पित्त पथ के उत्थान का अध्ययन करने के लिए एक संपूर्ण-माउंट इम्यूनोहिस्टोकेमिकल पद्धति का उपयोग करना<em> सनकस मूरीनस</em
Summary
सनकस मूरीनस में ऊष्ठीय पित्त पथ में neurofilament प्रोटीन अभिव्यक्ति की कल्पना करने के लिए, एक संपूर्ण पर्वत immunohistochemical दृष्टिकोण। यहां प्रस्तुत किया गया है इस प्रोटोकॉल का उपयोग एस। मूरीनस या अन्य प्रजातियों में सभी आंत के अंगों के इनहेरियेशन के विश्लेषण के लिए किया जा सकता है।
Abstract
यह काम पूरे-माउंट इम्युनोहिस्टोकेमिस्ट्री स्टेनाइजिंग विधि को विस्तार से बताता है, सनस्कस मूरीनस ( एस। मुरीनस में पितरी पथ के मूलकरण को लेबल करने के लिए neurofilament प्रोटीन एंटीबॉडी का उपयोग करके) )। सबसे पहले, नमूना एस murinus से विच्छेदित किया गया था और 4% paraformaldehyde (पीएफए) में तय। दूसरा, एक एंजाइमिक उपचार और संभावित अंतर्जात पेरोक्साइड निष्क्रियता का प्रदर्शन किया गया। नमूना तब 3-6 दिनों के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी, एंटी-न्यूरॉफिलमेंट प्रोटीन एंटीबॉडी के सामने निकला था। यह तब माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ incubated था जो हॉर्सडाडिश पेरोक्साइड के साथ संयुग्मित किया गया था। रंग की प्रतिक्रिया 3,3'-हिरनोबेंजिडाइन (डीएबी) सब्सट्रेट के साथ नमूने पर प्रतिक्रिया के द्वारा प्रकट हुई। इस विधि को सभी आंतों के अवयवों के विश्लेषण के लिए लागू किया जा सकता है। इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल को अन्य न्यूरॉनल एंटीबॉडी का परीक्षण करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, लेकिन एंटीबॉडी का अनुकूलनएस पहले किया जाना चाहिए यह विधि मूल रूप से कुराटानी और तनाका 1 , 2 , 3 द्वारा प्रस्तुत की गई थी।
Introduction
घर कस्तूरी झांकना , सनकस मूरीनस , इनसेक्टीवोरो और परिवार सोरिसिडे के आदेश से संबंधित है। यह छोटे स्तनपायी दक्षिण पूर्व एशिया में वितरित किया जाता है और घरों और घास वाले क्षेत्रों में रहती है जो मानव बस्तियों या पशु कलम 4 के पास स्थित हैं। यह प्रजाति सामान्य रूप से अन्य प्रयोगशाला पशुओं, जैसे माउस, चूहा, और खरगोश 5 की तुलना में मनुष्यों के समान सामान्य रूपात्मक लक्षण दर्शाती है। इससे पहले, एस। मूरीनस न्यूरोफिलमेट प्रोटीन ( एनएफपी ) के लिए पेरीफेरल न्यूरॉन मार्कर के साथ पूरे माउंट इम्यूनोस्टाईंग का उपयोग अग्न्याशय 6 , प्रमुख डुओडानल पपिल 7 , पिलोरस 8 , पित्ताशय की थैली 5 , और ऊष्माशक पित्त पथ 9 में परिधीय नसों को लेबल करने के लिए किया गया था।
एनएफपी एक macromolecular जटिल है जो परिपक्व न्यूरोनल साइटोस्केलेटन का हिस्सा है। न्यूरोफ़िलामेंट से संबंधित प्रोटीनएनएफपी और ज़ीगोज़म के बीच मध्यस्थता का मध्यस्थता दोनों एंजाइम फ़ंक्शन और लिंकर प्रोटीन की संरचना को एनएफपी 10 द्वारा नियंत्रित किया जाता है। एनएफपी कॉम्प्लेक्स तीन पॉलिप्टाइड के बने हैं: एनएफ-एल (70 केडीए), एनएफ-एम (150-160 केडीए), और एनएफ-एच (200 केडीए)। एनएफपी केंद्रीय और परिधीय तंत्रिका तंत्र दोनों में neuronal axons में पाया जा सकता है। एंटी-मानव एनएफपी एंटीबॉडी को केंद्रीय और पेरीफेरल नर्वस सिस्टम के एंजंस को लेबल करने के लिए दिखाया गया है। शारीरिक और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल जांच से पता चला है कि दबानेवाला यंत्र, पित्ताशय का पत्थर, और समीपस्थ जठरांत्र संबंधी मार्ग 11 , 12 , 13 , 14 से जुड़े हैं। हालांकि, उनके न्यूरोनल कनेक्शन की रूपात्मक विशेषताएं अभी तक परिभाषित नहीं हुई हैं।
यह काम एस। मूरीन बील के मूलरूप को लेबल करने के लिए एक संपूर्ण-माउंट इम्युनोहिस्टोकेमिकल स्टैनिंग विधि को दर्शाता हैएक एनएफपी एंटीबॉडी के साथ आर्यन मार्ग
Protocol
Representative Results
Discussion
यह काम, न्यूरोफिलामेंट प्रोटीन के खिलाफ एंटीबॉडी का उपयोग करते हुए असाधारण पित्तिक पथ के अन्वेषण के दृश्य के लिए प्रयोगात्मक प्रक्रिया का वर्णन करता है। इस प्रोटोकॉल को कुरातिनी और तनाका 1 <sup…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों के पास कोई स्वीकार नहीं है।
Materials
| orthoperiodic acid | Wako | 162-00732 | |
| papain | Wako | 164-00172 | |
| bovine serum albumin (BSA) | Wako | 010-15131 | |
| sodium azide | Nacalai Tesque | 312-33 | |
| neurofilament protein (NFP) antibody | Dako | M0762, lot 089, clone: 2F11 | |
| peroxidase-conjugated affinity-purified sheep anti-mouse IgG-HRP | MBL | Code 330 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) | Wako | 349-00903 | |
| imidazole | Sigma | I-0125 |
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