Um multi-furo criotubo Elimina congelação Artifacts quando tecidos musculares são directamente Imerso em azoto líquido

Resumo

Este protocolo descreve um processo para congelar os tecidos musculares, mergulhando-os directamente em azoto líquido. Este protocolo também realça um novo frasco de congelação que pode evitar o "efeito manta" de gás de azoto quando os contactos de azoto líquido da superfície do tecido de um espécime.

Resumo

Estudos sobre a fisiologia do músculo esquelético enfrentar o desafio técnico de processar adequadamente as amostras para obtenção de cortes com compartimentos citoplasmáticos claramente visíveis. Outro obstáculo é a aposição apertada de miofibras para os tecidos circundantes. Uma vez que o processo de fixação do tecido e parafina leva ao encolhimento das fibras musculares, congelamento é um meio óptimas de endurecimento tecido muscular para seccionamento. No entanto, um problema vulgarmente encontrado, a formação de cristais de gelo, ocorre durante a preparação de secções congeladas por causa do elevado teor de água de músculo. O protocolo aqui apresentado descreve um primeiro método simples e eficiente para a congelação de tecidos musculares adequadamente por imersão em azoto líquido. O problema com o uso de azoto líquido sozinho é que ele provoca a formação de uma barreira de gás de azoto ao lado do tecido, que actua como um isolador e inibe o arrefecimento dos tecidos. Para evitar este efeito "cobertor de vapor", a new criotubo foi concebido para aumentar a velocidade do fluxo de líquido em torno da superfície do tecido. Isto foi conseguido por perfuração de um total de 14 orifícios de entrada na parede do frasco. De acordo com a dinâmica de bolha, uma taxa mais elevada de resultados de escoamento de líquido em bolhas mais pequenas e menos possibilidades de formar uma barreira ao gás. Quando azoto líquido flui para dentro do frasco de congelação através dos orifícios de entrada de ar, a velocidade do fluxo em torno do tecido é suficientemente rápido para eliminar a barreira de gás. Em comparação com o método de congelação dos tecidos musculares usando isopentano pré-arrefecido, este protocolo é mais simples e mais eficiente e pode ser usada para congelar músculo de um modo de transferência. Além disso, este método é ideal para instituições que não têm acesso a isopentano, que é extremamente inflamável à temperatura ambiente.

Introdução

O músculo esquelético é o componente mais valioso de um animal produtor de carne a partir do ponto de vista nutricional e processamento. Na indústria da carne, há dois aspectos especialmente críticos: a eficiência de crescimento muscular e a qualidade da carne resultante. Como um componente principal do músculo, as fibras musculares estão directamente relacionadas com o desempenho do crescimento e qualidade da carne fresca em animais ^1. Por exemplo, o número total de fibras (TNF) e a área da secção transversal das fibras (CSAF) principalmente determinar a massa muscular e a qualidade da carne; Também, Tipo de fibra Composição (FTC) afeta forte....

Protocolo

O método atual foi estabelecido e validado para colher e armazenar mais de 1.000 amostras de músculo para a coloração histológica em nosso laboratório. Todos os procedimentos envolvendo cuidados com os animais e uso seguiu as diretrizes estabelecidas pelo Ministério da Agricultura da China.

1. Equipamentos para Coleta de Amostras

1. Rotular a identidade da amostra em cada frasco criogénico.
   Nota: O criotubo foi especialmente concebido para congelar amostras de tecido fresco para o procedimento criocorte (Figura 1A). Os frascos para injectáveis são feitas de polipropileno numa fábrica de molde (Figura 1C).
....

Resultados

A ilustração criotubo e o equipamento laboratorial comum para a congelação de músculos durante a preparação de secções congeladas são mostrados na Figura 1. Os criotubos são feitos de polipropileno num molde fábrica. Cada frasco tem um total de 14 orifícios de entrada: um está no tampão; outra está na parte inferior; e os restantes 12 formam quatro linhas paralelas, cada uma com quatro orifícios a 90 ° um do outro. Estes orifícios de entrada de ar pode acelerar a velocid.......

Discussão

Aqui, descrevemos um novo, cryovial multi-buraco para congelar e armazenar os tecidos musculares para realizar avaliações histológicas da função muscular. O passo crítico modificado neste protocolo é que a amostra no criotubo multi-furo é directamente imerso em azoto líquido. Para o nosso conhecimento, esta é a maneira mais simples e rapidest obter excelentes amostras congeladas para cryosectioning muscular entre os métodos de congelação existentes (ver os resultados representativos).

O desa.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Criostato Microtome	Microscópio	Leica Leica CM1950
	Nikon	Nikon DS-U3
Frasco Criogênico    Filme			Projetado por nós mesmos
Nitrogênio líquido
Bisturi			Comumente usado
10 cm Fórceps			Pinça de
25 cm			por
		de segurança	usado por câmera comandiana
			Comumente usado

Digital plástico usado Usado mim mesmo Luvas de freezer usadas por mim mesmo Vidro