Un dispositif pour effectuer la migration cellulaire / Wound Healing dans une plaque à 96 puits
Summary
Ici, nous présentons un protocole pour effectuer un test de migration des cellules semi-haut débit sur une plaque de culture cellulaire de 96 puits. Ce protocole est une méthode rapide, simple et économique pour créer des blessures à gratter cohérentes sur une monocouche cellulaire.
Abstract
La migration cellulaire / blessure dosage est une méthode couramment utilisée pour étudier la migration cellulaire et d'autres processus biologiques tels que l'angiogenèse et les métastases tumorales. Dans cet essai, les cellules sont cultivées pour former une monocouche confluente et une blessure mécanique est créée par grattage avec un périphérique. Ensuite, le taux des cellules vers la zone dénudée de migration peut être surveillé par imagerie. Notre wounder mécanique à 8 canaux est conçu pour traiter la plupart des problèmes liés à la détermination de la migration cellulaire. Tout d'abord, notre wounder peut être facilement stérilisé par autoclavage ou avec des désinfectants courants. Deuxièmement, les broches individuels réglables permettent même le contact avec la plaque de culture cellulaire de telle sorte que les plaies vives et reproductibles peuvent être créés. Troisièmement, les barres de guidage des deux côtés de la position de wounder assurent une blessure constante dans chaque puits. L'utilisation de jetables conseils de pipette en plastique pour blesser peut en outre assurer une meilleure gestion de la wounder ainsi que pour minimiser les contre-contamination. En conclusion, notre wounder cellulaire peut fournir aux chercheurs un dispositif convivial et reproductible utilisateur pour effectuer le test de migration des cellules en utilisant la plaque standard de culture de 96 puits.
Introduction
La migration cellulaire joue un rôle important dans les processus cellulaires, tels que l' embryogenèse, la neurogenèse, l' angiogenèse, la cicatrisation, la réparation des muqueuses, épithélio-mésenchymateuse transitions en cours de développement normal et la situation de la maladie 1. Il est un processus complexe qui implique la coordination de nombreux événements internationaux et intra-cellulaires , y compris la signalisation des interactions moléculaires, la polarisation de la cellule, la réorganisation du cytosquelette, remodelage de la matrice, protrusion de la membrane et cellule-cellule dynamique adhérence modulation 2. En étudiant la migration cellulaire, la découverte et la validation des produits chimiques ou des biomolécules conduisant à un mouvement cellulaire et les voies biochimiques apparentées peuvent être déterminées. Ce processus fondamental peut être utilisé avantageusement en tant que proxy pour diverses applications, telles que le traitement de la maladie et le ciblage de médicaments.
L'essai est blessant l' un des essais de migration cellulaire 3. Ici, unéchantillon individuel de cellules sera partiellement éliminé par des moyens mécaniques pour produire une zone dénudée où les cellules migrent pour couvrir la zone. Le pourcentage de récupération à un point de temps particulier sera surveillé. Lors de la manipulation grand nombre d'échantillons, des questions telles que le coût expérimental et la contamination croisée dans les échantillons peuvent être problématiques. Bien que de nombreux outils commerciaux et des essais sont disponibles pour l' étude de la migration des cellules 4, 5, 6, beaucoup d'entre eux nécessaire un équipement coûteux et sophistiqué et des améliorations sont encore nécessaires. Pour ces raisons, un wounder cellulaire mécanique à 8 canaux (figure 1) est développée.
Notre wounder mécanique 8 canaux cellulaire a incorporé plusieurs caractéristiques uniques pour résoudre les problèmes mentionnés ci-dessus. Il offre la possibilité d'effectuer la migration des cellules / blesser les dosages dans le format de plaque de culture à 96 puits. Le réglage gubar design Iding veille à ce que la zone de zéro est dans la position centrale de chaque puits. En outre, la hauteur des barres de guidage peut être ajustée de sorte que la wounder est applicable pour les différentes marques de plaques de culture. Enfin, la conception de la broche de blessure réglable permet un contact même des pointes de pipette à la surface de la plaque de culture pour obtenir une blessure simultanée et reproductible 7, 8.
Protocol
Representative Results
Discussion
Notre wounder cellulaire a plusieurs caractéristiques uniques pour résoudre les problèmes des tests traditionnels de migration cellulaire. La wounder mécanique à 8 canaux cellule est réalisée en acier inoxydable de haute qualité (acier 304) avec une longue durée de vie qui peut être stérilisé par autoclavage. Presque toutes les marques commerciales de plaques de culture à 96 puits disponibles sur le marché peuvent être utilisés avec ce wounder mécanique des cellules en raison de la barre de guidage rég…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier M. Tam Po Leung, M. Wong Chi Kin et le personnel technique de la Faculté des sciences Atelier, Hong Kong Baptist University, pour leurs compétences techniques et des conseils pour rendre le prototype de ce wounder.
Materials
| 96-well cell culture plate | Nunc | 167008 | Other brands of 96-well cell culture plate can also be used |
| P10 pipette tips | Axygen | 301-03-051 | Short P10 pipette tip is more easy to create a clear wound |
| Wounder | R&P Technology Limited | ||
| Medium 199 | Sigma | M2520-1L | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Fetal bovine serum | Gibco | 26140079 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140122 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma | H3393 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Gelatin from bovine skin | Sigma | G9391 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
Referências
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