त्वरित Atherosclerosis के खरगोश मॉडल: श्रोणि धमनी गुब्बारा चोट के एक Methodological परिप्रेक्ष्य
Summary
atherosclerosis के पशु मॉडल तंत्र को समझने के लिए और पट्टिका विकास या टूटना, औद्योगिक दुनिया में मौत का एक प्रमुख कारण को रोकने के लिए नए दृष्टिकोण की जांच करने के लिए आवश्यक हैं । इस प्रोटोकॉल गुब्बारा चोट और कोलेस्ट्रॉल अमीर आहार का एक संयोजन का उपयोग करता है खरगोश श्रोणि धमनी में atherosclerotic सजीले टुकड़े प्रेरित ।
Abstract
एक्यूट कोरोनरी सिंड्रोम कोरोनरी रोड़ा निम्नलिखित atherosclerotic पट्टिका विकास और टूटना के परिणामस्वरूप औद्योगिक दुनिया में मौत का प्रमुख कारण है । न्यूजीलैंड सफेद (NZW) खरगोश व्यापक रूप से atherosclerosis के अध्ययन के लिए एक पशु मॉडल के रूप में इस्तेमाल कर रहे हैं । atherogenic आहार से तंग आने पर वे सहज घावों का विकास करते हैं; हालांकि, यह 4-8 महीने के लंबे समय की आवश्यकता है । आगे बढ़ाने और atherogenesis में तेजी लाने के लिए, atherogenic आहार और यांत्रिक endothelial चोट का एक संयोजन अक्सर कार्यरत है । खरगोशों में atherosclerotic सजीले टुकड़े के लिए प्रस्तुत प्रक्रिया एक गुब्बारा कैथेटर का उपयोग करता है NZW atherogenic आहार के साथ खिलाया खरगोशों की बाईं श्रोणि धमनी में endothelium को बाधित । इस तरह के यांत्रिक क्षति गुब्बारा कैथेटर की वजह से एक समय निर्भर फैशन में neointimal लिपिड संचय की शुरुआत भड़काऊ प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला लाती है । Atherosclerotic पट्टिका निंनलिखित गुब्बारा चोट दिखाने के neointimal व्यापक लिपिड घुसपैठ, उच्च चिकनी मांसपेशी सेल सामग्री और macrophage व्युत्पन्न फोम कोशिकाओं की उपस्थिति के साथ और अधिक मोटा होना । इस तकनीक को सरल, प्रतिलिपि है और श्रोणि धमनी के भीतर नियंत्रित लंबाई की पट्टिका का उत्पादन । पूरी प्रक्रिया 20-30 मिनट के भीतर पूरा हो गया है । प्रक्रिया कम मृत्यु दर के साथ सुरक्षित है और भी पर्याप्त intimal घावों को प्राप्त करने में उच्च सफलता प्रदान करता है । गुब्बारा कैथेटर की प्रक्रिया दो सप्ताह के भीतर atherosclerosis में धमनी की चोट के परिणाम प्रेरित । इस मॉडल रोग विकृति, नैदानिक इमेजिंग की जांच करने के लिए और नई चिकित्सीय रणनीतियों का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
Introduction
कमजोर atherosclerotic सजीले टुकड़े का टूटना एक औद्योगिक देशों में मौत के प्रमुख कारणों में से एक है1। हालांकि पिछले दशकों में अनुसंधान कई आणविक और सेलुलर पट्टिका प्रगति में शामिल तंत्र सामने आया है, निरंतर प्रयास अभी भी न केवल रोग प्रगति के जटिल तंत्र को जानने की जरूरत है, लेकिन यह भी नए चिकित्सीय परीक्षण के लिए दृष्टिकोण. कई पशु मॉडल atherosclerosis का अध्ययन करने का प्रस्ताव किया गया है । आनुवंशिक हेरफेर, कोलेस्ट्रॉल खिलाने या यांत्रिक endothelium चोट मानक रणनीतियों चूहों, खरगोश या minipigs सहित atherosclerosis के अधिकांश पशु मॉडल द्वारा साझा कर रहे हैं । इन के अलावा, NZW खरगोश कोलेस्ट्रॉल आहार के प्रति संवेदनशील होते हैं, जबकि सामान्य चूहों और चूहों आहार कोलेस्ट्रॉल2,3,4को अवशोषित नहीं करते । खरगोशों अनायास कोलेस्ट्रॉल रिच आहार5,6के साथ खिलाया जब कुछ रेशेदार घटक के साथ मैक्रोफेज में अमीर महाधमनी घावों का विकास । हालांकि, 4-8 महीने की लंबी तैयारी समय atherosclerotic plaquesby अकेले कोलेस्ट्रॉल आहार6खिलाने के लिए प्रेरित करने के लिए,7 प्रयोगात्मक सेटिंग्स के अधिकांश के लिए एक बड़ी खामी है । अपेक्षाकृत कम समय में घावों उत्प्रेरण के लिए खोज में, उच्च कोलेस्ट्रॉल आहार और गुब्बारा चोट का एक संयोजन Baumgarter और घुड़साल8द्वारा विकसित किया गया है । इस तकनीक का समग्र लक्ष्य atherosclerotic फोम कोशिकाओं (मनुष्यों में वसायुक्त लकीर के समान) hypercholesterolemic खरगोशों में 2 सप्ताह के भीतर से बना सजीले टुकड़े को प्रेरित करने के लिए है । वर्तमान तकनीक एक गुब्बारा कैथेटर NZW hypercholesterolemic खरगोश की श्रोणि धमनी में उन्नत का उपयोग कर Baumgarter की विधि के आधार पर धमनी की दीवार की चोट की प्रक्रिया का वर्णन करता है ।
एक साथ एक कोलेस्ट्रॉल अमीर आहार के साथ, चोट प्रेरित de-endothelialization गुब्बारा के परिणामस्वरूप atherosclerosis को बढ़ावा मिलेगा । गुब्बारा चोट atherosclerotic घावों के गठन में तेजी लाता है, और वर्दी आकार और वितरण की पट्टिका का उत्पादन । Intimal अधिक मोटा होना समय की अवधि के दौरान बढ़ता है और Intimal सेल घुसपैठ चोट के बाद कुछ दिनों के भीतर शुरू होता है । पर्याप्त मैक्रोफेज के साथ फैटी धारियां गुब्बारा चोट के 7-10 दिनों के बाद प्रदर्शित करने के लिए शुरू और प्रकार के रूप में द्वितीय घाव अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन द्वारा वर्गीकरण के अनुसार प्रतिनिधित्व कर रहे हैं । खरगोश में गुब्बारा चोट अक्सर महाधमनी में पट्टिका संरचना का अध्ययन करने के लिए किया जाता है । neointimal endothelium सेलुलर आसंजन अणु के उच्च स्तर को व्यक्त करता है । सजीले टुकड़े औसत दर्जे का विच्छेदन और adventitial परिवर्तन के साथ जुड़े रहे हैं । Atherosclerotic घावों लिपिड से बना रहे हैं, proliferating चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं (SMCs), कोलेजन फाइबर और भड़काऊ कोशिकाओं है कि पुनर्जीवित endothelium के तहत जमा और प्रकृति में ज्यादातर प्रकार द्वितीय रहे हैं । खरगोश सजीले टुकड़े के टोपोलॉजिकल वितरण मानव aortas 9में रिपोर्ट के समान था,सिद्धांत रूप में10 , महाधमनी श्रोणि धमनियों की तुलना में आकार में बड़ा है और बड़ी लंबाई में पट्टिका का उत्पादन होगा । हालांकि, खरगोशों में atherosclerosis की साइट के रूप में श्रोणि धमनी का उपयोग करने का प्रमुख लाभ अपनी पहुंच है, मांसपेशियों की सामग्री में अपनी समानता मानव कोरोनरी धमनी के लिए11, वर्दी घाव विकास12, उच्च ऊतक कारक गतिविधि13 और लगातार पोत आयाम मानव कोरोनरी धमनी morphometric और angiographic अंतिमबिंदु के लिए व्यावसायिक रूप से निर्मित उपकरणों के मूल्यांकन की अनुमति के तुलनीय । आक्रामक और गैर इनवेसिव तरीके रहते जानवर में खरगोश श्रोणि धमनियों में पट्टिकाओं का विश्लेषण करने के लिए जांच की गई है । पिछले रिपोर्टों एक २.३५-tesla श्री प्रणाली के 14 की मदद से चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) के उपयोग का वर्णन इसके अतिरिक्त, intravascular अल्ट्रासाउंड (IVUS) या ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (अक्टूबर) कैथेटर उपयुक्त छवि के लिए लागू किया जा सकता खरगोश श्रोणि धमनियों में atherosclerotic पट्टिकाएं । श्रोणि धमनी अल्ट्रासाउंड इमेजिंग के लिए सुलभ है जब एक उच्च संकल्प echography का उपयोग कर और महाधमनी भी इस तकनीक के साथ पता लगाया जा सकता है ।
पिछले एक दशक में, गुब्बारा चोट के इस खरगोश मॉडल को आगे पट्टिका प्रगति15और पट्टिका16प्रतिगमन के तंत्र को समझने में मदद मिली है । इसके अलावा, मॉडल जैसे statins, मानक antiplatelet एजेंटों, एंटीऑक्सीडेंट एजेंटों17,18 और दवा-eluting stents जैसे everolimus या के रूप में उपंयास चिकित्सीय एजेंटों के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है zotarolimus-eluting स्टेंट19,20 पर neointimal रोगन । इस मॉडल के पास अवरक्त प्रतिदीप्ति इमेजिंग कैथेटर21के intravascular इमेजिंग की जांच करने के लिए भी इस्तेमाल किया गया है ।
Protocol
इस प्रायोगिक प्रोटोकॉल को गुआंगज़ौ पशु चिकित्सा कार्यालय, Fribourg और स्विस संघीय पशु चिकित्सा कार्यालय, स्विट्जरलैंड (FR 2015/58) द्वारा अनुमोदित किया गया है ।
नोट: नर NZW खरगोशों के बीच वजनी २.८ से ३.?…
Representative Results
Discussion
खरगोश श्रोणि धमनी atherosclerosis मॉडल व्यापक रूप से atherosclerosis अनुसंधान में प्रयोग किया जाता है । इस प्रोटोकॉल के साथ खरगोश तेजी से ही कोलेस्ट्रॉल आहार के साथ विकसित सहज घावों की तुलना में अधिक गंभीर और उन्नत सजीले ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को स्विस नेशनल साइंस फाउंडेशन ग्रांट १५०२७१ ने सपोर्ट किया था ।
Materials
| New Zealand White rabbits | Charles River laboratories,France | Cre:KBL(NZW) | |
| Cholesterol rich diet | Ssniff spezialdiäten | Ssniff EF K High Fat and Cholesterol | |
| Glass bead sterilizer-Germinator 500 | VWR, Leicestershire, UK | 101326-488 | |
| Fogarty balloon embolectomy catheters, 2 French | Edwards Lifesciences, Switzerland | 120602F | For single use only |
| Luer Lock Syringe | Becton, Dickinson and Company, USA | 309628 | |
| Thermopad Type 226 | Solis, Switzerland AG | 397387 | |
| Buprenorphine- Temgesic | Reckitt Benckiser AG, Switzerland | 7.68042E+12 | |
| Isoflurane | Piramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 18017 | 2667-46-7 | |
| Anaesthesia machine-combi-vet Base Anesthesia System | Rothacher Medical GmbH, Switzerland | CV 30-301-A | |
| Cardell touch veterinary vital signs monitor | Midmark, Ohio, USA | 8013-001 | |
| Ophthalmic ointment-Humigel | Virbac, France | ||
| Animal hair clippers | Aesculap AG, Germany | GT420 | |
| Disinfectant-Betadine solution | MundipharmaMedicalCompany, Switzerland | 14671-1203 | |
| Dumont #7 Forceps | FST Germany | 11274-20 | |
| Medium and small microscissors | Medline International Switzerland Sàrl | UC4337 | |
| Microvascular clamps | FST, Germany | 18051-28 | |
| Papaverine | ESCA chemicals, Switzerland | RE 356 803 | |
| Vein Pick | Harvard Apparatus, Cambridge, UK | 72-4169 | For single use only |
| Saline | Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, , Switzerland | 1330055 | |
| Polysorb 5-0 suture | Covidien AG, Switzerland | UL 202 | Monofilament |
| Sulfadoxine and Trimethoprim-Trimethazol | Werner Stricker AG, Switzerland | Swissmedic Nr. 50'361 | |
| Antiseptic- Octenisept | Schülke & Mayr AG, Switzerland | GTIN: 4032651214068 | |
| Phosphate Buffered Saline | Roth | 1058.1 | |
| Isobutanol-2-Methylbutane | Sigma-Aldrich, Switzerland | M32631-1L | |
| Optimum Cutting Temperature compound-Tissue-Tek | VWR Chemicals, Belgium | 25608-930 | |
| Cryostat | Leica, Glattbrugg, Switzerland | Leica CM1860 UV | |
| Glass slide- Superfrost Plus | Thermo Scientific | 4951PLUS4 | |
| Mayer's Haematoxylin | Sigma-Aldrich, Switzerland | MHS32-1L | |
| Eosin 0.5% aq. | Sigma-Aldrich, Switzerland | HT110232-1L | |
| Oil Red O | Sigma-Aldrich, Switzerland | O0625-25G | |
| α-smooth muscle actin antibody | Abcam, UK. | ab7817 | |
| Macrophage Clone RAM11 antibody | DAKO, Switzerland | M063301 | |
| Hoechst | Abcam, UK. | ab145596 | |
| Goat polyclonal Secondary Antibody (Chromeo 546) | Abcam, UK. | ab60316 | |
| Alexa Fluor 488/547 | Abcam, UK. | ||
| Glycergel Mounting Medium, Aqueous | DAKO, Switzerland | C056330 | |
| Hematoxylin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | H3136-25G | |
| Ferric chloride for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 157740-100G | |
| Iodine for Movat staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 207772-100G | |
| Potassium iodide for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 60400-100G-F | |
| Alcian blue for Movat staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | A5268-10G | |
| Strong Ammonia for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 320145-500ML | |
| Brilliant crocein MOO for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 210757-50G | |
| Acid Fuchsin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | F8129-50G | |
| Sodium Thiosulfate for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 72049-250G, | |
| Phosphotungstic acid for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 79690-100G | |
| Crocin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 17304-5G | |
| EUKITT for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 03989-100ML |
Referências
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