ネズミ大動脈挫傷：効率的<em>インビボ</em>平滑筋細胞の増殖と内皮機能のモデル
Summary
心血管手術（バイパス手術、血管形成術、またはステント留置）後の再狭窄は、これらの処置の耐久性を低下させる重大な問題である。理想的な療法は、平滑筋細胞（VSMC）の増殖を阻害し、内皮の再生を促進する。インビボでのVSMC増殖および内皮機能の同時評価のためのモデルを記載する。
Abstract
血管形成術かバイパス手術かにかかわらず、動脈再構築は、内皮破壊および血管平滑筋細胞（VSMC）増殖を引き起こす医原性外傷を伴う。一般的なマウスモデルは、頸動脈および大腿動脈などの小型血管を研究する。本明細書では、VSMC増殖および内皮バリア機能の両方を大きな血管において同時に評価することができるin vivoシステムを記載する。我々は、C57BL / 6マウスの損傷に対する腎臓下大動脈反応を研究した。大動脈は、左腎静脈から大動脈分岐部に損傷を受け、コットン先端のアプリケータを用いて5秒間30回の経壁破砕を行った。形態学的変化は、従来の組織学を用いて評価した。大動脈壁の厚さを内腔表面から外膜まで測定した。 VSMCの増殖を実証するために、DAPIおよびα-アクチンによるEdUの統合および対比染色を用いた。内膜肥厚形成の既知のモデレーターであるERK1 / 2の活性化が抑制されたウエスタンブロット分析によって採取した。炎症の影響は、B細胞、T細胞、およびマクロファージの免疫組織化学によって決定した。内皮のEnフェイス切片を走査型電子顕微鏡（SEM）で視覚化した。 Evans Blue染色で内皮バリア機能を測定した。経壁損傷により大動脈壁が肥厚した。この損傷はVSMC増殖を誘発し、損傷後3日目に最も顕著であり、ERK1 / 2の早期活性化およびp27 kip1発現の減少を引き起こした。傷害は、B細胞、T細胞、または血管壁におけるマクロファージの浸潤を増加させなかった。傷害は部分的な内皮細胞の脱落および細胞 – 細胞接触の喪失を引き起こした。傷害は、内皮バリア機能の有意な喪失をもたらし、これは7日間後にベースラインに戻った。マウス経壁鈍的大動脈傷害モデルは、大血管におけるVSMC増殖および内皮バリア機能の両方を同時に研究するための効率的なシステムを提供する。
Introduction
再狭窄 （バイパス手術、血管形成術、またはステント留置）後のこれらの処置の耐久性を低下させる重大な問題である。すべての血管再生手順は、再狭窄に悩まされている。再狭窄（薬物溶出ステントおよび薬物被覆バルーン）を防止するための現在の戦略は、血管平滑筋細胞（VSMC）および内皮細胞増殖（EC）の両方を阻害する。結果的に、これらの介入は、VSMC媒介性再狭窄を予防するが、内皮の再生も妨げる。損なわれていない内皮がなければ、出血合併症のリスクのある現場血栓症のリスクを低下させるために、患者は強力な抗血小板薬を必要とする。理想的な療法は、内皮の再生を促進しながらVSMCの増殖を阻害するであろう。したがって、 インビボで VSMC増殖および内皮バリア機能を同時に研究する必要がある。
現在、再狭窄のマウスモデル1 。これらのモデルには、頸動脈結紮および大腿動脈ワイヤ損傷2が含まれる 。大動脈モデルは、ステント配置3 、バルーン損傷4 、および大動脈同種移植5を含む 。現在のモデルはすべて制限されています。頸動脈結紮は、フロー媒介新生内膜病変を生じ、内皮傷害を有しない。さらに、頚動脈および大腿動脈の両方は、ヒトの血管よりも数倍少ない細胞層を有し、それらの翻訳値を制限する。直径約1.3mmのマウス大動脈は、臨床的に関連する（冠状動脈）ヒト動脈に近似する唯一の血管である（3）。
マウス大動脈モデルの翻訳能にもかかわらず、現在のモデルには限界があります。これらのモデルには、高度なマイクロサージカルスキルと、血管形成バルーンやステントなどの特殊な機器が必要です。ここでは、VSMC増殖を同時に誘導し、内皮バリア機能を破壊する新規で再現可能な技術である。
Protocol
Representative Results
Discussion
本発明者らは、内側過形成および内皮障壁機能不全を生じるマウス大動脈損傷モデルの効果を特徴付けた。大動脈内膜に沿った部分的なEC剥離は、細胞 – 細胞接触の喪失および細胞突起の増強を伴った。相応して、内皮バリア機能が有意に損なわれ、マイトジェン感受性シグナル伝達経路を刺激し、VSMCの増殖および血管壁の肥厚をもたらした。このモデルの強みは、他の大動脈モデルと比べ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は、走査型電子顕微鏡サンプルを処理する彼女の技術的支援のために、メリーランド大学医学部の電子顕微鏡検査施設からのHsia Ru-ching博士に感謝します。
Materials
| Ocular lubricant | Dechra | 17033-211-38 | Pharmaceutical agents |
| Isoflurane | VetOne | 502017 | Pharmaceutical agents |
| Carprofen | Zoetis | 26357 | Pharmaceutical agents |
| Precision vaporizer | Summit Medical | 10675 | Surgical supplies |
| Charcoal scavenger | Bickford Inc. | 80120 | Surgical supplies |
| Isothermal pad | Harvard Apparatus | 50-7053-R | Surgical supplies |
| Sterile cotton-tipped applicator | Fisher Scientific | 23-400-124 | Surgical supplies |
| 4-0 absorbable monofilament suture | Ethicon, Inc | J310 | Surgical supplies |
| 5-0 non-absorbable monofilament suture | Ethicon,Inc | 1666 | Surgical supplies |
| 21-gauge x 1 inch needle | BD Biosciences | 305165 | Surgical supplies |
| 25-gauge x 1 inch needle | BD Biosciences | 305125 | Surgical supplies |
| Dry sterilizer | Cellpoint | 7770 | Surgical supplies |
| Fine scissors | Fine Science Tools | 14058-09 | Surgical instruments |
| Adson forceps | Fine Science Tools | 11006-12 | Surgical instruments |
| Dumont #5 fine forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | Surgical instruments |
| Vannas Spring Scissors 3mm cutting edge | Fine Science Tools | 15000-00 | Surgical instruments |
| Needle driver | Fine Science Tools | 91201-13 | Surgical instruments |
| Scalpel handle #4 | Fine Science Tools | 10004-13 | Surgical instruments |
| Scalpel blades #10 | Fine Science Tools | 10010-00 | Surgical instruments |
| PBS | Lonza | 17-516F | Reagents for tissue processing |
| Evans Blue | Sigma-Aldrich | E2129 | Reagents for tissue processing |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | Reagents for tissue processing |
| Modeling wax | Bego | 40001 | Reagents for tissue processing |
| OCT compound | Tissue-Tek Sakura | 4583 | Reagents for tissue processing |
| Mayer's hematoxylin solution | Sigma-Aldrich | MHS16 | Reagents for immunohistological analysis |
| Eosin Y solution alcoholic | Sigma-Aldrich | HT110316 | Reagents for immunohistological analysis |
| Elastin stain kit | Sigma-Aldrich | HT25A | Reagents for immunohistological analysis |
| Click-it Edu Alexa-488 Imaging Kit | Invitrogen | C10337 | Reagents for immunohistological analysis |
| Anti-Erk1/2 antibody | Cell Signaling Technology | 4695 | Reagents for immunohistological analysis |
| Anti-phospho-Erk1/2 antibody | Cell Signaling Technology | 4370 | Reagents for immunohistological analysis |
| Anti-p27kip1 antibody | Cell Signaling Technology | 3698 | Reagents for immunohistological analysis |
| Trichloroacetic acid | Sigma-Aldrich | T9159 | Reagents for immunohistological analysis |
Referências
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