Внутрипротокового Доставка в Кролика МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Summary
Here, we describe a technique for the localized delivery of reagents to the rabbit mammary gland via an intraductal injection. In addition, we describe a protocol for visualization and the confirmation of delivery by high-resolution ultrasound imaging of contrast agents.
Abstract
Локализованные внутрипротокового способы лечения рака молочной железы предлагают потенциальные преимущества, в том числе эффективной доставки к опухоли и снижению системной токсичности и побочных эффектов , 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7. Тем не менее, некоторые проблемы остаются, прежде чем эти методы лечения могут быть применены более широко. Разработка и утверждение внутрипротокового терапии в соответствующей животной модели способствовать развитию внутрипротокового терапевтических стратегий для пациентов. В то время как молочной железы мыши, широко используется в качестве модельной системы молочных желез развития и онкогенеза, анатомия отличается от человеческой железы. Больший модель на животных, таких как кролики, может служить в качестве лучшей модели для структуры молочной железы и внутрипротокового терапевтического развития. В Contrast мышам, в которых десять протоковых деревьев пространственно распределены вдоль оси тела, каждый оконечный в отдельном соске, кролик молочной железы больше напоминает человеческую железу, с несколькими перекрывающимися протоковой системы которые выходят через отдельные отверстия в одном соске. Здесь мы приводим минимально инвазивные методы доставки реагентов непосредственно в кроличьей молочных желез и проток для визуализации самой доставки с ультразвукового изображения с высокой разрешающей способностью.
Introduction
Внутрипротоковой доставки терапевтических агентов была изучена в моделях на грызунах и в ранней стадии испытаний на людях 3, 4, 5, 6, 11, 12. Недавнее исследование фазы I показали безопасность и целесообразность внутрипротокового карбоплатин или внутрипротокового пегилированного липосомального доксорубицина у женщин , ожидающих мастэктомии для лечения инвазивного рака 2.
Предыдущие протоколы для внутрипротокового поставки были разработаны для мышей и крыс молочных желез 6, 7, 8, 9. Для исследовательских целей, внутрипротокового инъекции опухолевых клеток и лентивирусов доставки вектора онкогенов также были выполнены в моделях на грызунахисх "> 13, 14, 15, 16. Тем не менее, идеал в естественных условиях модели внутрипротокового процесса доставки должен разрешить разработку новых классов терапевтических соединений и облегчают доклинические оценку. Анатомические различия между грызунами и людьми усложнили перевод этих исследования.
В отличие от мышей, в котором каждый канал заканчивается в отдельном соске, грудь человек состоит из 5-ти до 9 независимых протоковой систем, каждая из которых имеет отдельное отверстие, заканчивающийся в соске. Кролик молочных желез питают четыре независимых протоков системы, причем каждая по отдельности доступны через один из четырех отверстий в одном соске. Модель кролика более близко соответствует анатомии человека и позволяет изучать внутрипротокового доставки лекарственных средств в более соответствующем контексте.
Здесь мы используем два метода для оценки внутрипротоковая доставки. Совместное введениевитальным красителем позволяет визуализировать через кожу и обеспечивает простое и быстрое подтверждение метода. Для некоторых применений может быть предпочтительным более высокое разрешение отображение каналов. Мы представляем здесь протокол для ультразвуковой визуализации протоков через внутрипротокового доставки контрастного реагента нецелевого.
Protocol
Representative Results
Discussion
Этот метод внутрипротокового доставки на кролика молочной железы может быть использован для ультразвуковых контрастных реагентов и многих других водных растворах, в том числе жизненно важных красителей и терапевтических средств. Предыдущие исследования продемонстрировали внутрип?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors acknowledge support from a Translational Breast Cancer Research Grant (14-60-26-BROC to AB) from the Breast Cancer Research Foundation and the American Association for Cancer Research.
Materials
| MicroMarker non-targeted contrast reagent | VisualSonics | VS-11694 | |
| Luer Lock 1mL Syringes | BD | 309628 | |
| Glycopyrrolate 0.2mg/mL | Wedgewood Compounding Pharmacy | GLYCOP-INJ013VC | 6 month shelf life, supply may be limited. |
| Atropine Sulfate 0.5 mg/mL | Animal Health International | 15320764 | If glycopyrrolate is unavailable. Not to be combined with glycopyrrolate. |
| Ketamine HCL 100mg/mL | Animal Health International | 21250699 | http://www.animalhealthinternational.com/ |
| Acepromazine 10mg/mL | Animal Health International | 17640541 | |
| Xylazine 20mg/mL | Animal Health International | 20101547 | |
| Yohimbine 0.2mg/mL | Animal Health International | 14588965 | |
| Hair Removing Cream | Veet | Sensitive skin solution. Available through local retailers. | |
| Blunt tip infusion needles | Sai Infusion Technology | B14-50 | http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles |
| Veterinary Pulse Oximeter | EdanUSA | VE-H100B | http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html |
| Warm Water Pump | Gaymar | TP700 | |
| Warm Water Blanket | Animal Health International | 21232696 | Maxi-Therm Lite Warming Pads |
| Ultrasound system | VisualSonics | Vevo 2100 |
Referências
- Flanagan, M., Love, S., Hwang, E. S. Status of Intraductal Therapy for Ductal Carcinoma in Situ. Curr Breast Cancer Rep. 2 (2), 75-82 (2010).
- Love, S. M., et al. A Feasibility Study of the Intraductal Administration of Chemotherapy. Cancer Prevention Research. 6 (1), 51-58 (2013).
- Stearns, V., et al. Preclinical and Clinical Evaluation of Intraductally Administered Agents in Early Breast Cancer. Sci Transl Med. 3 (106), 106ra108 (2011).
- Zhang, B., et al. The Safety Parameters of the Study on Intraductal Cytotoxic Agent Delivery to the Breast before Mastectomy. Chin J Cancer Res. 26 (5), 579-587 (2014).
- Mahoney, M. E., Gordon, E. J., Rao, J. Y., Jin, Y., Hylton, N., Love, S. M. Intraductal Therapy of Ductal Carcinoma In Situ: a Presurgery Study. Clin Breast Cancer. 13 (4), 280-286 (2013).
- Murata, S., et al. Ductal Access for Prevention and Therapy of Mammary Tumors. Cancer Res. 66 (2), 638-645 (2006).
- Chun, Y. S., et al. Intraductally Administered Pegylated Liposomal Doxorubicin Reduces Mammary Stem Cell Function In the Mammary Gland but in the Long Term, Induces Malignant Tumors. Breast Cancer Res Treat. 135 (1), 201-208 (2012).
- Brock, A., et al. Silencing HoxA1 by Intraductal Injection of siRNA Lipidoid Nanoparticles Prevents Mammary Tumor Progression in Mice. Sci Trans Med. 6 (217), 2172a2 (2014).
- Krause, S., Brock, A., Ingber, D. E. Intraductal Injection For Localized Drug Delivery To The Mouse Mammary Epithelium. J Vis Exp. (80), e50692 (2013).
- Brock, A., Goh, H. T., Yang, B., Yu, L., Li, H., Loh, Y. H. Cellular Reprogramming: A New Technology Frontier In Pharmaceutical Research. Pharm Res. 29 (1), 35-52 (2012).
- Silverstein, M. J., et al. Ductal Carcinoma In Situ of the Breast. Annu. Rev Med. 51, 17-32 (2000).
- Love, S. M., Barsky, S. H. Anatomy of the Nipple And Breast Ducts Revisited. Cancer. 101 (9), 1947-1957 (2004).
- Virnig, B. A., Shamliyan, T., Tuttle, T. M., Kane, R. L., Wilt, W. J. Diagnosis and Management of Ductal Carcinoma In Situ (DCIS). Evidence Report/Technology Assessment. , 185 (2009).
- Mills, D., et al. Examination of Duct Physiology in the Human Mammary Gland. PLoS One. 11 (4), e0150653 (2016).
- King, B. L., Love, S. M. The Intraductal Approach to the Breast: Raison d’Etre. Breast Cancer Res. 8 (2), 206 (2006).
- Bu, W., Xin, L., Toneff, M., Li, L., Li, Y. Lentivirus vectors for stably introducing genes into mammary epithelial cells in vivo . J Mammary Gland Biol Neoplasia. 14, 401-404 (2009).
- Lyons, W. R. The Direct Mammotrophic Action of Lactogenic Hormone. Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 51 (2), 308-311 (1942).
- Fiddler, T. J., Birkinshaw, M., Falconer, I. R. Effects Of Intraductal Prolactin On Some Aspects of the Ultrastructure and Biochemistry of Mammary Tissue in the Pseudopregnant Rabbit. J Endocrinol. 49 (3), 459-469 (1971).
- Falconer, I. R., Fiddler, T. J. Effects of Intraductal Administration Of Prolactin, Actinomycin D and Cycloheximide on Lipoprotein Lipase Activity in the Mammary Glands of Pseudopregnant Rabbits. Biochim Biophys Acta. 218 (3), 508-514 (1970).
- Singh, Y. Influence of Molecular Size on the Retention of Polymeric Nanocarrier Diagnostic Agents in Breast Ducts. Pharm Res. 29 (9), 2377-2388 (2012).
- Jain, R., et al. Atypical Ductal Hyperplasia: Interobserver and Intraobserver Variability. Mod Pathol. 24 (7), 917-923 (2011).
- Betsill, W. L., Rosen, P. P., Lieberman, P. H., Robbins, G. F. Intraductal Carcinoma. Long-term Follow-up After Treatment by Biopsy Alone. JAMA. 239 (18), 1863-1867 (1978).
- Eusebi, V., et al. Long-term Follow-up of In Situ Carcinoma of the Breast. Semin Diagn Pathol. 11 (3), 223-235 (1994).
- Sanders, M., et al. The Natural History Of Low-Grade Ductal Carcinoma In Situ Of The Breast In Women Treated By Biopsy Only Revealed Over 30 Years Of Long-Term Follow-Up. Cancer. 103 (12), 2481-2484 (2005).
- Esserman, L. J., et al. Addressing Overdiagnosis and Overtreatment in Cancer: A Prescription For Change. Lancet Oncol. 15 (6), e234-e242 (2014).
