का विकास<em> मेटारिज़ियम अनिसोप्लीय</em> एक मायकोइंसेक्टिसाइड के रूप में: अलगाव से फ़ील्ड प्रदर्शन तक
Summary
यहाँ, हम अलगाव, पहचान, स्क्रीनिंग, और चयन "सबसे फिट" entomopathogenic कवक, Metarhizium anisopliae के सहित एक प्रभावी mycoinsecticide की ज्ञान आधारित विकास में शामिल विभिन्न चरणों, रिपोर्ट, कृषि के क्षेत्र में कीटों के नियंत्रण के लिए ।
Abstract
जब वाणिज्यिक म्यूकोइंटेक्टिसाइड विकसित होते हैं, तो एक प्रमुख चिंता है कि रासायनिक कीटनाशकों की तुलना में मार गति है। इसलिए, फास्ट-अभिनय, अत्यधिक घातक एंटोमोथाइडोजेनिक कवक के चयन के लिए अलगाव और स्क्रीनिंग महत्वपूर्ण कदम हैं। इस तरह के Metarhizium, Beauveria, और Nomurea रूप Entomopathogenic कवक, है, जो संपर्क में आने से काम करते हैं, बेहतर बेसिलस thuringiensis या nucleopolyhedrosis वायरस (NPV) है, जो कीट कीट द्वारा किया जाता किया जाना चाहिए की तुलना में अनुकूल हैं। वर्तमान कार्य में, हमने 68 मिट्टीहिज़ियम उपभेदों को संक्रमित कीड़ों से मिट्टी के कमजोर पड़ने और चारा विधि का उपयोग करके अलग किया। आईओएस 1-5.8 एस-आईटीएस 2 और 26 एस आरडीएनए क्षेत्र की प्रवर्धन और अनुक्रमण द्वारा पृथक की पहचान की गई। मेटारिज़ियम अनिसोप्लीय के सबसे जहरीले तनाव का चयन मध्यकालीन घातक एकाग्रता (एलसी 50 ) और समय (एलटी 50 ) के आधार पर कीट बायोसास में प्राप्त किया गया था, जो कि हेलिकेवारापा आर्गेरा के तृतीय-इन्स्टार लार्वा के खिलाफ था ।चयनित तनाव द्वारा बीजाणुओं का बड़े पैमाने पर उत्पादन 14 दिनों के लिए सब्सट्रेट के रूप में चावल का उपयोग करके ठोस-राज्य किण्वन (एसएसएफ) के साथ किया गया था। स्पोर्टेड बायोमास से 0.1% टिन -80 का उपयोग करके बीजाणु निकाले गए, और बीजाणुओं के विभिन्न फार्मूले तैयार किए गए। डिब्बाबंद मटर में एक एच। बार्गेरा infestation के नियंत्रण के लिए फार्मूले के फील्ड परीक्षण यादृच्छिक ब्लॉक डिजाइन द्वारा किया गया। तेल और जलीय योगों (क्रमशः 78.0% और 70.9%) के साथ प्राप्त अवरोध नियंत्रण स्तर रासायनिक कीटनाशक से प्राप्त 63.4% से बेहतर थे।
Introduction
भारत में 1940 के दशक में organochlorine कीटनाशकों की शुरूआत से, कीटनाशकों के प्रयोग फसल कीट अभी भी कृषि उत्पादन में उपज हानि के मामले में रुपए 2 सालाना अरबों की लागत से कई गुना बढ़ गया है 1,। सिंथेटिक कीटनाशकों के व्यापक और गैर-न्यायिक उपयोग पर्यावरण और मानव स्वास्थ्य के लिए एक निरंतर खतरा है 1 । कीटनाशकों का अंधाधुंध उपयोग मिट्टी में अवशेषों की ओर जाता है और प्राकृतिक कीट शिकारियों की कमी है। यह कीट आबादी के आनुवंशिक मेकअप को बदलने के लिए एक शक्तिशाली चयन दबाव के रूप में भी कार्य करता है, जिससे प्रतिरोध 1 के विकास में वृद्धि हो सकती है। हरित क्रांति के भारी लाभ के बावजूद, जो उर्वरक और कीटनाशकों जैसे उच्च निविष्टियों की आवश्यकता होती है, कीटनाशक एक प्रमुख जैविक बाधा बने रहती हैं। भारत और दुनिया भर में रिकॉर्ड वार्षिक फसल हानियों का सामान्य अनुमान 12 अरब अमेरिकी डॉलर हैईएफई "> 2 और यूएसडी 2,000 बिलियन 3 , क्रमशः।
कीट कीटनाशकों को नियंत्रित करने के लिए जब रासायनिक कीटनाशकों के हानिकारक प्रभाव पड़ते हैं, तो वैकल्पिक तरीकों की खोज करना जरूरी हो जाता है जो पारिस्थितिक रूप से ध्वनि, विश्वसनीय, आर्थिक और टिकाऊ होते हैं। जैविक नियंत्रण एक उपयुक्त विकल्प प्रदान करता है और इसमें परजीवी, शिकारी, और माइक्रोबियल रोगजनक 4 का उपयोग शामिल है। मिसाल के तौर पर फंगी, किट कीटों की एक विस्तृत श्रृंखला को संक्रमित करने के लिए जाने जाते हैं, जिसमें लेपिडोप्टेरन्स, हाइमनोप्टेरैन्स, कोलेप्टेरैन्स और डिप्टेरेंस शामिल होते हैं, जो अक्सर प्राकृतिक एपिटॉयटिक्स होते हैं। इसके अलावा, अन्य बैक्टीरिया और वायरल कीट नियंत्रण एजेंटों के विपरीत, कीट रोगजनक कवक की कार्रवाई का तरीका संपर्क 5 से है । ये कवक 100 से अधिक प्रजातियों के एक हेल्टेरोजेनस ग्रुप में शामिल हैं, लगभग 750 प्रजातियां अलग-अलग कीड़ों में दर्ज हैं। महत्वपूर्ण फंगल रोगजनकों हैं: मेटारिज़ियम एसपी, बीवेरिया एसपी।, नोमुरेइया रिलेई , लेकिनिसिलियम लेकानी , और हिरसटेलला स्पॉ ।, कुछ नाम करने के लिए 6 एम। अनिसोप्लिआई (मेट्चनिकॉफ़) सोरोकिन, बायोकैंट्रोल में दूसरे सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया एंटोमोथाइडोजेनिक कवक है। यह कीड़ों की 200 प्रजातियों पर हमला करने के लिए जाना जाता है 7
इस अध्ययन में, एम। अनिसोप्लीय का उपयोग करते हुए मायकोपेस्टेसाइड के ज्ञान-आधारित विकास में शामिल विभिन्न चरणों को प्रस्तुत किया गया है। इसमें शामिल हैं: 1) सूक्ष्म एंटोमोथायोजेन्स के लिए एक स्रोत की पहचान ( यानी, मिट्टी या mycosed कीड़े), 2) एंतोपोथाजन पहचान और चयन, 3) प्रयोगशाला जैवसै और क्षेत्र में उनके जहरीली प्रकृति और प्रभावशीलता को बनाए रखने के लिए रणनीतियों ) संक्रामक प्रचारकों के लागत प्रभावी तैयार करने, 5) जहरीले तैयारी के लिए अद्वितीय गुणवत्ता नियंत्रण मानकों का विकास, और 6) बायोप्रोस्पेक्टिंग और मूल्य अतिरिक्त।
Protocol
Representative Results
Discussion
1880 के दशक के दौरान, पहला प्रयास scarab बीटल, Anisoplia austriaca, और चुकंदर curculio नियंत्रित करने के लिए Metarhizium उपयोग करने के लिए बनाया गया था, Cleonis 21 punctiventris। इस प्रोटोकॉल में, किसी एक चीज में से एक को जहरीले …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक बायोटेक्नोलॉजी, नई दिल्ली के डिपार्टमेंट एंड कोऑपरेशन, बर्न, स्विटजरलैंड के बायोटेक्नोलॉजी (आईएससीबी) प्रोग्राम के इंडो-स्विस सहयोग से सहयोगियों के योगदान को स्वीकार करते हैं। मृदुसंस्कृति के विकास में शामिल परियोजना छात्रों और कर्मचारियों के योगदान, वंदना घोरमेड, पल्लवी नहर, प्रिया यादव, शुक्लंगी कुलकर्णी, मनीषा कपूर, संतोष चव्हाण, रवींद्र विधाता, शामला माने और अभिजीत लांडे सहित, को स्वीकार किया जाता है। ईकेपी और एसजीटी रिसर्च फेलोशिप के लिए, क्रमशः, विश्वविद्यालय अनुदान आयोग, भारत और भारतीय वैज्ञानिक और औद्योगिक अनुसंधान परिषद (सीएसआईआर) का धन्यवाद करते हैं। एमवीडी एमेरिटस साइंटिस्ट स्कीम के लिए औद्योगिक और वैज्ञानिक अनुसंधान परिषद, नई दिल्ली का समर्थन स्वीकार करता है। आईएससीबी और एसबीआईआई कार्यक्रमों के तहत वित्तीय सहायता के लिए लेखक बायोटेक्नोलॉजी, नई दिल्ली, भारत के लिए आभारी हैं। हम के लिए आभारी हैंउनके इनपुट के लिए समीक्षक
Materials
| Agar | Hi-Media | RM666 | Reagent |
| Ammonium sulphate | Thomas Baker | 11645 | Reagent |
| DNA analyzer | Applied biosystem | ABI prism 3730 | Instrument |
| DNA islation kit | Qiagen | 69104 | Reagent |
| Dodine | Sigma | 45466 | Reagent |
| Gel extraction kit | Qiagen | 28604 | Reagent |
| Glucose | Hi-Media | GRM077 | Reagent |
| Knapsac sparyer | Kaypee | HY-16L (1004) | Instrument |
| Peptone | Hi-Media | RM006-500G | Reagent |
| Polypropylene vials | Laxbro | SV-50 | Plasticware |
| Potato dextrose agar (PDA) | Hi-Media | M096-500G | Reagent |
| Tween-80 | SRL | 28940 | Reagent |
| Ultra low volume sparyer | Matabi | INSECDISK | Instrument |
| Unicorn-bags | Unicorn | UP-140024-SMB | Autoclavalbe bag for SSF |
| Yeast extract | Hi-Media | RM027-500G | Reagent |
| Chromas 2.1 | software |
References
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