تسليم ينترادوكتال إلى الأرنب الغدة الثديية
Summary
Here, we describe a technique for the localized delivery of reagents to the rabbit mammary gland via an intraductal injection. In addition, we describe a protocol for visualization and the confirmation of delivery by high-resolution ultrasound imaging of contrast agents.
Abstract
العلاجات ينترادوكتال محلية للكشف عن سرطان الثدي توفر مزايا المحتملة، بما في ذلك التنفيذ الفعال للورم وخفض سمية جهازية والآثار الضارة 1، 2، 3، 4، 5، 6، 7. ومع ذلك، لا تزال هناك العديد من التحديات قبل أن يتم تطبيق هذه العلاجات على نطاق أوسع. تطوير والتحقق من العلاجات ينترادوكتال في نموذج حيواني المناسبة تسهيل تطوير استراتيجيات علاجية ينترادوكتال للمرضى. في حين أن الغدة الثديية الماوس وقد استخدم على نطاق واسع كنظام نموذج للتنمية الثديية وتكون الأورام، وعلم التشريح هو واضح من الغدة الإنسان. نموذج حيوان أكبر، مثل الأرنب، قد يكون بمثابة نموذج أفضل للهيكل الغدة الثديية والتنمية العلاجية ينترادوكتال. في جontrast على الفئران، حيث يتم توزيع عشرة أشجار الأقنية مكانيا على طول محور الجسم، كل تنتهي في حلمة منفصلة، الغدة الثديية أرنب أكثر شبها الغدة الإنسان، مع عدة أنظمة الأقنية المتداخلة التي الخروج من خلال فتحات منفصلة في حلمة واحدة. هنا، فإننا نقدم طرق الغازية الحد الأدنى لإيصال الكواشف مباشرة في أرنب القناة الثديية والتصور لتسليم نفسه مع عالية الدقة التصوير بالموجات فوق الصوتية.
Introduction
وقد درس تسليم ينترادوكتال من العوامل العلاجية في نماذج القوارض وفي التجارب على الانسان مرحلة مبكرة 3، 4، 5، 6، 11، 12. والمرحلة الأخيرة أدرس أثبتت سلامة وجدوى الكاربوبلاتين ينترادوكتال أو ينترادوكتال مضاد للفيروسات دوكسوروبيسين liposomal في النساء تنتظر استئصال الثدي لعلاج سرطان الغازية 2.
وقد تم تطوير البروتوكولات السابقة للتسليم ينترادوكتال فأرة الحاسوب والثدي الفئران الغدد 6، 7، 8، 9. لأغراض البحث، حقن الخلايا السرطانية ينترادوكتال وlentiviral تسليم ناقلات الجينات المسرطنة كما تم القيام بها في نماذج القوارضالمرجع "> 13، 14، 15، 16. ومع ذلك، مثالية في نموذج الجسم الحي من عملية التسليم ينترادوكتال ينبغي أن يسمح تطوير فئات جديدة من المركبات العلاجية وتسهيل تقييم ما قبل السريرية. وقد تعقدت الاختلافات التشريحية بين القوارض والبشر ترجمة هذه دراسات.
على عكس الفئران، التي في كل قناة ينتهي في حلمة منفصلة، الثدي البشري يتكون من 5-9 أنظمة الأقنية مستقلة، لكل منها افتتاح منفصل تنتهي عند الحلمة. أرنب الغدد الثديية تؤوي أربعة أنظمة الأقنية مستقلة، كل على حدة يمكن الوصول إليها من خلال واحدة من أربع فتحات في حلمة واحدة. نموذج أرنب مباريات أكثر عن كثب التشريح البشري وتسمح هذه الدراسة من تسليم المخدرات ينترادوكتال في سياق أكثر أهمية.
هنا، نحن نستخدم اثنين من التقنيات المستخدمة لتقييم تسليم ينترادوكتال. شارك في إدارة ليسمح صبغ حيوي التصور من خلال الجلد ويوفر تأكيدا بسيطة وسريعة للطريقة. بالنسبة لبعض التطبيقات، أعلى رسم الخرائط قرار من القنوات قد يكون من المفضل. نقدم هنا بروتوكول للتصوير بالموجات فوق الصوتية من القنوات من خلال تقديم ينترادوكتال من كاشف غير المستهدفة التباين.
Protocol
Representative Results
Discussion
ويمكن استخدام هذه الطريقة لتسليم ينترادوكتال إلى الغدة الثديية أرنب للمواد النقيض من الموجات فوق الصوتية والعديد من المحاليل المائية الأخرى، بما في ذلك الأصباغ الحيوية والعلاجات. وقد أظهرت الدراسات السابقة تسليم ينترادوكتال الهرمونات 17 و <sup class=…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors acknowledge support from a Translational Breast Cancer Research Grant (14-60-26-BROC to AB) from the Breast Cancer Research Foundation and the American Association for Cancer Research.
Materials
| MicroMarker non-targeted contrast reagent | VisualSonics | VS-11694 | |
| Luer Lock 1mL Syringes | BD | 309628 | |
| Glycopyrrolate 0.2mg/mL | Wedgewood Compounding Pharmacy | GLYCOP-INJ013VC | 6 month shelf life, supply may be limited. |
| Atropine Sulfate 0.5 mg/mL | Animal Health International | 15320764 | If glycopyrrolate is unavailable. Not to be combined with glycopyrrolate. |
| Ketamine HCL 100mg/mL | Animal Health International | 21250699 | http://www.animalhealthinternational.com/ |
| Acepromazine 10mg/mL | Animal Health International | 17640541 | |
| Xylazine 20mg/mL | Animal Health International | 20101547 | |
| Yohimbine 0.2mg/mL | Animal Health International | 14588965 | |
| Hair Removing Cream | Veet | Sensitive skin solution. Available through local retailers. | |
| Blunt tip infusion needles | Sai Infusion Technology | B14-50 | http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles |
| Veterinary Pulse Oximeter | EdanUSA | VE-H100B | http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html |
| Warm Water Pump | Gaymar | TP700 | |
| Warm Water Blanket | Animal Health International | 21232696 | Maxi-Therm Lite Warming Pads |
| Ultrasound system | VisualSonics | Vevo 2100 |
Referências
- Flanagan, M., Love, S., Hwang, E. S. Status of Intraductal Therapy for Ductal Carcinoma in Situ. Curr Breast Cancer Rep. 2 (2), 75-82 (2010).
- Love, S. M., et al. A Feasibility Study of the Intraductal Administration of Chemotherapy. Cancer Prevention Research. 6 (1), 51-58 (2013).
- Stearns, V., et al. Preclinical and Clinical Evaluation of Intraductally Administered Agents in Early Breast Cancer. Sci Transl Med. 3 (106), 106ra108 (2011).
- Zhang, B., et al. The Safety Parameters of the Study on Intraductal Cytotoxic Agent Delivery to the Breast before Mastectomy. Chin J Cancer Res. 26 (5), 579-587 (2014).
- Mahoney, M. E., Gordon, E. J., Rao, J. Y., Jin, Y., Hylton, N., Love, S. M. Intraductal Therapy of Ductal Carcinoma In Situ: a Presurgery Study. Clin Breast Cancer. 13 (4), 280-286 (2013).
- Murata, S., et al. Ductal Access for Prevention and Therapy of Mammary Tumors. Cancer Res. 66 (2), 638-645 (2006).
- Chun, Y. S., et al. Intraductally Administered Pegylated Liposomal Doxorubicin Reduces Mammary Stem Cell Function In the Mammary Gland but in the Long Term, Induces Malignant Tumors. Breast Cancer Res Treat. 135 (1), 201-208 (2012).
- Brock, A., et al. Silencing HoxA1 by Intraductal Injection of siRNA Lipidoid Nanoparticles Prevents Mammary Tumor Progression in Mice. Sci Trans Med. 6 (217), 2172a2 (2014).
- Krause, S., Brock, A., Ingber, D. E. Intraductal Injection For Localized Drug Delivery To The Mouse Mammary Epithelium. J Vis Exp. (80), e50692 (2013).
- Brock, A., Goh, H. T., Yang, B., Yu, L., Li, H., Loh, Y. H. Cellular Reprogramming: A New Technology Frontier In Pharmaceutical Research. Pharm Res. 29 (1), 35-52 (2012).
- Silverstein, M. J., et al. Ductal Carcinoma In Situ of the Breast. Annu. Rev Med. 51, 17-32 (2000).
- Love, S. M., Barsky, S. H. Anatomy of the Nipple And Breast Ducts Revisited. Cancer. 101 (9), 1947-1957 (2004).
- Virnig, B. A., Shamliyan, T., Tuttle, T. M., Kane, R. L., Wilt, W. J. Diagnosis and Management of Ductal Carcinoma In Situ (DCIS). Evidence Report/Technology Assessment. , 185 (2009).
- Mills, D., et al. Examination of Duct Physiology in the Human Mammary Gland. PLoS One. 11 (4), e0150653 (2016).
- King, B. L., Love, S. M. The Intraductal Approach to the Breast: Raison d’Etre. Breast Cancer Res. 8 (2), 206 (2006).
- Bu, W., Xin, L., Toneff, M., Li, L., Li, Y. Lentivirus vectors for stably introducing genes into mammary epithelial cells in vivo . J Mammary Gland Biol Neoplasia. 14, 401-404 (2009).
- Lyons, W. R. The Direct Mammotrophic Action of Lactogenic Hormone. Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 51 (2), 308-311 (1942).
- Fiddler, T. J., Birkinshaw, M., Falconer, I. R. Effects Of Intraductal Prolactin On Some Aspects of the Ultrastructure and Biochemistry of Mammary Tissue in the Pseudopregnant Rabbit. J Endocrinol. 49 (3), 459-469 (1971).
- Falconer, I. R., Fiddler, T. J. Effects of Intraductal Administration Of Prolactin, Actinomycin D and Cycloheximide on Lipoprotein Lipase Activity in the Mammary Glands of Pseudopregnant Rabbits. Biochim Biophys Acta. 218 (3), 508-514 (1970).
- Singh, Y. Influence of Molecular Size on the Retention of Polymeric Nanocarrier Diagnostic Agents in Breast Ducts. Pharm Res. 29 (9), 2377-2388 (2012).
- Jain, R., et al. Atypical Ductal Hyperplasia: Interobserver and Intraobserver Variability. Mod Pathol. 24 (7), 917-923 (2011).
- Betsill, W. L., Rosen, P. P., Lieberman, P. H., Robbins, G. F. Intraductal Carcinoma. Long-term Follow-up After Treatment by Biopsy Alone. JAMA. 239 (18), 1863-1867 (1978).
- Eusebi, V., et al. Long-term Follow-up of In Situ Carcinoma of the Breast. Semin Diagn Pathol. 11 (3), 223-235 (1994).
- Sanders, M., et al. The Natural History Of Low-Grade Ductal Carcinoma In Situ Of The Breast In Women Treated By Biopsy Only Revealed Over 30 Years Of Long-Term Follow-Up. Cancer. 103 (12), 2481-2484 (2005).
- Esserman, L. J., et al. Addressing Overdiagnosis and Overtreatment in Cancer: A Prescription For Change. Lancet Oncol. 15 (6), e234-e242 (2014).
