Eksponering af Pig CNS til histologisk analyse: En Manual til Decapitation, Skull Åbning og Brain Removal

Summary

Målet med dette papir og instruktions video er at beskrive, hvordan at blotlægge og fjerne den post mortem svinehjerne og hypofysen i en intakt tilstand, egnet til efterfølgende makroskopisk og histologisk analyse.

Abstract

Grise er blevet stadig mere populært i store dyr translationel neurovidenskab forskning som en økonomisk og etisk realistisk alternativ til ikke-menneskelige primater. Den store hjerne størrelse grisen tillader anvendelsen af ​​konventionelle kliniske hjerne kameraer og direkte anvendelse og test af neurokirurgiske procedurer og udstyr fra den humane klinik. Yderligere makroskopisk og histologisk analyse kræver imidlertid post mortem eksponering af grisen centralnervesystemet (CNS) og efterfølgende hjerne fjernelse. Dette er ikke en let opgave, som grisen CNS er indkapslet af en tyk, benet kranium og rygsøjle. Målet med dette papir og instruktions video er at beskrive, hvordan at blotlægge og fjerne den post mortem svinehjerne og hypofysen i en intakt tilstand, egnet til efterfølgende makroskopisk og histologisk analyse.

Introduction

Translationelle neurovidenskab studier i svin er blevet mere og mere populær i løbet af de sidste to årtier. Den store størrelse af svinehjerne muliggør anvendelse af konventionelle kliniske hjerne kameraer og direkte anvendelse og test af neurokirurgiske procedurer og udstyr fra den humane klinik ^{1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8.} I de sidste 20 år, svin, især minigrise (fx, Gottingen minigrise), er blevet anvendt til at undersøge neuromodulatory behandlingsmodaliteter, såsom stamcelletransplantation; virusvektor transfektion; og dybhjemestimulation rettet mod Parkinsons sygdom, fedme, depression og Alzheimers sygdom ^{2, 6,}= "xref"> ^{9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17.} Dette er blevet fulgt af udviklingen af stereotaksiske og kirurgiske metoder til at manipulere smågris CNS ^{3, 18, 19, 20, 21.} De anlagt CNS ændringer er blevet evalueret i levende dyr ved anvendelse brain imaging (PET ^{10, 13, 22, 24} og MR ^23), cystometri ^{11, 12, 25,} ganganalyse^17, neurologisk evaluering ^{9, 17,} og obduktion baseret på histologi og stereologiske analyse ^{14, 15, 17, 26, 27, 31.} Imidlertid post mortem analyse kræver eksponering og fjernelse af svinehjerne, som ikke er en let opgave, som en tyk, benet kranium og et fibrøst dural dækker omgiver svinehjerne.

Målet med dette papir og instruktions video er at beskrive, hvordan den postmortem svinehjerne og hypofyse kan eksponeres og fjernes i en intakt tilstand i 15-20 min under anvendelse af ikke-motoriserede kirurgiske redskaber. Den instruktionsvideo og fotografiske illustrationer viser mandlige minigrise (alder: 6 måneder, legemsvægt: 20-25 kg), der anvendes til en anatomisk undersøgelse minigrise hypofysen.

Protocol

Animal anæstesi og euthanesia blev udført i overensstemmelse med "Principper for laboratoriedyr pleje" (NIH publikation nr 86-23, revideret 1985) og godkendt af Dansk Råd for Animal Research Ethics. 1. instrumenter Saml de instrumenter, der præsenteres i videoen og opført i tabellen of Materials. 2. Decapitation BEMÆRK: Anæstesi blev induceret ved en intramuskulær injektion af 5 ml af …

Representative Results

At forhindre vævet materiale tørrer ud, anbefales det at opbevare den fjernede hjerne og hypofyse i en krukke fyldt med fiksativ eller isotonisk saltvand umiddelbart efter at der er udført makroskopisk analyse. Vævet materiale kan opbevares i fiksativ i år, mens opbevaring i isotonisk saltopløsning, selv i et køleskab, vil føre til væv henfald med tiden. Den fjernede hypofyse kan også fryses direkte ved nedsænkning …

Discussion

Fleste eksperimentelle neurovidenskab undersøgelser udføres i små dyrearter, såsom mus og rotter, hvor adgang til CNS lettes af en tynd skull- og dural-tykkelse. Men i større forsøgsdyr som grise ^{1, 4, 8,} får ^32, og ikke-humane primater, den betydelige tykkelse af disse strukturer nødvendiggør anvendelsen af robuste instrumenter (table af materialer) og ordentlige indgange til kraniet fjernelse …

Materials

Heavy Scalpel Handle #4	FST (Fine Science Tools)	10008-13	Good for skin incision and soft tissue removal
Non-Sterile Scalpel Blades #23	FST	10023-00
Scalpel Handle #7	FST	10007-12	Optimal for dural incision and precision work
Non-Sterile Scalpel Blades #11	FST	10011-00
Surgical Forceps	FST	11024-18	The tip of the surgical forceps ensure a firm grip
Kerrison Bone Punch	Aesculap Neurosurgery	FF713R	Must be robust, bite size 3-5 mm
Bone Rongeur	Aesculap Neurosurgery	MD615	Must be robust, bite size 15 x 5 mm
Bone Rongeur	Aesculap Neurosurgery	FO551R	Must be robust, bite size 25 x 15 mm
Bone Chisel	Lawton	67-0335	The size of the chisel head should not exceed 20 mm
Mallet (Hammer)	Millarco	5624108	Weigth 300 g, length 30 cm, head hit area size 2 x 2 cm
Micro-Scissor	FST	14002-14
Dissector	Aesculap Neurosurgery	OL165R
Göttingen minipigs	Ellegaard Göttingen Minipigs A/S, Denmark
Euthanimal			pentobarbital
Ketamine	Pfizer
Midazolam	Hameln Pharmaceuticals