باستخدام كامل-- جبل المناعية طريقة لدراسة التعصيب من القناة الصفراوية في<em> سونكوس مورينوس</em
Summary
نهج كامل المناعية جبل، لتصور التعبير البروتين العصبية في القناة الصفراوية خارج الكبد في سونكوس مورينوس. هنا. هذا البروتوكول يمكن استخدامها لتحليل التعصيب من جميع الأجهزة الحشوية في S. مورينوس أو الأنواع الأخرى.
Abstract
يصف هذا العمل طريقة تلطيخ المناعية كامل جبل في التفاصيل، وذلك باستخدام الأجسام المضادة البروتين العصبي لتسمية التعصيب من القناة الصفراوية في سونكوس مورينوس ( S. مورينوس ). أولا، تم تشريح العينة من S. مورينوس وثابتة في بارافورمالدهيد 4٪ (بفا). ثانيا، تم إجراء علاج الأنزيمية وإمكانية تعطيل البيروكسيداز الذاتية. ثم تعرض العينة إلى الأجسام المضادة الأولية، المضادة للالعصبية البروتين الأجسام المضادة، لمدة 3-6 أيام. ثم تم تحضينها مع الأجسام المضادة الثانوية مترافق مع البيروكسيديز الفجل. تم الكشف عن تفاعل اللون عن طريق تفاعل العينة مع 3،3'-ديامينوبنزيدين (داب) الركيزة. ويمكن تطبيق هذه الطريقة لتحليل التعصيب من جميع الأجهزة الحشوية. وعلاوة على ذلك، يمكن أيضا أن تتكيف هذا البروتوكول لاختبار الأجسام المضادة العصبية الأخرى، ولكن الأمثل من أنتيبودييجب أن يتم إس أولا. وقد قدم هذه الطريقة أصلا من قبل كوراتاني وتاناكا 1 ، 2 ، 3 .
Introduction
المسك منزل يلقي ، سونكوس مورينوس ، ينتمي إلى النظام إنسكتيفورا والأسرة سوريسيداي. وتوزع هذه الثدييات الصغيرة في جميع أنحاء جنوب شرق آسيا وتسكن المنازل والمناطق العشبية التي تقع بالقرب من مساكن الإنسان أو أقلام الماشية 4 . هذا النوع يحمل الخصائص المورفولوجية العامة أكثر مماثلة للبشر من الحيوانات المختبرية الأخرى، مثل الماوس، الفئران، والأرنب 5 . سابقا، تم استخدام المناعية كامل جبل مع علامة الخلايا العصبية الطرفية ل S. مورينوس الخلايا العصبية البروتين (نف) لتسمية الأعصاب الطرفية في البنكرياس 6 ، الحليمة الاثني عشر الرئيسية 7 ، البواب 8 ، المرارة 5 ، والمسالك الصفراوية خارج الكبد 9 .
نف هو مجمع الجزيئات التي هي جزء من الهيكل العصبي الخلايا العصبية ناضجة. البروتين ذات الصلة العصبيةتوسط التفاعلات بين نف والزيغوسوم. وينظم كل من وظيفة الانزيم وهيكل بروتينات رابط من قبل نف 10 . يتكون مجمع نف من ثلاثة ببتيدات: نف-L (70 كيلو دالتون)، نف-M (150-160 كيلو دالتون)، و نف-H (200 كيلو دالتون). نف يمكن العثور عليها في محاور عصبية في كل من الجهاز العصبي المركزي والمحيطي. وقد تبين أن الأجسام المضادة نف البشري المضادة لتسمية محاور عصبية من الجهاز العصبي المركزي والمحيطي. وقد أثبتت التحقيقات التشريحية والكهربية أن العضلة العاصرة، المرارة، والجهاز الهضمي القريبة ترتبط 11 ، 12 ، 13 ، 14 . ومع ذلك، لم يتم تعريف السمات المورفولوجية من اتصالات الخلايا العصبية بعد.
هذا العمل يدل على استخدام كامل جبل طريقة تلطيخ المناعي لتسمية التعصيب من بيلين S. مورينوسإاري، أداة تعريف إنجليزية غير معروفة، أداة تعريف إنجليزية غير معروفة، نف، أنتيبودي.
Protocol
Representative Results
Discussion
يصف هذا العمل الإجراء التجريبي لتصور التعصيب من القناة الصفراوية خارج الكبد باستخدام الأجسام المضادة ضد البروتين العصبية. تم تكييف هذا البروتوكول من البروتوكول الذي وصفه كوراتاني وتاناكا 1 ، 2 ، 3 .
<p class="jove_content" styl…Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
المؤلفين ليس لديهم اعترافات.
Materials
| orthoperiodic acid | Wako | 162-00732 | |
| papain | Wako | 164-00172 | |
| bovine serum albumin (BSA) | Wako | 010-15131 | |
| sodium azide | Nacalai Tesque | 312-33 | |
| neurofilament protein (NFP) antibody | Dako | M0762, lot 089, clone: 2F11 | |
| peroxidase-conjugated affinity-purified sheep anti-mouse IgG-HRP | MBL | Code 330 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) | Wako | 349-00903 | |
| imidazole | Sigma | I-0125 |
Referências
- Kuratani, S., Tanaka, S., Ishikawa, Y., Zukeran, C. Early development of the hypoglossal nerve in the chick embryo as observed by the whole-mount nerve staining method. Am. J. Anat. 182 (2), 155-168 (1988).
- Kuratani, S., Tanaka, S. Peripheral development of the avian vagus nerve with special reference to the morphological innervation of heart and lung. Anat. Embryol. (Berl). 182 (5), 435-445 (1990).
- Kuratani, S., Tanaka, S. Peripheral development of avian trigeminal nerves. Am. J. Anat. 187 (1), 65-80 (1990).
- Yi, S. Q., et al. House musk shrew, Suncus murinus: a novel and natural obesity-resistant animal model. Obes. Metab. 6, 22-28 (2010).
- Yi, S. Q., et al. Surgical anatomy of innervation of the gallbladder in humans and Suncus murinus with special reference to morphological understanding of gallstone formation after gastrectomy. World J. Gastroenterol. 13 (14), 2066-2071 (2007).
- Yi, S. Q., et al. Anatomical study of the pancreas in the house musk shrew, Suncus murinus, with special reference to the blood supply and innervation. Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 273 (1), 630-635 (2003).
- Yi, S. Q., et al. Surgical anatomy of the innervation of the major duodenal papilla in humans and Suncus murinus, from the perspective of preserving innervation in organ-saving procedures. Pancreas. 30 (3), 211-217 (2005).
- Yi, S. Q., et al. Surgical anatomy of the innervation of the pylorus in humans and Suncus murinus, in relation to the surgical technique for pylorus-preserving pancreatoduodenectomy. World J. Gastroenterol. 12 (14), 2209-2216 (2006).
- Yi, S. Q., Ren, K., Kinoshita, M., Takano, N., Itoh, M., Ozaki, N. Innervation of Extrahepatic Biliary Tract, With Special Reference to the Direct Bidirectional Neural Connections of the Gall Bladder, Sphincter of Oddi and Duodenum in Suncus murinus, in Whole-Mount Immunohistochemical Study. Anat. Histol. Embryol. 45 (3), 184-188 (2016).
- Wang, H., et al. Neurofilament proteins in axonal regeneration and neurodegenerative diseases. Neural Regen. Res. 7 (8), 620-626 (2012).
- Wyatt, A. P. The relationship of the sphincter of Oddi to the stomach, duodenum and gall-bladder. J. Physiol. 193 (2), 225-243 (1967).
- Mawe, G. M., Kennedy, A. L. Duodenal neurons provide nicotinic fast synaptic input to sphincter of Oddi neurons in guinea pig. Am. J. Physiol. 277, G226-G234 (1999).
- Seo, J. H., Cho, S. S., Lee, I. S., Lee, H. S. Anatomical and neuropeptidergic properties of the duodenal neurons projecting to the gallbladder in the golden hamster. Arch. Histol. Cytol. 65 (4), 317-321 (2002).
- Padbury, R. T., Furness, J. B., Baker, R. A., Toouli, J., Messenger, J. P. Projections of nerve cells from the duodenum to the sphincter of Oddi and gallbladder of the Australian possum. Gastroenterology. 104 (1), 130-136 (1993).
- White, J. J., Reeber, S. L., Hawkes, R., Sillitoe, R. V. Wholemount immunohistochemistry for revealing complex brain topography. J. Vis. Exp. (62), e4042 (2012).
