Forebygging av human trichinellosis i mange land over hele verden er basert på laboratorieundersøkelse av muskelprøver fra mottakelige dyr ved metoder for spaltning, av hvilke den magnetiske røremetoden er ansett gullstandarden.
Trichinellosis er en ødeleggende sykdom hos mennesker og er forårsaket av inntak av rå eller kokt kjøtt av dyr som er infisert med larver av rundmark av slekten Trichinella. De viktigste kildene til menneske infeksjoner over hele verden er viltkjøtt og svinekjøtt eller svinekjøtt produkter. I mange land, er forhindring av human trichinellosis basert på identifikasjon av infiserte dyr ved hjelp av den kunstige fordøyelsen av muskelprøver fra følsomme dyreskrotter.
Det finnes flere metoder basert på fordøyelsen av kjøtt, men magnetrør metoden regnes som gullstandarden. Denne metoden tillater påvisning av Trichinella larver ved mikroskopi etter enzymatisk spalting av muskelprøver og påfølgende filtrerings- og sedimenteringstrinn. Selv om denne fremgangsmåten ikke krever spesielle og kostbart utstyr, kan interne kontroller ikke brukes. Derfor bør strenge kvalitetsstyring skal innmatesd gjennom hele testen. Målet med dette arbeidet er å gi detaljerte instruksjoner for håndtering og kritiske kontrollpunkter metoden analytikere, basert på erfaringene fra EU referanselaboratorium for parasitter og nasjonalt referanselaboratorium i Tyskland for trikiner.
Nematoder av slekten Trichinella kan påvises i tverrstripet musklene rovdyr og altetende pattedyr, fugler og reptiler over hele verden. Disse zoonotiske nematoder kan nå mennesker når rå eller semi-raw kjøtt og kjøttprodukter avledede produkter fra svin, hest, og spillet dyr er inntatt. Dette zoonose kan være en alvorlig sykdom hos mennesker preget av patognomonisk tegn og symptomer, for eksempel diaré, feber, periorbitalt ødem og myalgi og mulige komplikasjoner som myokarditt, tromboembolisk sykdom og encefalitt en.
Trichinella spiralis er den mest utbredte agens av trikiner infeksjon i vilt og husdyr og forårsaker de fleste av de menneskelige infeksjoner over hele verden. I Europa, Nord- og Vest-Afrika, og Vest-Asia, er trikiner britovi en annen kilde til infeksjoner hos mennesker. I tillegg er ti andre taxa mindre vanlig rapportert som utløsende agenter for sykdom hos mennesker og finnes i ulike regioner av verden, vanligvis i ville dyr 2. I tillegg til ville dyr som villsvin, bjørn, hvalross og grevling, representerer svinekjøtt den viktigste kilden til menneske-smitte over hele verden.
Den beste måten å forhindre trichinellosis er å avstå fra å spise rått kjøtt-produkter og for å koke noen kjøtt, særlig spillet kjøtt for å sikre temperaturer (> 65 ° C i 1 minutt, det vil si å endre kjøttfarge fra rosa til brun i kjernen av kjøttprodukt) 3. Den europeiske union og USDA har spesifisert frysing og steketider og temperaturer for svinekjøtt produkter som kan brukes til å drepe T. spiralis larver i kjøttet 4, 5. Videre ble anbefalinger for inaktivering av trikiner i kjøtt og kjøttprodukter publisert av International Commission on Trichinellosis"xref"> 6. I Europa, i tillegg til innføring av kontrollerte boligforhold i kommersiell svinebesetninger hvor risikoen for infeksjon Trichinella er neglisjerbar, er forhindring av human trichinellosis basert på laboratorieundersøkelse av muskelprøver fra mottakelige dyr 4.
For mattrygghet formål, fordøyelse analyser er de eneste pålitelige prosedyrer for direkte påvisning av trikiner larver i kjøttet 3, 7. Selv om det finnes flere varianter av fordøyelsen analysen, er den magnetiske røremetoden den internasjonalt aksepterte referansemetoden 3, 4, 7. Denne analyse er basert på påvisning av Trichinella larver i tverrstripet muskelvevet. Etter enzymatisk nedbrytning av muskelprøver og påfølgende filtrering og sedimenteringstrinn, Trichinella larver identifiseres ved mikroskopi. Avhengig handel forpliktelser og nasjonal lovgivning, er det et mangfold av små variasjoner i den generelle protokoll av magnetrører metoden. Her er tekniske detaljer basert på EU-krav 4, ISO spesifikasjoner 8, IKT retningslinjer 6, og opplevelsen av EUs referanselaboratorium for parasitter (EURLP) og den tyske referanselaboratorium for trikiner.
Selv om magnetrører metoden kan enkelt utføres, ikke strengt å overholde tekniske detaljene fører til utilstrekkelig følsomhet, og dermed fare for forbrukernes helse. De kritiske kontrollpunkter har blitt fremhevet i teksten ovenfor. I tillegg, er avgjørende for det vellykkede resultat av testen ved bruk av passende utstyr. Alle fartøy bør være laget av glass og pipettespisser belagt med silikon for å redusere klebing av larvene til overflaten.
Følsomheten av fordøyelse metoden avhenger av larvetettheten i musklene og mengden av muskelprøven testet. For en larvetetthet på 3-5 LPG av muskelvev, ble en sensitivitet på 100% rapportert, men under en gassdrevet følsomheten falt til 40% 13. Avhengig av de testede mange dyrearter, kan følsomheten av testen bli forbedret ved å øke mengden av prøve som brukes. det jegnfection byrde i dyrelivet er vanligvis lav, derfor større prøver størrelser brukes 14. Forkjærlighet områder varierer også mellom vertsdyr. Her er den nedre fordøyeligheten av noen muskler så som tungen må tas i betraktning, noe som også kan resultere i større prøvestørrelser 15.
Videre er det viktig å forstå at den magnetiske røremetoden ikke omfatter interne kontroller. Derfor er kvalitetssikring ledelse fra prøvetaking til dokumentasjon viktig å få nøyaktige og presise resultater. Kvaliteten på laboratoriet ytelse for å påvise trikiner larver i muskelprøver bør overvåkes ved regelmessig deltakelse av hver analytiker i ferdighetstester.
Ytterligere begrensninger ved fremgangsmåten er at den endelige identifisering fasen av muskel larver ved mikroskopi er høyst subjektive og heavily avhengig av kjennskap til larve morfologi ved å undersøke analytikeren.
Et interessant alternativ metode for å omgå dette problemet er den magnetiske røremetoden / på filter, etterfulgt av isolering larver deteksjon av en latex agglutinering test. Men i henhold til EUs lovverk denne metoden er bare ansett tilsvarende for testing av kjøtt av innenlandske svin, men ikke for dyr som har høyere risiko for infeksjon som villsvin 4. Identifiseringen av larve antigen med monoklonale antistoffer gjør testen mer objektiv, men avviser laboratoriet muligheten for å fastslå antall larver pr gram kjøtt 16.
Ytterligere variasjoner av magnetrører metoden omfatter mekanisk assistert samleprøve fordøyelse metode / sedimentering teknikk, det mekanisk assistert samleprøve graveestion metode / på filter isolasjon teknikk, og den automatiske fordøyelse fremgangsmåte for samleprøver av opp til 35 g teknikk. Disse teknikkene er alle basert på den kunstige fordøyelsen av kjøtt og visualiseringen og telling av Trichinella larver, men skiller seg i utstyr som benyttes for filtrerings- og sedimenteringstrinn.
Den isolerte larver kan ytterligere identifiseres på artsnivå ved en molekylærtest (f.eks multipleks PCR) 17. Ifølge EUs regelverk, må alle positive prøver sendes til nasjonalt referanselaboratorium eller til EURLP for trikiner arter besluttsomhet.
The authors have nothing to disclose.
Vi ber takker Sabine Reckinger for utmerket teknisk assistanse og støtte.
Knife,Scissors, Tweezers | Cutting samples and removing non-digestible tissue | ||
Blender | With a sharp chopping blade | ||
Magnetic stirrer | With thermostatically controlled heating plate | ||
Stirring Rod | Teflon-coated, approximately 5 cm long | ||
Conical glass separation funnel | Capacity of at least 2 litres, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation | ||
Stands, rings and clamps | |||
Sieve | Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh | ||
Funnel | Internal diameter not less than 12 cm, to support the sieves | ||
Glass beaker | Capacity 3 litres | ||
Glass measuring cylinder | Capacity 50 to 100 ml, or centrifuge tube | ||
Stereo-microscope | With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table | ||
Petri dishes | 9 cm diameter, marked on their undersides into 10 × 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope | ||
Aluminium foil | Alternatively a lid to cover the beakers | ||
25 % hydrochloric acid | |||
Pepsin | Strength: 1:10 000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12 500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/ml | ||
Ethanol | 70-90% ethyl alcohol | ||
Tap water | Heated to 46-48 °C before use | ||
Balance | Accurate to at least 0.1 g | ||
Metal tray | Capacity 10 to 15 litres, to collect the remaining digestive juice | ||
Pipettes and pipette holder | Different sizes (1, 10 and 25 ml) | ||
Thermometer | Accurate to 0.5 °C, temperature range at least from 20 ° C to 70 ° C | ||
Siphon | For tap water |