Cloacal मालिश और शुक्राणु से डीएनए के अलगाव द्वारा एवियन वीर्य संग्रह
Summary
इस प्रोटोकॉल cloacal मालिश, पक्षियों से वीर्य इकट्ठा करने के लिए एक गैर इनवेसिव पुस्तिका तकनीक का वर्णन है, और एवियन शुक्राणु से डीएनए निष्कर्षण संशोधनों के साथ एक वाणिज्यिक निष्कर्षण किट का उपयोग कर ।
Abstract
वीर्य का संग्रह शुक्राणु गुणवत्ता, शुक्राणु telomere गतिशीलता, और epigenetics शामिल अध्ययन सहित आवेदनों की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए उपयोगी हो सकता है । पक्षी व्यापक रूप से जैविक अनुसंधान में विषयों का इस्तेमाल कर रहे है और दोहराया शुक्राणु नमूनों को शामिल अध्ययन के लिए आदर्श होते हैं । हालांकि, कुछ संसाधनों को कैसे इकट्ठा करने और एवियन शुक्राणु से डीएनए निकालने के लिए सीखने के इच्छुक लोगों के लिए वर्तमान में उपलब्ध हैं । यहां हम cloacal मालिश, एक सज्जन, गैर इनवेसिव मैनुअल तकनीक का वर्णन एवियन शुक्राणु इकट्ठा करने के लिए । हालांकि इस तकनीक को साहित्य में स्थापित किया गया है, लेकिन उपलब्ध विवरण से सीखना मुश्किल हो सकता है । हम भी एवियन वीर्य से डीएनए निकालने के लिए संशोधनों के साथ एक वाणिज्यिक निष्कर्षण किट का उपयोग करने के लिए जानकारी प्रदान करते हैं । Cloacal मालिश आसानी से प्रजनन हालत में किसी भी छोटे-से मध्यम आकार के नर पक्षी पर इस्तेमाल किया जा सकता है । संग्रह के बाद, वीर्य गतिशीलता परख के लिए तुरंत इस्तेमाल किया जा सकता है, या डीएनए निष्कर्षण के लिए जमे हुए प्रोटोकॉल निंनलिखित यहां वर्णित है । इस निष्कर्षण प्रोटोकॉल एवियन शुक्राणु के लिए परिष्कृत किया गया था और सफलतापूर्वक कई passerine प्रजातियों से एकत्र नमूनों पर इस्तेमाल किया गया है (राहगीर domesticus, Spizella passerina, Haemorhous mexicanus, और Turdus migratorius ) और एक columbid (Columba livia) ।
Introduction
पक्षियों शुक्राणु गुणवत्ता और प्रतियोगिता1, शुक्राणु telomere गतिशीलता2, epigenetics3, और इसी तरह के विषयों को शामिल अध्ययन के लिए आदर्श विषयों रहे हैं, के रूप में वे व्यापक रूप से जैविक अनुसंधान और शुक्राणु में उपयोग किया जाता है आसानी से cloacal का उपयोग कर सकते है नमूना मालिश. Cloacal मालिश पक्षी4,5,6से वीर्य इकट्ठा करने के लिए एक सौंय, गैर इनवेसिव मैनुअल तकनीक है । दोहराया नमूनों आसानी से प्राप्त किया जा सकता है और कोई विशेष उपकरण की आवश्यकता है, यह सरल करने के लिए क्षेत्र या प्रयोगशाला में प्रदर्शन कर रहे हैं । हालांकि cloacal मालिश दशकों के लिए उपयोग में किया गया है, यह उपलब्ध लिखित विवरण से जानने के लिए मुश्किल है । इस प्रकाशन के लिए समय और cloacal मालिश सीखने में शामिल अनिश्चितता को कम करना है ।
cloacal मालिश का उपयोग कर पक्षियों से एकत्र वीर्य गतिशीलता आकलन4,7 या कृत्रिम गर्भाधान के लिए तुरंत इस्तेमाल किया जा सकता है8, या ऐसे उंनत इमेजिंग और डीएनए निष्कर्षण के रूप में अंय का उपयोग करता है के लिए जमे हुए । passerine पक्षियों से वीर्य के नमूने छोटे होते हैं लेकिन घनी पैक्ड शुक्राणु होते हैं. डीएनए सादगी के लिए एक वाणिज्यिक निष्कर्षण किट का उपयोग कर निकाला जाता है, संशोधनों के साथ शुक्राणु के विशेष सुरक्षात्मक सुविधाओं को दूर करने के लिए9. निष्कर्षण के बाद, शुक्राणु telomeres qPCR10का उपयोग कर मापा जा सकता है ।
Protocol
Representative Results
Discussion
हम छोटे और मध्यम पक्षियों से पुनर्उत्पादकता सक्रिय स्थिति में वीर्य एकत्रित करने के लिए एक सरल और विश्वसनीय विधि का वर्णन करते हैं, और एवियन शुक्राणु से डीएनए निकालने ।
वर्णित वीर्य डीएनए न?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम cloacal मालिश के साथ जल्दी सहायता के लिए जोस Noguera धंयवाद, और Jeffrey Kittilson लैब समर्थन के लिए । इस काम के लिए BJH को एक एनडी EPSCoR FAR0022429 पुरस्कार से समर्थन मिला. प्रकाशन लागत उदारता से जैविक विज्ञान के NDSU विभाग द्वारा समर्थित थे ।
Materials
| Microhematocrit capillary tubes | Fisherbrand | 22-362566 | Any supplier can be used. Smaller tubes may be more effective for collection of small semen samples, such as from very small passerine birds like chipping sparrow. |
| Microcentrifuge tubes | Any | ||
| 1x PBS | Any | Used for storing semen samples prior to DNA extraction. | |
| DL-Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | D0632 | |
| Tris base | Sigma-Aldrich | 10708976001 | Any supplier can be used. |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 1233508 | Any supplier can be used. |
| NaCl | Sigma-Aldrich | 793566 | Any supplier can be used. |
| SDS | Sigma-Aldrich | 1614363 | Any supplier can be used. |
| QIAamp DNA micro kit | Qiagen | 56304 | Qiagen QIAamp DNA micro kit is recommended specifically. This DNA extraction protocol has been attempted with other commercial kits but with little success. The reasons for this are unknown to us. |
Referências
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