Un dispositivo per realizzare la migrazione delle cellule / Wound Healing in una piastra a 96 pozzetti
Summary
Qui, presentiamo un protocollo per eseguire un test di migrazione cellulare semi-high throughput su una piastra di coltura cellulare a 96 pozzetti. Questo protocollo è un metodo rapido, semplice ed economico per creare ferite scratch coerenti su un monostrato di cellule.
Abstract
La migrazione delle cellule / ferendo test è un metodo comunemente utilizzato per studiare la migrazione delle cellule e altri processi biologici, come l'angiogenesi e metastasi tumorali. In questo saggio, le cellule sono coltivate per formare un monostrato confluente e una ferita meccanica viene creato graffiando con un dispositivo. Allora il tasso di migrazione delle cellule verso la zona denudato può essere monitorato mediante imaging. Il nostro wounder meccanica 8 canali è progettato per affrontare la maggior parte dei problemi associati con il test migrazione cellulare. In primo luogo, la nostra wounder può essere facilmente sterilizzato in autoclave o con comuni disinfettanti. In secondo luogo, i singoli pin regolabili permettono anche contatto con la piastra di coltura cellulare in modo che possono essere creati ferite taglienti e riproducibili. In terzo luogo, le barre di guida su entrambi i lati del wounder assicurano posizione ferimento consistente in ciascun pozzetto. L'uso di puntali di plastica per il ferimento può fornire ulteriori migliore gestione del feritore e minimizzare le contaminationico. In conclusione, il nostro wounder cella può fornire ai ricercatori un dispositivo facile e riproducibile utente per l'esecuzione del test migrazione cellulare utilizzando la piastra standard coltura a 96 pozzetti.
Introduction
La migrazione cellulare gioca un ruolo importante nei processi cellulari, come ad esempio l'embriogenesi, la neurogenesi, l'angiogenesi, la guarigione delle ferite, delle mucose riparazione, epiteliali-mesenchimali-transizioni in fase di sviluppo normale e la situazione della malattia 1. Si tratta di un processo complicato, che richiede un coordinamento delle numerose manifestazioni inter- e intra-cellulari, compresi segnalazione interazioni molecola, la polarizzazione delle cellule, la riorganizzazione del citoscheletro, rimodellamento della matrice, protrusione della membrana e dinamica cellula-cellula adesione modulazione 2. Studiando la migrazione delle cellule, la scoperta e la convalida delle sostanze chimiche o biomolecole che conducono al movimento delle cellule e le relative vie biochimiche possono essere determinati. Questo processo fondamentale può essere utilizzato vantaggiosamente come proxy per varie applicazioni, come il trattamento di malattia e drug targeting.
Il saggio ferendo è uno dei saggi di migrazione cellulare 3. Qui, unsingolo campione di cellule viene parzialmente rimosso dai mezzi meccanici per produrre una zona denudata cui le cellule migreranno per coprire l'area. La percentuale di recupero in un particolare momento sarà monitorato. Quando si maneggiano gran numero di campioni, questioni come il costo sperimentale e la contaminazione incrociata all'interno di campioni possono essere problematico. Anche se molti strumenti commerciali e saggi sono disponibili per lo studio migrazione delle cellule 4, 5, 6, molti di loro richiesto attrezzature costose e sofisticate e miglioramenti sono ancora necessari. Per queste ragioni, un wounder cellule meccanico 8 canali (Figura 1) è sviluppato.
Il nostro wounder cellule meccanica 8 canali ha incorporato diverse caratteristiche uniche nel risolvere i suddetti problemi. Esso fornisce la flessibilità necessaria per eseguire la migrazione delle cellule / ferendo saggi nel formato piastra di coltura a 96 pozzetti. La regolazione guprogettazione bar Iding assicura che la zona zero è in posizione centrale di ogni bene. Inoltre, l'altezza delle barre di guida può essere regolato in modo che il feritore è applicabile per varie marche di piastre di coltura. Infine, il design pin ferimento regolabile consente un ancora di contatto delle punte delle pipette con la superficie della piastra di coltura per ottenere simultaneamente e riproducibile ferimento 7, 8.
Protocol
Representative Results
Discussion
Il nostro feritore cella ha diverse caratteristiche uniche nel risolvere i problemi dei test di migrazione delle cellule tradizionali. Il feritore cellule meccanico a 8 canali è realizzato in acciaio inox di alta qualità (acciaio 304) con una lunga durata di vita che può essere sterilizzato in autoclave. Quasi tutti marchi commerciali di piastre di coltura a 96 pozzetti disponibili sul mercato possono essere utilizzati con questo wounder cellule meccanica causa della barra guida regolabile. Il disegno della barra gui…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori desiderano ringraziare il Sig Tam Po Leung, Mr. Wong Chi Kin e lo staff tecnico della Facoltà di Scienze Workshop, Hong Kong Baptist University, per le loro competenze tecniche e consigli per rendere il prototipo di questo feritore.
Materials
| 96-well cell culture plate | Nunc | 167008 | Other brands of 96-well cell culture plate can also be used |
| P10 pipette tips | Axygen | 301-03-051 | Short P10 pipette tip is more easy to create a clear wound |
| Wounder | R&P Technology Limited | ||
| Medium 199 | Sigma | M2520-1L | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Fetal bovine serum | Gibco | 26140079 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140122 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma | H3393 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
| Gelatin from bovine skin | Sigma | G9391 | For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. Use appropirate culture medium and condition for other type of cells. |
Referências
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