Summary

사육<em> Ixodes의 scapularis,</em> 블랙 다리 틱 : 마우스에 미성숙 단계를 먹이

Published: May 08, 2017
doi:

Summary

건강한 실험실에서 재배 한 진드기의 생산은 진드기 생물학 및 진드기 – 병원체 상호 작용에 대한 연구에 필수적입니다. 여기서 우리는 마우스에 비용 효과적이고 스트레스가 적은 미성숙 진드기 먹이를위한 간단한 프로토콜을 시연합니다.

Abstract

Ixodes의 scapularis, 라임 병의 벡터, 동부와 중서부 미국에서 가장 중요한 질병 벡터 중 하나입니다. 이 종은 각 개발 단계의 척추 호스트에서 혈액 식사를 필요로하는 세 개의 호스트 틱, 그리고 성인 여성은 재생을위한 혈액 식사를 필요로한다. 수유 5 일 완전히 부풀어 오른 경우 호스트를 내려 – 애벌레는 3 자신의 호스트에 연결 틱. 여러 호스트에이 종속성과 울혈의 긴 부착 시간은 실험실 환경에서 틱 양육을 복잡하게한다. 그러나 상호 작용 틱 생물학을 이해하고 병원체를 체크하기 위해, 건강, 실험실 사육 틱의 생산이 필수적이다. 여기, 우리가 쥐에 먹이 미성숙 한 진드기에 대한 간단하고 비용 효율적인 프로토콜을 보여줍니다. 우리는 생쥐에서 감소 스트레스에 대한 기존의 프로토콜을 수정 틱 위스콘신의 접촉을 피하기 위해 메쉬 바닥없이 일회용 케이지를 사용하여 성공과 생존을 공급 틱 증가생쥐 소변과 대변으로 오염 된 물.

Introduction

진드기는 척추 동물의 가지 의무적 hematophagous 체외 기생충이며, 전 세계적으로 배포됩니다. 미국의 경우, 틱의 적어도 11 종은 공중 보건의 중요성 (1)의 병원균의 벡터이다. Ixodes의 scapularis는 라임 병 (보렐리 burgdorferi에)(B.의 miyamotoi를) 재발, 인간 과립구 anaplasmosis (아나 플라스마의 phagocytophilum), 및 babesiosis의 원인이되는 에이전트로 여러 병원체의 전송에 대한 책임 (Babesia 종.). 실험실에서 연구 야생에서 풍부한에서이 거미를 수집 질병 벡터 등의 I.의 scapularis의 중요성에도 불구하고 항상 가능하지 않습니다. 따라서, 건강한 실험실 사육 틱의 생산 틱 생물학에 대한 연구에 필수적이며, 상호 작용 병원체을 선택합니다.

I.의 scapularis을 포함한 모든 하드 진드기 (가족 Ixodidae)의 라이프 사이클은, 계란 세 액티브 구성e 단계 : 유충, 요정, 및 성인. 각 활성 단계는 척추 동물 숙주에게 먹이를줍니다. 첨부와 수유 며칠 동안 진드기와 숙주 사이에서 발생하는 복잡한 상호 작용은 인공 지류를 사용하여 거의 복제 할 수 없으며 대규모 양육 2 , 3 , 4 에 충분한 수의 진드기를 제공하지는 않습니다. 따라서 생쥐와 토끼는 미성숙 (애벌레와 애벌레) 및 진드기의 성숙 단계 (어른)를 키우는 주인으로 가장 많이 사용됩니다. 각 발달 단계에서 혈액 공급을위한 다중 숙주의 요구는 진드기 양육을 복잡하게하고, 시간과 비용을 많이 소비한다 5 , 6 , 7 . 대부분의 진드기 양육 프로토콜은 매달린 와이어 그리드 플로어 케이지 7 , 8 또는 원통형 ca동물이 자유롭게 이동 자체 6, 9, 10을 손질 할 수없는 등의 치수 GE.

이 원통 케이지 후에 와이어 그리드와 콘서트홀 케이지에 전송된다. 충혈, 분리 틱이어서 아래 물로부터 수집된다. 그러나 공급 노출이 Methods는 소변과 곰팡이의 성장을 증가시키고 사망률 (9)을 체크 할 수 배설물로 오염 된 물에 틱. 또한, 눈금 물 통 탈출뿐만 아니라 마우스에 스트레스를 야기 할 가능성을 증가시킨다. 이러한 문제를 회피하기 위해, 우리는 여기에 플라스틱 신발 상자 형 일회용 케이지 내에서 마우스에 애벌레 진드기 먹이를 보여줍니다. 이 방법은 틱 복구 충혈 마우스 증가의 정상적인 동작을 허용하고, 오염물에 의한 진드기 사망률을 감소시킨다.

Protocol

아래에 설명 된 프로토콜 (수-00682)는 네바다 리노의 대학에서 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인 네바다, 리노의 동물 연구 윤리위원회의 대학의 지침을 다음입니다. 요약하면, 마우스를 이소 플루 란으로 마취시키고, 노즈콘을 20 ​​분 동안 연속 이소 플루 수준을 유지하기 위해 사용되었다. 수의사의 연고 마취 눈의 건조를 방지하기 위해 사용되었다. 발가락 핀치는 마취 수준을 확인…

Representative Results

마우스 숙주의 먹이 효율을 높이고 스트레스를 줄이기 위해 기존의 진드기 양육 프로토콜 6 , 10 을 수정했습니다. 결과는 표준 슈 박스 스타일 마우스 케이지가 진드기 양육에 적합 함을 보여줍니다. 화이트 침구는 깍지 줍기를 쉽게 수집 할 수 있도록 좋은 대비를 제공했습니다. 대부분의 진드기는 수유 후 용기의 벽을 올라가?…

Discussion

프로토콜 내에서 중요한 단계

진드기를 양육하는 것은 우발적 인 탈출을 방지하기 위해 때 안전 조치의 여러 단계를하는 것이 중요합니다. 접착 테이프와 물 해자의 사용은 안전을 보장하는 것이 중요하다. 몸의 온도를 일정하게 유지하기 위해 가열 패드에 마취 된 마우스를 유지하는 것이 중요합니다. 우리는 또한 마우스를 면도하는 진드기 첨부 파일에 대한 추가 혜택을 제?…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The authors acknowledge the help from the staff of Laboratory Animal Medicine, University of Nevada, Reno. MM received funding from Nevada INBRE.

Materials

Puralube vet ointment Amazon Available from any Pet store or online store
Disposable mouse cage  Innovive, San Diego, CA  MV 2 Set of bottom and lid
White Alpha dri bedding  Lab Supply, Fort Worth, TX  ALPHA-Dri™

Referências

  1. Gleim, E. R., et al. Factors associated with tick bites and pathogen prevalence in ticks parasitizing humans in Georgia, USA. Parasites &amp; Vectors. 9 (125), 1-13 (2016).
  2. Krober, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends Parasitol. 23 (9), 445-449 (2007).
  3. Kuhnert, F. Feeding of Hard Ticks In Vitro: New Perspectives for Rearing and for the Identification of Systemic Acaricides. ALTEX. 13 (2), 76-87 (1996).
  4. Voigt, W. P., et al. In vitro feeding of instars of the ixodid tick Amblyomma variegaturn on skin membranes and its application to the transmission of Theileria mutans and Cowdria ruminantium. Parasitol. 107, 257-263 (1993).
  5. Gregson, J. D., Smith, C. N. Ticks. Insect Colonization and Mass Production. , 49-72 (1966).
  6. Sonenshine, D. E. . Biology of Ticks. 2, (1993).
  7. Bouchard, K. R., Wikel, S. K., Marquaedt, W. C. Care, maintenance, and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , 705-711 (2005).
  8. Schumaker, T. S., Barros, D. M. Life cycle of Ornithodoros (Alectorobius) talaje. (Acari:Argasidae) in laboratory. J Med Entomol. 32, 249-254 (1995).
  9. Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. Laboratory life cycle of Ixodes woodi (Acari:Ixodidae). J. Med. Entomol. 35, 177-179 (1998).
  10. James, A. M., Oliver, J. H. Feeding and host preference of immature Ixodes dammini,I.scapularis,and I.pacificus.(Acari:Ixodidae). J. Med. Entomol. 27, 324-330 (1990).

Play Video

Citar este artigo
Nuss, A. B., Mathew, M. G., Gulia-Nuss, M. Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice. J. Vis. Exp. (123), e55286, doi:10.3791/55286 (2017).

View Video