uppfödning<em> Ixodes scapularis,</em> Black-legged Tick: Feeding omogna stadier på möss
Summary
Produktionen av friska laboratorieuppfödda fästingar är avgörande för studier av fästbiologi och tick-patogen interaktioner. Här visar vi ett enkelt protokoll för omoglad fekmatning som är kostnadseffektiv och mindre stressfull för möss.
Abstract
Ixodes scapularis, vektorn av borrelia är en av de viktigaste vektorerna i östra och Midwestern USA sjukdomar. Arten är en tre värd fästing som kräver en blodmjöl från ett ryggradsdjur värd för varje utvecklingsfas, och vuxna kvinnor kräver en blodmjöl för reproduktion. Larvfästingar fäster sin värd för 3 – 5 dagar för matning och lämning värd när den är helt svullna. Detta beroende på ett flertal olika värdar och den långa fästtiden för mjölkstockning försvårar tick uppfödning i laboratoriemiljö. Men för att förstå tick biologi och fästing patogen interaktioner är avgörande produktionen av friska, laboratorie uppfödda fästingar. Här visar vi en enkel, kostnadseffektiv protokoll för omogen tick livnär sig på möss. Vi ändrat de befintliga protokoll för minskad stress på möss och ökad tick mata framgång och överlevnad genom att använda engångs burar utan maskbottnar för att undvika kontakt av fästingar wiDet vatten som är förorenat med urin och avföring från möss.
Introduction
Fästingar är obligatoriska hematofagliga ektoparasiter hos ryggradsdjur och distribueras över hela världen. I Förenta staterna är minst 11 arter av fästingar vektorer av patogener av folkhälsoproblem 1 . Ixodes scapularis är ansvarig för överföringen av flera patogener, såsom orsakssambanden till Lyme- sjukdomen ( Borrelia burgdorferi ) relapsing fever ( B. miyamotoi), human granulocytisk anaplasmos ( Anaplasma phagocytophilum ) och babesiosis (Babesia spp.). Trots vikten av I. scapularis som en sjukdomsvektor är det inte alltid möjligt att samla dessa araknider i överflöd från vilda för studier i laboratoriet. Därför är produktionen av friska laboratorieuppfödda fästingar avgörande för studier av fästbiologi och tick-patogen interaktioner.
Livscykeln för alla hårda fästingar (familjen Ixodidae), inklusive I. scapularis, består av ägget och tre aktivaE-steg: larva, nymf och vuxen. Varje aktivt stadium matar på en vertebrat värd. De komplexa interaktioner som äger rum mellan fästingar och deras värdar under flera dagar av fästning och utfodring är nästan omöjliga att replikera med hjälp av artificiella matare, och det är osannolikt att de ger tillräckligt med fodrade fästingar för massuppfödning 2 , 3 , 4 . Därför används levande möss och kaniner oftast som värdar för odling av omogna (larver och nymfer), och mogna steg (vuxna) av fästingar. Kravet på flera värdar för blodfodring under varje utvecklingsstadium komplicerar fältuppfödning och är tid och kostnadskrävande 5 , 6 , 7 . De flesta fästuppfödningsprotokoll kräver att musen hålls i ett golvburen 7 , 8 eller i ett cylindriskt caGe av sådana dimensioner att djuret inte kan röra sig fritt och bruka sig själv 6 , 9 , 10 .
Dessa cylindriska burar överförs senare till en skobox med ett trådnät. Engorged, fristående ticks uppsamlas sedan från vattnet under. Emellertid resulterar denna metod i att exponera matade fästingar till vatten förorenat med urin och avföring som kan öka svamptillväxt och fäst mortalitet 9 . Dessutom ökar det möjligheten att tippa fly från vattentraget, samt orsaka spänning på möss. För att kringgå dessa problem demonstrerar vi här larvalkfodring på möss i engångsburar av plast-shoebox-typ. Denna metod möjliggör det normala beteendet hos möss, ökar engorged tick recovery och minskar fäst mortalitet på grund av kontaminering.
Protocol
Representative Results
Discussion
Kritiska steg i protokollet
Det är viktigt att ha flera nivåer av säkerhetsåtgärder när uppfödning fästingar för att undvika oavsiktlig fly. Användning av tejp och en vatten vallgrav är avgörande för att garantera säkerheten. Det är viktigt att hålla den sövda musen på en värmedyna för att hålla kroppstemperaturen konstant. Vi fann också att raka musen inte ger någon extra fördel för fästingvidhäftning. En enskild mus kan hållas i samma bur under en vecka i en utsedd…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors acknowledge the help from the staff of Laboratory Animal Medicine, University of Nevada, Reno. MM received funding from Nevada INBRE.
Materials
| Puralube vet ointment | Amazon | Available from any Pet store or online store | |
| Disposable mouse cage | Innovive, San Diego, CA | MV 2 | Set of bottom and lid |
| White Alpha dri bedding | Lab Supply, Fort Worth, TX | ALPHA-Dri™ |
Referências
- Gleim, E. R., et al. Factors associated with tick bites and pathogen prevalence in ticks parasitizing humans in Georgia, USA. Parasites & Vectors. 9 (125), 1-13 (2016).
- Krober, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends Parasitol. 23 (9), 445-449 (2007).
- Kuhnert, F. Feeding of Hard Ticks In Vitro: New Perspectives for Rearing and for the Identification of Systemic Acaricides. ALTEX. 13 (2), 76-87 (1996).
- Voigt, W. P., et al. In vitro feeding of instars of the ixodid tick Amblyomma variegaturn on skin membranes and its application to the transmission of Theileria mutans and Cowdria ruminantium. Parasitol. 107, 257-263 (1993).
- Gregson, J. D., Smith, C. N. Ticks. Insect Colonization and Mass Production. , 49-72 (1966).
- Sonenshine, D. E. . Biology of Ticks. 2, (1993).
- Bouchard, K. R., Wikel, S. K., Marquaedt, W. C. Care, maintenance, and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , 705-711 (2005).
- Schumaker, T. S., Barros, D. M. Life cycle of Ornithodoros (Alectorobius) talaje. (Acari:Argasidae) in laboratory. J Med Entomol. 32, 249-254 (1995).
- Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. Laboratory life cycle of Ixodes woodi (Acari:Ixodidae). J. Med. Entomol. 35, 177-179 (1998).
- James, A. M., Oliver, J. H. Feeding and host preference of immature Ixodes dammini,I.scapularis,and I.pacificus.(Acari:Ixodidae). J. Med. Entomol. 27, 324-330 (1990).
