Denne video artikel giver en detaljeret demonstration af de procedurer, der kræves for at kunne fjerne bugspytkirtlen fra en mus af dissektion for histologiske analyse og metabolisk profilering.
Vi har undersøgt bugspytkirtlen specifikke transkriptionsfaktor, 1a cre-recombinase; LOX-stop-lox-Kristen rotte sarkom, glycin til aspartinsyre på 12-codon (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) mus stamme som en model af menneskelige bugspytkirtelkræft. Målet med vores aktuelle undersøgelser er at identificere roman metaboliske markører for kræft i bugspytkirtlen progression. Vi har udført, metabolisk profilering af urin, afføring, blod, og bugspytkirtlen væv ekstrakter og histologiske analyser af bugspytkirtlen til at iscenesætte kræft progression. Musen bugspytkirtlen er ikke en veldefineret solid orgel som hos mennesker, men er snarere et diffust fordelt blødt væv, der ikke er let identificeres af enkeltpersoner uvante med musen indre anatomi eller af personer, der har lidt eller ingen erfaring udfører musen orgel dissektioner. Formålet med denne artikel er at give en detaljeret trinvis visuel demonstration at guide nybegyndere i fjernelse af musen bugspytkirtlen ved dissektion. Denne artikel bør være særligt værdifuldt til studerende og efterforskere ny forskning, der kræver høst af musen bugspytkirtlen af dissektion for metabolisk profilering eller histologiske analyser.
Musen har vist sig som en vigtig dyremodel af human bugspytkirtelkræft1,2. I Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + musemodel, Kristen rotte sarkom (K-Ras) onkogen aktiveres udelukkende i bugspytkirtlen, resulterer i indledningen af præcancerøse læsioner i bugspytkirtlen, kendt som pancreas intraepithelial neoplasias (PanINs), fremskridtet til pancreas duktalt adenocarcinomer, almindeligvis benævnt PDACs3. Denne mus modelsystem giver en af de bedste tilgængelige dyremodeller for humane bugspytkirtelkræft4,5, med den yderligere fordel, at PanINs dukke op inden for de første fem måneder af livet og ofte fremskridt til PDAC inden for en enkelt år4,5, hvorimod kræft i bugspytkirtlen hyppigst opstår hos mennesker 60-70 år.
Udtræk af bugspytkirtlen af dissektion fra Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + mus på forskellige alderstrin giver mulighed for detaljerede langsgående histologisk undersøgelse af udviklingen af kræft i bugspytkirtlen, lige fra de tidligste PanIN faser gennem progression til PDAC3,4 , 5. høst bugspytkirtlen på aldre spænder fra fem til femten måneder kan også bruges til at forberede væv ekstrakter til at karakterisere de globale forandringer i bugspytkirtlen4 metabolisme, der opstår under overgangen fra sund til sygt væv 6,7.
Denne artikel præsenterer en komplet visuel vejledning af de trin, der kræves for at udføre en mus bugspytkirtlen udvinding og indeholder retningslinjer for opbevaring af en bugspytkirtlen for yderligere analyse. Denne guide vil være lige så værdifuld for personer udfører forskning på andre pancreas sygdomme, herunder type I diabetes, og er især nyttigt til studerende og efterforskere nye til forskning, der indebærer høst mus bugspytkirtlen ved brug af dissektion for metabolisk profilering eller histologiske analyser.
Betydning med hensyn til eksisterende metoder
Mens andre uformelle videoer af musen dissektioner findes, denne video artikel giver den første professionelle kvalitet, peer reviewede, visuel demonstration af alle de detaljerede trin påkrævet for udvinding og høst af musen bugspytkirtlen af dissektion10 . Med bugspytkirtlen er en vigtigste organ for metaboliske aktivitet og insulin produktion, dissektion og høst i bugspytkirtlen giver mulighed for bevarelse af den fysiologis…
The authors have nothing to disclose.
MAK anerkender støtte til dette arbejde fra National Institutes of Health / National Cancer Institute giver nummer – 1R15CA152985-01A1. Dette projekt er også blevet støttet af Miami University Undergraduate Research Award Program, Miami University ph.d.-bachelor muligheder for Scholarship Program og Miami University forskere sommerprogram.
Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
Foam Boards | Therapak | 562908 | |
Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |