O campo local microscopia de fluorescência: Geração de sinais de celular em corações intactos

Yuriana Aguilar-Sanchez; Diego Fainstein; Rafael Mejia-Alvarez; Ariel L. Escobar

doi:10.3791/55202

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Artigo de método

O campo local microscopia de fluorescência: Geração de sinais de celular em corações intactos

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DOI:

10.3791/55202

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8 de março de 2017

Yuriana Aguilar-Sanchez^*¹ , Diego Fainstein^*²^,³ , Rafael Mejia-Alvarez⁴ , Ariel L. Escobar⁵

¹School of Natural Sciences, University of California, Merced, ²Centro de Investigaciones Cardiovasculares, Universidad de la Plata and Conicet, ³Facultad de Ingenieria, Universidad Nacional de Entre Rios, ⁴Department of Physiology, Midwestern University, ⁵School of Engineering, University of California, Merced

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

No coração, os eventos moleculares coordenar a função contráctil e eléctrica do órgão. Um conjunto de técnicas de microscopia de fluorescência de campo locais aqui apresentadas permite a gravação de variáveis de celular em corações intactos. Identificação de mecanismos que definem a função cardíaca é fundamental na compreensão de como o coração trabalha em situações patológicas.

Resumo

No coração, os estudos de sinalização molecular são geralmente realizadas em miócitos isolados. No entanto, muitas situações patológicas, tais como isquemia e arritmias só pode ser totalmente entendido a todo o nível do órgão. Aqui, apresentamos a técnica de espectroscopia de fluorescência microscopia de campo local (LFFM) que permite a medição de sinais celulares no coração intacto. A técnica baseia-se numa combinação de um coração perfundido de Langendorff e fibras ópticas para gravar sinais fluorescentes. LFFM tem várias aplicações no campo da fisiologia cardiovascular para estudar o coração em condições normais e patológicas. Várias variáveis cardíacas pode ser monitorizada utilizando diferentes indicadores fluorescentes. Estes incluem citosólica ^{[Ca2 +],} retículo sarcoplasmático intra-[Ca ^2+] e potenciais de membrana. As sondas fluorescentes exógenos são animado e a fluorescência emitida detectada com três arranjos diferentes de técnica LFFM epifluorescências apresentada neste artigo. As diferenças central entre estas técnicas são o tipo de fonte de luz utilizada para excitação e sobre a forma como a luz de excitação é modulada. O LFFM pulsada (PLFFM) usa pulsos de luz laser, enquanto onda contínua LFFM (CLFFM) usa luz laser contínuo para a excitação. Finalmente, diodos emissores de luz (LEDs) foram usadas como uma fonte de luz terceiro. Este arranjo não coerente é chamado pulsada microscopia de fluorescência LED (PLEDFM).

Introdução

O coração é o órgão central do sistema cardiovascular. A contracção do coração é iniciado por um aumento intracelular ^{[Ca2 +].} A relação entre a excitabilidade elétrica e as mudanças no intracelular liberação ^{de Ca2 +} tem sido historicamente estudado em células enzimaticamente dissociada ^{^1,} ^2. No entanto, as células cardíacas estão electricamente, metabolicamente e mecanicamente acoplada ^{^3,} ^4. Quando isolado, os miócitos não são só fisicamente desacoplado, mas miócitos de diferentes camadas são misturados durante a dissociação