Eksponering av Pig CNS for Histologisk analyse: En håndbok for halshogging, Skull Åpning og Brain Removal

Summary

Målet med dette papir, og instruksjonsvideo er å beskrive hvordan man avsløre og fjerne postmortem grisehjerne og hypofysen i en intakt tilstand, egnet for etterfølgende makroskopisk og histologisk analyse.

Abstract

Griser har blitt stadig mer populære i stor dyr translasjonell nevro forskning som en økonomisk og etisk gjennomførbart alternativ til ikke-menneskelige primater. Den store hjernestørrelse av pluggen tillater bruk av konvensjonelle kliniske hjerne kameraene og direkte bruk og testing av nevrokirurgiske prosedyrer og utstyr fra den humane klinikk. Videre makroskopisk og histologisk analyse krever imidlertid postmortem eksponering av pluggen sentralnervesystemet (CNS) og etterfølgende fjerning av hjernen. Dette er ikke en lett oppgave, som piggen CNS er innkapslet av en tykk, bony skalle og ryggsøylen. Målet med dette papir, og instruksjonsvideo er å beskrive hvordan man avsløre og fjerne postmortem grisehjerne og hypofysen i en intakt tilstand, egnet for etterfølgende makroskopisk og histologisk analyse.

Introduction

Translasjonsforskning nevrovitenskap studier i griser har blitt stadig mer populært i løpet av de siste to tiårene. Den store størrelsen på grisehjerne muliggjør bruk av konvensjonelle kliniske hjerne kameraene og direkte bruk og testing av nevrokirurgiske prosedyrer og utstyr fra den humane klinikk ^{1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8.} I de siste 20 årene, griser, spesielt minigriser (f.eks, Gottingen minigris), er blitt brukt til å undersøke neuromodulatory behandlingsformer, slik som stamcelletransplantasjon; viral vektor transfeksjon; og dyp hjernestimulasjon rettet mot Parkinsons sykdom, fedme, depresjon og Alzheimers sykdom ^{2, 6,}= "xref"> ^{9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17.} Dette er fulgt av en utvikling av stereotaksiske og kirurgiske tilnærminger for å manipulere marsvin CNS ^{3, 18, 19, 20, 21.} Er blitt evaluert anlegges CNS endringer i levende dyr ved å bruke hjerneavbildning (PET ^{10, 13, 22, 24} og ^MR-23), cystometry ^{11, 12, 25,} gangartanalyse^17, neurologisk evaluering ^{9, 17,} og post mortem undersøkelse basert på histologi og stereological analyse ^{14, 15, 17, 26, 27, 31.} Imidlertid krever post mortem analyse eksponering og fjerning av grisehjerne, som er ikke en lett oppgave, som en tykk, bony skalle og et fibrøst dural dekker omgir grisehjerne.

Målet med dette papiret og instruksjonsvideo er å beskrive hvordan postmortem gris hjernen og hypofysen kan bli utsatt og fjernet i et intakt tilstand i 15-20 min ved hjelp av ikke-motoriserte kirurgiske verktøy. Instruksjonsvideoen og fotografiske illustrasjoner viser mannlige minigriser (alder: 6 måneder, kroppsvekt: 20-25 kg) som brukes for en anatomisk studie om minigris hypofysen.

Protocol

Animal anestesi og euthanesia ble utført i henhold til "Prinsipper for forsøksdyr omsorg" (NIH publikasjon nr 86-23, revidert 1985) og godkjent av det danske Rådet for dyre forskningsetikk. 1. instrumenter Samle instrumentene som presenteres i videoen og oppført i tabell for materialteknologi. 2. halshogging MERK: Anestesi ble indusert ved en intramuskulær injeksjon av 5 ml av midazolam (…

Representative Results

For å hindre at vevet materiale fra å tørke ut, er det anbefalt å lagre fjernet hjerne og hypofyse i en krukke fylt med fikseringsmiddel eller isotonisk saltoppløsning umiddelbart etter makroskopisk analyse er blitt utført. Vevet materiale kan lagres i fiksativ i år, mens lagring i isotonisk saltoppløsning, selv i et kjøleskap, vil føre til vev nedbrytning med tiden. Den fjernede hypofysen kan også være direkte fro…

Discussion

De fleste eksperimentelle nevro studier er utført på små dyrearter, slik som mus og rotter, hvor tilgang til CNS er tilrettelagt med en tynn skull- og dural-tykkelse. I større forsøksdyr som griser ^{1, 4, 8,} sauer ^32, og ikke-humane primater, den betraktelige tykkelse av disse strukturene nødvendiggjør bruk av robuste instrumenter (tabell av materialer) og riktig startpunkter for skallebenet fjerni…

Materials

Heavy Scalpel Handle #4	FST (Fine Science Tools)	10008-13	Good for skin incision and soft tissue removal
Non-Sterile Scalpel Blades #23	FST	10023-00
Scalpel Handle #7	FST	10007-12	Optimal for dural incision and precision work
Non-Sterile Scalpel Blades #11	FST	10011-00
Surgical Forceps	FST	11024-18	The tip of the surgical forceps ensure a firm grip
Kerrison Bone Punch	Aesculap Neurosurgery	FF713R	Must be robust, bite size 3-5 mm
Bone Rongeur	Aesculap Neurosurgery	MD615	Must be robust, bite size 15 x 5 mm
Bone Rongeur	Aesculap Neurosurgery	FO551R	Must be robust, bite size 25 x 15 mm
Bone Chisel	Lawton	67-0335	The size of the chisel head should not exceed 20 mm
Mallet (Hammer)	Millarco	5624108	Weigth 300 g, length 30 cm, head hit area size 2 x 2 cm
Micro-Scissor	FST	14002-14
Dissector	Aesculap Neurosurgery	OL165R
Göttingen minipigs	Ellegaard Göttingen Minipigs A/S, Denmark
Euthanimal			pentobarbital
Ketamine	Pfizer
Midazolam	Hameln Pharmaceuticals