخلايا الجذعية واحدة أو أجزاء الأنسجة الصغيرة على النمو للخروج الى مغلقة، الكيسي، هياكل 3D التي شكلتها ظهارة درجة عالية من الاستقطاب مع الجانب القاعدي لها موجهة نحو الخارج. تظهر جميع أنواع الخلايا عادة في النسب والمواقف المعتادة. Organoids يمكن توسيعها على مدى فترات زمنية طويلة بسبب عرقلة الميكانيكية الأسبوعية وإعادة الطلاء. هم جينيا ومستقر ظاهريا، ويمكن تخزينها، مما يتيح التوسع على المدى الطويل والحيوي المصرفي 17. وهي قابلة للجميع التلاعب القياسية الخلايا البيولوجية / الجينية والتقنيات التحليلية وضعت لخطوط الخلايا 2D 18.نحن في الآونة الأخيرة أظهرت أن وظيفة CFTR يمكن قياسها بسهولة في organoids القولون والمستقيم في يسببها forskolin تورم (FIS) فحص 19 و 20. عندما تتعرض لforskolin (FSK) أو، بدلا من ذلك، لبكتيريا الكوليرا، organoids زيادة أعدادها بسرعة الأدينوزين الأدينوزين الحلقي (المخيم) المستويات، والتي تؤدي بدورها في افتتاح قناة CFTR 19. سوف Organoids من الأفراد الأصحاء، أو من الموضوعات مع طفرات CFTR المرتبطة مع وظيفة المتبقية، تضخم في وقت لاحق نتيجة لايون ونقل المياه إلى التجويف عضي، أي ما يعادل في المختبر من الإسهال إفرازية. وقد أظهرت استجابة الجبهة الإسلامية للإنقاذ من organoids القولون والمستقيم في السابق أن تكون تماما CFTR التي تعتمد، كما يتضح من organoids المستمدة من الأفراد CFTR باطل لالثانية عن طريق استخدام مثبطات CFTR محدد بالعقاقير 19. مجموعات البيانات موضوعا محددا كبيرة يمكن استخلاصها في غضون عدة أسابيع بعد أخذ الخزعة.
للمقايسة الجبهة الإسلامية للإنقاذ وصفها في التفاصيل هنا، organoids ومثقف من الخزعات المستقيم التي يمكن الحصول عليها في أي سن وفقط مع عدم الراحة محدود 21. و passaged Organoids أسبوعيا بسبب عرقلة الميكانيكية في الأقبية واحدة أن ختم بسهولة وتشكيل organoids الجديد. لتشغيل الفحص الجبهة الإسلامية للإنقاذ، ~ ومطلي 30-80 من هذه organoids القليل تعطلت في كل بئر من لوحة 96-جيدا 19. في يوم الفحص، ملطخة organoids مع الأخضر calcein، وهي خلايا قابلة للاختراق صبغة الفلورسنت التي يتم الاحتفاظ بها داخل الخلايا الحية، وتسهيل التصوير الحي. ثم، يضاف FSK، الأمر الذي يثير مخيم داخل الخلايا، وبالتالي ينشط CFTR من أجل تحفيز تورم عضوي الشكل. تضاف Potentiators التي تعمل على CFTR قمي في وقت واحد ثإيث forskolin، في حين أن المصححين أن استعادة الاتجار CFTR تضاف 24 ساعة قبل إضافة FSK. وكميا تورم عضوي الشكل عن طريق تحليل الصور الآلي التي تحسب الزيادة النسبية في مساحة إجمالية قدرها كافة الكائنات الفلورسنت لكل نقطة زمنية على إضافة forskolin.
عضي 3D تورم يوفر مزايا وعيوب على قراءات CFTR الكهربية الموجودة في 2D خلايا الشعب الهوائية مثقف في غرفة أوسينج. والميزة الرئيسية هي مرت من فحص التورم. الخلايا مثقف ويعاير باستخدام نوع واحد من مستنبت، ويمكن للفني من ذوي الخبرة ثقافة ما يصل الى 25 عينة عضي على أساس أسبوعي بينما قياس ما يقرب من 1200 نقطة البيانات أسبوعيا في 12 عينات من المرضى. نحن تقليديا اكتب حالة تجريبية واحدة من القياسات مكررة أو ثلاث نسخ لكل لوحة، وتكرار مثل هذه القياسات في ثلاث نقاط فترة حضانة مستقلة. في المجموع، ما يقرب من 300-500 قثم يتم قياس إنجل عضي الهياكل في حالة تجريبية، الأمر الذي يؤدي إلى قياسات دقيقة للغاية من وظيفة CFTR مع تقلب فنيا محدودا. هذه الدقة تتيح لنا أن تحدد بوضوح الاختلافات في وظيفة المتبقية وردا على جهري CFTR وتتيح لنا اختيار ما يصل بسهولة آثار خلفية وراثية بين المرضى الذين يحملون طفرات CFTR متطابقة 19، 22، 23، 24، 25. جودة البيانات التي يمكن تقييمها بسهولة من الصور المجهر. بينما الجبهة الإسلامية للإنقاذ هو تماما CFTR التي تعتمد، وهو قياس النتيجة غير المباشرة لوظيفة CFTR، للخروج قراءة الناجم عن اقتران النقل أيون لنقل السوائل. وهذا يتناقض مع القياسات وظيفة CFTR مباشرة في غرف Ussing، التي تقيس بطريق الظهارة التيارات أيون 26. غرف Ussing تسمح حدد تحفيز ج قمي أو basolateralompartments (الذي فحص عضوي الشكل لا يسمح)؛ بواسطة permeabilizing الأغشية basolateral، والقمي تعتمد على CFTR إفراز أنيون يمكن قياسها بشكل انتقائي (27).
Protocol
Representative Results
Discussion
هنا، ونحن نقدم بروتوكول كامل للجيل، والتوسع، التجمد، وذوبان organoids القولون البشري. في حين أنشأنا الثقافات عضي الإنسان منذ بعض الوقت 17، فقد ثبت في بعض الأحيان من الصعب تحديد التكنولوجيا في مختبرات أخرى دون التدريب العملي على التدريب. ونحن نتوقع أن هذه الب?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل برنامج HIT-CF من CF الأساس الهولندية (NCFS)، ZonMW (40-00812-98-14103)، وصندوق أبحاث مستشفى يلهيلمينا الأطفال وتشيكوسلوفاكيا، وZilverenkruis / Achmea. ونود أن نشكر S. Heida ميشيل، M. GEERDINK، KM دي وينتر دي غروت، وG. Berkers (قسم أمراض الأطفال أمراض الرئة، ومستشفى يلهيلمينا الأطفال، UMC اوتريخت)، وRHJ هوفن (قسم أمراض الأطفال أمراض الجهاز الهضمي، ويلهيلمينا مستشفى الأطفال، UMC أوتريخت) لتقترب من المرضى والحصول على خزعات لجيل من CF البنك الحيوي.
Materials
| Advanced Dulbecco’s Modified Eagles Medium with Nutrient Mixture F-12 Hams (Ad-DF) 500ml | Thermo Fisher Scientific: Invitrogen | #12634 | stored at 4 °C |
| GlutaMax | Thermo Fisher Scientific: Invitrogen | #35050 | stored at 4 °C |
| Hepes | Thermo Fisher Scientific: Invitrogen | # 15630-056 | stored at 4 °C |
| Penicillin/Streptomycin | Thermo Fisher Scientific: Invitrogen | #15140-122 | stored at -20 °C |
| 96 well culture plate | Cellstar | #655180 | |
| 24 well culture plate | Cellstar | #662160 | |
| 6 well culture plate | Cellstar | #657160 | |
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (-) CaCl2 (-) MgCl2) (DPBS) | Life Technologies: Gibco | #14190-094 | stored at 4 °C |
| Dulbecco’s Modified Eagles Medium (DMEM) 500ml | Thermo Fisher Scientific: Invitrogen | #31966-021 | For Wnt-3A Conditioned Medium Production. Stored at 4 °C |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | Bovogen | #SFBS LOT#11113 | For Wnt-3A Conditioned Medium Production. Stored at -20 °C |
| L Wnt3A cell line | ATCC | #CRL-2647 | For Wnt-3A Conditioend Medium Production. |
| TOP/FOP plasmids | Millipore | #17-285 | For measuring Wnt activity |
| pTK-Renilla | Promega | #E2241 | For measuring Wnt activity |
| HEK-293 | ATCC | #CRL-1573 | For measuring Wnt activity |
| Dual-Luciferase Reporter Assay System | Promega | #E1910 | For measuring Wnt activity |
| Zeocin | Thermo Fisher Scientific: Invitrogen | #R250-01 | For Wnt-3A Cell line selection |
| B27 supplement | Thermo Fisher Scientific: Invitrogen | #17504-044 | stored at -20 °C |
| N-Acetylcysteine | Sigma Aldrich | #A9165-5G | stored at -20 °C |
| Nicotinamide | Sigma Aldrich | #N0636 | stored at -20 °C |
| Human Epithelial Growth Factor (hEGF) | PrepoTech | #AF-100-15 | stored at -20 °C |
| Gastrin | Sigma Aldrich | #G9145 | stored at -20 °C |
| TGFb type I Receptor inhibitor (A83-01) | Tocris | #2939 | stored at -20 °C |
| Y-27632 dihydrochloride (RhoKi) | Selleckchem | #S1049 | stored at -20 °C |
| p38 MAPK inhibitor (p38i) (SB202190) | Sigma Aldrich | #S7067 | stored at -20 °C |
| Primocin | InvivoGen | #ant-pm-1 | stored at -20 °C |
| Human Noggin (hNoggin) | PrepoTech | #120-10C | stored at -20 °C |
| Human R-spondin 3 (hRspo-3) | R&D Systems | #3500-RS/CF | stored at -20 °C |
| Vancomycin | Sigma Aldrich | #861987- 250mg | stored at -20 °C |
| Gentamycin | Life Technologies: Gibco | #15710-049 | stored at -20 °C |
| Ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) | Sigma Aldrich | #431788 | Stored at 4 °C |
| Matrigel | Corning | #354230 | stored at -80 °C |
| TryplE Express | Life Technologies: Gibco | #12605-010 | for trypsinizing organoids for freezing |
| Recovery Cell Culture Freezing Medium | Life Technologies: Gibco | #12648010 | for freezing |
| Calcein | Life Technologies: Gibco | #C3100MP | stored at -20 °C |
| Forskolin | R&D Systems | #1099-50 mg | stored at -80 °C |
| Lumacaftor (VX-809) | Selleckchem | #s1565 | stored at -80 °C |
| Ivacaftor (VX-770) | Selleckchem | #s1144 | stored at -80 °C |
| Name of Reagents/Material | Solvent | Stock Concentration | Final Concentration |
| GlutaMax | 200 mM | 2m M | |
| Hepes | 1 M | 10 mM | |
| Penicillin/Streptomycin | 10K U/ml 10K µg/ml | 100 U/ml 100 µg/ml | |
| Zeocin | 100 mg/ml | 125 µg/ml | |
| B27 supplement | 100 x | 1 x | |
| N-Acetylcysteine | MiliQ H20 | 500 mM | |
| Nicotinamide | DPBS | 1 M | 10 mM |
| Human Epithelial Growth Factor (hEGF) | DPBS 0.1%BSA | 0.5 mg/ml | 50 ng/ml |
| Gastrin | DPBS | 100 µM | 10 nM |
| TGFb type I Receptor inhibitor (A83-01) | DMSO | 5 mM | 500 nM |
| Y-27632 dihydrochloride (RhoKi) | DMSO | 10 mM | 10 µM |
| p38 MAPK inhibitor (p38i) (SB202190) | DMSO | 30 mM | 10 µM |
| Primocin | 50 mg/ml | 100 µg/ml | |
| Human Noggin (hNoggin) | DPBS 0.1%BSA | 100 µg/ml | 100 ng/ml |
| Human R-spondin 3 (hRspo-3) | varies per lot | 300 ng/ml | |
| Vancomycin | 10 mg/ml | 50 µg/ml | |
| Gentamycin | 10 mg/ml | 50 µg/ml | |
| Ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) | MiliQ H20 | 0.5 M | 2 mM |
| Calcein | DMSO | 10 µg/ml | 3.3 ng/ml |
| Forskolin | DMSO | 10 mM | variable |
| Lumacaftor (VX-809) | DMSO | 20 mM | variable |
| Ivacaftor (VX-770) | DMSO | 20 mM | variable |
Referências
- De Boeck, K., Amaral, M. D. Progress in therapies for cystic fibrosis. Lancet Respir Med. 4 (8), 662-674 (2016).
- Cutting, G. R. Cystic fibrosis genetics: from molecular understanding to clinical application. Nature Rev Genet. 16 (1), 45-56 (2015).
- Sosnay, P. R., Siklosi, K. R., et al. Defining the disease liability of variants in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene. Nature Genet. 45 (10), 1160-1167 (2013).
- Zielenski, J. Genotype and phenotype in cystic fibrosis. Respiration. 67 (2), 117-133 (2000).
- Van Goor, F., Hadida, S., et al. Rescue of CF airway epithelial cell function in vitro by a CFTR potentiator, VX-770. Proc Natl Acad Sci U.S.A. 106 (44), 18825-18830 (2009).
- Van Goor, F., Hadida, S., et al. Correction of the F508del-CFTR protein processing defect in vitro by the investigational drug VX-809. Proc Natl Acad Sci U.S.A. 108 (46), 18843-18848 (2011).
- Accurso, F. J., Rowe, S. M., et al. Effect of VX-770 in persons with cystic fibrosis and the G551D-CFTR mutation. N Engl J Med. 363 (21), 1991-2003 (2010).
- Ramsey, B. W., Davies, J., et al. A CFTR potentiator in patients with cystic fibrosis and the G551D mutation. N Engl J Med. 365 (18), 1663-1672 (2011).
- De Boeck, K., Munck, A., et al. Efficacy and safety of ivacaftor in patients with cystic fibrosis and a non-G551D gating mutation. J Cyst Fibros. 13 (6), 674-680 (2014).
- Boyle, M. P., Bell, S. C., et al. A CFTR corrector (lumacaftor) and a CFTR potentiator (ivacaftor) for treatment of patients with cystic fibrosis who have a phe508del CFTR mutation: a phase 2 randomised controlled trial. Lancet Respir Med. 2 (7), 527-538 (2014).
- Wainwright, C. E., Elborn, J. S., et al. Lumacaftor-Ivacaftor in Patients with Cystic Fibrosis Homozygous for Phe508del CFTR. N Engl J Med. 373 (3), 220-231 (2015).
- Van Goor, F., Yu, H., Burton, B., Hoffman, B. J. Effect of ivacaftor on CFTR forms with missense mutations associated with defects in protein processing or function. J Cyst Fibros. 13 (1), 29-36 (2014).
- Neuberger, T., Burton, B., Clark, H., Van Goor, F. Use of primary cultures of human bronchial epithelial cells isolated from cystic fibrosis patients for the pre-clinical testing of CFTR modulators. Methods Mol Biol. 741, 39-54 (2011).
- Randell, S. H., Fulcher, M. L., O’Neal, W., Olsen, J. C. Primary epithelial cell models for cystic fibrosis research. Methods Mol Biol. 742, 285-310 (2011).
- Karp, P. H., Moninger, T. O., et al. An in vitro model of differentiated human airway epithelia. Methods for establishing primary cultures. Methods Mol Biol. 188, 115-137 (2002).
- Sato, T., Vries, R. G., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
- Sato, T., Stange, D. E., et al. Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett’s epithelium. Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).
- Clevers, H. Modeling development and disease with Organoids. Cell. 165 (7), 1586-1597 (2016).
- Dekkers, J. F., Wiegerinck, C. L., et al. A functional CFTR assay using primary cystic fibrosis intestinal organoids. Nature Med. 19 (7), 939-945 (2013).
- Dekkers, J. F., van der Ent, C. K., Beekman, J. M. Novel opportunities for CFTR-targeting drug development using organoids. Rare Diseases. 1 (1), e27112 (2014).
- Servidoni, M. F., Sousa, M., et al. Rectal forceps biopsy procedure in cystic fibrosis: technical aspects and patients perspective for clinical trials feasibility. BMC gastroenterology. 13, 91 (2013).
- Ommen, D. D. Z. -. V., Vijftigschild, L. A. W., et al. Limited premature termination codon suppression by read-through agents in cystic fibrosis intestinal organoids. J Cyst Fibros. 15 (2), 158-162 (2016).
- Dekkers, J. F., Gogorza Gondra, R. A., et al. Optimal correction of distinct CFTR folding mutants in rectal cystic fibrosis organoids. Eur Respir J. , (2016).
- Dekkers, J. F., Van Mourik, P., et al. Potentiator synergy in rectal organoids carrying S1251N, G551D, or F508del CFTR mutations. J Cyst Fibros. , (2016).
- Dekkers, J. F., Berkers, G., et al. Characterizing responses to CFTR-modulating drugs using rectal organoids derived from subjects with cystic fibrosis. Sci Transl Med. 8 (344), 344ra84 (2016).
- Li, H., Sheppard, D. N., Hug, M. J. Transepithelial electrical measurements with the Ussing chamber. J Cyst Fibros. 3, 123-126 (2004).
- Sheppard, D. N., Carson, M. R., Ostedgaard, L. S., Denning, G. M., Welsh, M. J. Expression of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator in a model epithelium. Am J Physiol. 266 (4 Pt 1), L405-L413 (1994).
- Farin, H. F., van Es, J. H., Clevers, H. Redundant sources of Wnt regulate intestinal stem cells and promote formation of Paneth cells. Gastroenterology. 143 (6), 1518-1529 (2012).
- Drost, J., et al. Organoid culture systems for prostate epithelial and cancer tissue. Nat Protoc. 11 (2), 347-358 (2016).
- Vijftigschild, L. A. W., Berkers, G., et al. β2-adrenergic receptor agonists activate CFTR in organoids and subjects with cystic fibrosis. Eur Respir J. 48 (3), 768-779 (2016).
- Dekkers, R., et al. A bioassay using intestinal organoids to measure CFTR in human plasma. J Cyst Fibros. 14 (2), 178-181 (2015).
- Graeber, S. Y., et al. Intestinal Current Measurements Detect Activation of Mutant CFTR in Patients with Cystic Fibrosis with the G551D Mutation Treated with Ivacaftor. Am J Respir Crit Care Med. 192 (10), 1252-1255 (2015).
- Van Goor, F., et al. Ivacaftor potentiation of multiple CFTR channels with gating mutations. Journal of Cystic Fibrosis: Official Journal of the Eur Cyst Fibrosis. 11 (3), 237-245 (2012).
