Consegna intraduttale al Coniglio ghiandola mammaria

Summary

Here, we describe a technique for the localized delivery of reagents to the rabbit mammary gland via an intraductal injection. In addition, we describe a protocol for visualization and the confirmation of delivery by high-resolution ultrasound imaging of contrast agents.

Abstract

Trattamenti intraduttale localizzati per il cancro al seno offrono potenziali vantaggi, compresa la lettura efficiente al tumore e ridotta tossicità sistemica e effetti avversi ^{1, 2, 3, 4, 5, 6, 7.} Tuttavia, rimangono molte sfide prima di questi trattamenti possono essere applicati più ampiamente. Lo sviluppo e la validazione di terapie intraduttale in un modello animale adeguato facilitano lo sviluppo di strategie terapeutiche per i pazienti intraduttale. Mentre la ghiandola mammaria topo è stato ampiamente utilizzato come sistema modello di sviluppo mammario e tumorigenesi, l'anatomia è distinta dalla ghiandola umana. Un modello animale più grande, come il coniglio, può servire come un modello migliore per la struttura della ghiandola mammaria e sviluppo terapeutico intraduttale. in contrast a topi, in cui dieci alberi dotto sono spazialmente distribuiti lungo l'asse del corpo, ciascuna terminante in un capezzolo a parte, la ghiandola mammaria di coniglio assomiglia più da vicino la ghiandola umana, con più sistemi duttale sovrapposti che escono attraverso le aperture separate in una tettarella. Qui, vi presentiamo i metodi minimamente invasive per la fornitura di reagenti direttamente nel condotto mammaria coniglio e per la visualizzazione della stessa consegna con ecografia ad alta risoluzione.

Introduction

La consegna intraduttale di agenti terapeutici è stata studiata in modelli di roditori e in fase iniziale sperimentazione umana ^{3, 4, 5, 6, 11, 12.} Un recente studio di fase I ha dimostrato la sicurezza e la fattibilità di carboplatino intraduttale o intraduttale doxorubicina liposomiale pegilata in donne in attesa di mastectomia per il trattamento del cancro invasivo ^2.

Precedenti protocolli per la consegna intraduttale sono stati sviluppati per topo e ratto mammarie ghiandole ^{6, 7, 8, 9.} Per scopi di ricerca, iniezioni di cellule tumorali intraduttale e la consegna lentivirale vettore di oncogeni sono stati anche eseguiti in modelli di roditoriref "> ^{13, 14, 15, 16.} Tuttavia, un ideale modello in vivo del processo di consegna intraduttale dovrebbe consentire lo sviluppo di nuove classi di composti terapeutici e facilitare la valutazione preclinica. differenze anatomiche tra i roditori e gli esseri umani hanno complicato la traduzione di questi studi.

Diversamente topi, in cui ciascun condotto termina in un capezzolo separata, il seno umano è costituito da 5 a 9 sistemi duttali indipendenti, ognuno con un'apertura separata termina al capezzolo. Coniglio ghiandole mammarie porto quattro sistemi duttale indipendenti, ciascuna separatamente, accessibile attraverso uno dei quattro orifizi in una sola tettarella. Un modello di coniglio più si avvicina al anatomia umana e consente lo studio di drug delivery intraduttale in un contesto più rilevante.

Qui, usiamo due tecniche per valutare la consegna intraduttale. La co-somministrazione di uncolorante vitale permette la visualizzazione attraverso la pelle e fornisce una conferma semplice e rapida del metodo. Per alcune applicazioni, la mappatura risoluzione maggiore dei condotti può essere preferito. Presentiamo qui un protocollo per l'imaging ad ultrasuoni dei condotti attraverso la consegna intraduttale di un reagente non mirato contrasto.

Protocol

Le procedure che utilizzano soggetti animali sono stati approvati dal Comitato di Cura e uso istituzionale degli animali della University of Texas di Austin. 1. Preparazione preoperatoria Registrare il peso corporeo di ogni coniglio. Come per tutti gli studi preclinici, monitorare i pesi degli animali regolarmente per valutare la potenziale tossicità. Prima di anestetizzare il coniglio, riempire una provetta da 50 ml con gel per ultrasuoni disponibili in commercio e far…

Representative Results

Qui mostriamo che la consegna intraduttale di reagenti contrasto ai dotti mammari di un coniglio può essere raggiunta senza traumi al tessuto (Figura 2). Nei conigli, quattro sistemi duttale separati convergono in una sola tettarella e, quindi, possono essere consultati e ripreso individualmente con questo metodo. Aperture individuali duttale sono facilmente visualizzati; notare la marcatura di una seconda apertura duttale adiacente al condotto cannulata in Figu…

Discussion

Questo modo di somministrazione intraduttale alla ghiandola mammaria coniglio può essere utilizzato per i reagenti di contrasto ecografici e molte altre soluzioni acquose, compresi coloranti vitali e terapeutica. Studi precedenti hanno dimostrato la consegna intraduttale di ormoni ^{17, 18, 19.} Nei modelli di roditori, la consegna intraduttale di acidi nucleici ^8, chemioterapici ^6,<…

Materials

MicroMarker non-targeted contrast reagent	VisualSonics	VS-11694
Luer Lock 1mL Syringes	BD	309628
Glycopyrrolate 0.2mg/mL	Wedgewood Compounding Pharmacy	GLYCOP-INJ013VC	6 month shelf life, supply may be limited.
Atropine Sulfate 0.5 mg/mL	Animal Health International	15320764	If glycopyrrolate is unavailable. Not to be combined with glycopyrrolate.
Ketamine HCL 100mg/mL	Animal Health International	21250699	http://www.animalhealthinternational.com/
Acepromazine 10mg/mL	Animal Health International	17640541
Xylazine 20mg/mL	Animal Health International	20101547
Yohimbine 0.2mg/mL	Animal Health International	14588965
Hair Removing Cream	Veet		Sensitive skin solution. Available through local retailers.
Blunt tip infusion needles	Sai Infusion Technology	B14-50	http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles
Veterinary Pulse Oximeter	EdanUSA	VE-H100B	http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html
Warm Water Pump	Gaymar	TP700
Warm Water Blanket	Animal Health International	21232696	Maxi-Therm Lite Warming Pads
Ultrasound system	VisualSonics	Vevo 2100