Mit einer vollständigen immunhistochemischen Methode, um die Innervation der Gallenwege zu studieren<em> Suncus murinus</em
Summary
Ein ganzheitlicher immunhistochemischer Ansatz, um die Neurofilament-Protein-Expression im extrahepatischen Gallengang in Suncus murinus zu visualisieren. Wird hier vorgestellt. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um die Innervation aller viszeralen Organe in S. murinus oder anderen Spezies zu analysieren.
Abstract
Diese Arbeit beschreibt die Vollständige Immunhistochemie Färbung Methode im Detail, mit Neurofilament Protein-Antikörper, um die Innervation der Gallenwege in Suncus murinus ( S. murinus ). Zuerst wurde das Exemplar von S. murinus seziert und in 4% Paraformaldehyd (PFA) fixiert. Zweitens wurde eine enzymatische Behandlung und potentielle endogene Peroxidase-Inaktivierung durchgeführt. Die Probe wurde dann dem primären Antikörper, Anti-Neurofilament-Protein-Antikörper, für 3-6 Tage ausgesetzt. Es wurde dann mit dem sekundären Antikörper inkubiert, der mit Meerrettichperoxidase konjugiert war. Die Farbreaktion wurde durch Umsetzen der Probe mit einem 3,3'-Diaminobenzidin (DAB) -Substrat aufgedeckt. Diese Methode kann angewendet werden, um die Innervation aller viszeralen Organe zu analysieren. Darüber hinaus kann dieses Protokoll auch angepasst werden, um andere neuronale Antikörper zu testen, aber die Optimierung der antibodiEs sollte zuerst getan werden. Diese Methode wurde ursprünglich von Kuratani und Tanaka 1 , 2 , 3 eingeführt.
Introduction
Das Haus Moschusspitzmaus , Suncus murinus , gehört zur Ordnung Insektivora und die Familie Soricidae. Dieses kleine Säugetier ist in Südostasien verteilt und bewohnt Häuser und Rasenflächen, die in der Nähe von menschlichen Wohnräumen oder Viehstiften liegen 4 . Diese Spezies weist allgemeine morphologische Merkmale auf, die den Menschen ähnlicher sind als andere Labortiere wie Maus, Ratte und Kaninchen 5 . Bisher wurde eine Vollmontage-Immunfärbung mit einem peripheren Neuron-Marker für S. murinus- Neurofilament-Protein (NFP) verwendet, um die peripheren Nerven in der Bauchspeicheldrüse 6 , der großen Duodenalpapille 7 , dem Pylorus 8 , der Gallenblase 5 und dem extrahepatischen Gallengang 9 zu markieren.
NFP ist ein makromolekularer Komplex, der Teil des reifen neuronalen Zytoskeletts ist. Neurofilament-verwandtes ProteinS Zwischenwechsel zwischen NFP und dem Zygosom. Sowohl die Enzymfunktion als auch die Struktur der Linkerproteine werden durch NFP 10 reguliert. Der NFP-Komplex besteht aus drei Polypeptiden: NF-L (70 kDa), NF-M (150-160 kDa) und NF-H (200 kDa). NFP kann in neuronalen Axonen sowohl im zentralen als auch im peripheren Nervensystem gefunden werden. Anti-Human-NFP-Antikörper wurde gezeigt, um Axone des zentralen und peripheren Nervensystems zu etikettieren. Anatomische und elektrophysiologische Untersuchungen haben gezeigt, dass der Sphinkter, die Gallenblase und der proximale Magen-Darm-Trakt 11 , 12 , 13 , 14 verbunden sind. Allerdings sind die morphologischen Merkmale ihrer neuronalen Verbindungen noch nicht definiert.
Diese Arbeit zeigt die Verwendung einer ganz-montierten immunhistochemischen Färbemethode, um die Innervation des S. murinus bil zu etikettierenIary Trakt mit einem NFP-Antikörper.
Protocol
Representative Results
Discussion
Diese Arbeit beschreibt das experimentelle Verfahren zur Visualisierung der Innervation des extrahepatischen Gallenweges unter Verwendung eines Antikörpers gegen Neurofilamentprotein. Dieses Protokoll wurde aus dem von Kuratani und Tanaka 1 , 2 , 3 beschriebenen Protokoll angepasst.
Für dieses Experiment planen Sie die Timeline für jedes der Experimente, da der Voll-Mount-Färbe-Ansatz für 2-3 W…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren haben keine Anerkennung.
Materials
| orthoperiodic acid | Wako | 162-00732 | |
| papain | Wako | 164-00172 | |
| bovine serum albumin (BSA) | Wako | 010-15131 | |
| sodium azide | Nacalai Tesque | 312-33 | |
| neurofilament protein (NFP) antibody | Dako | M0762, lot 089, clone: 2F11 | |
| peroxidase-conjugated affinity-purified sheep anti-mouse IgG-HRP | MBL | Code 330 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) | Wako | 349-00903 | |
| imidazole | Sigma | I-0125 |
Referências
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