보호 그룹 산 - 불안정의 보존에 적합한 니켈 쉬프 - 자료의 가수 분해 복잡한 사용 조건
Summary
여기서, 우리는 효율적인 가수 분해 및 니켈 쉬프 염기 착체로부터 분리 아미노산 후속 FMOC 보호를 제시한다. 산해리 측쇄 보호기의 유지가 요구되는 경우 여기 제시된 가수 분해 조건을 사용하기에 적합하다. 이 기술은 천연 아미노산의 다양한 기판에 적용 할 수있다.
Abstract
비 천연 아미노산은 일반적으로 자연에서 보지 측쇄 작용기를 함유하는 아미노산 점점 합성 펩티드 서열에서 발견된다. 몇몇 비 천연 아미노산의 합성은 종종 니켈 양이온에 의해 안정화 쉬프 염기로 이루어지는 전구체의 사용을 포함한다. 비정상적인 측쇄이 쉬프 염기 착체에서 발견되는 아미노산 골격 상에 설치 될 수있다. 생성 된 비 천연 아미노산은 전형적 강산성 용액으로 환류를 이용하여, 쉬프 염기의 복잡한 분리하여 가수 분해 될 수있다. 비 천연 아미노산은 마이크로파를 이용한 고상 펩티드 합성에 사용되는 이러한 강산성 조건 산해리 필요한 측쇄 보호기를 제거 할 수있다. 본 연구에서, 우리는 효율적인 가수 분해 및 니켈 쉬프 염기 착체로부터 분리 아미노산 후속 FMOC 보호를 제시한다. 본 연구에 제시된 가수 분해 조건은 산해리의 유지에 적합IDE 쇄 보호기 및 비 천연 아미노산의 다양한 기판에 적용 할 수있다.
Introduction
자연에서 발견 스물 개 자연적으로 발생하는 아미노산과 다를 자연스러운 아미노산 (UAA의) 베어링 측쇄 응용 프로그램의 넓은 범위에서 유틸리티를 발견했다. 이러한 UAA 년대의 합성 단, 측쇄의 구조 및 아미노산 주쇄의 입체 화학에 따라 어려울 수있다. 니켈 쉬프 염기 착체의 맥락에서 글리신의 크 본드 활성은 α, β 디아 미노 산 1, 2 또는 헤테로 측쇄 플루오르 UAA의 베어링을 포함한 아미노산 유도체의 다양성을 생성하기 위해 사용되었다. 삼
비 천연 측쇄를 첨가 한 후, UAA의 전형적 염산 (4)에 환류하여 쉬프 염기 착체로부터 제거하고,이어서 이온 교환 크로마토 그래피를 사용하여 분리되어 기능화. 일반적으로 효율적이지만,이 프로토콜은 발생고상 펩티드 합성 (SPPS)에서 사용되기에 부적합 할 수있다 미노 산. SPPS의 자연 그대로 이들 보호기의 UAA와의 분리를 방지 산해리 측쇄 보호기의 존재 및 일반적인 니켈 쉬프 염기 분해 조건 강산성 성질을 필요로한다. 우리의 지식으로, 단 하나의 대체 분해 방법이보고되어있다 : 에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA) 및 하이드라진을 사용 승온에서, 그 자체가 몇몇 측쇄는 프탈이 미드로서 보호기에 적합하지 않을 수 5 조건있다.
도 1 : 니켈 2+, PBP, 글리신 (의 Gly)에서 니켈의 Gly-PBP의 합성. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. </A>
여기서 우리는, 니켈의 Gly-PBP (도 1) 니켈 쉬프 염기 착체의 가수 분해하는 방법을보고한다. 니켈 2+, 글리신, 및 피리딘 -2- 카르 복실 산 (2- 벤조일 페닐) – 아마이드 (PBP), 6 유래의이 복합체는 UAA의 다양한 합성에 유용한 플랫폼 증명 용이하다되었습니다 액세스 두 단계의 합성 경로를 사용. 이러한 착체의 합성 문헌 (7) – 이미 기재 고 수율이다. 우리의 결과는 6 이하의 UAA 베어링 산해리 측쇄가 보호기와 사용에 적합한 중성 pH 조건 약산성에서 EDTA를 이용하여 가수 분해 조건의 적용을 보여준다. 가수 분해 후, 생성 된 수성 용액을 분리 할 수 있고 FMOC 보호 된 아미노산을 수득 표준 FMOC 보호 상태 (도 2)에 즉시 실시.
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그림 2 : 가수 분해 및 Ni-PBP-의 Gly에서 고립 된 아미노산의 FMOC 보호. 반응 조건 : 전. EDTA (12 당량), 4.5의 pH; II. pH 7로 세척하고 아세트산 에틸 조정; III. FMOC – 오스 (1 당량)의 NaHCO3 (2 당량). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
Protocol
Representative Results
Discussion
상기 프로토콜은 두 가지 중요한 단계를 중성 pH 조건이 절연 아미노산 후속 FMOC 보호 하에서 니켈 쉬프 염기 착체의 아미노산 골격의 분리를 촉진하는 능력에 유용하다. 첫 번째 단계는 복잡에서 아미노산의 방출을 용이하게하기 위해 EDTA를 함유하는 DMF / 물 용액을 교반 포함한다. 잔류 착체 또는 유기 부산물 쉽게 추출하여 제거 될 수있다. 이 프로토콜의 두 번째 단계에서는 첫 번째 단계에서 ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
미끄러운 바위 대학에서 제공하는 자금. 우리는 그들의 통찰력 T 보론 III (미끄러운 바위 대학)와 C하니 (펜실베니아 대학)에 감사드립니다.
Materials
| Ni-PBP-Gly | Synthesized from published protocol | ||
| DMF | Fisher | D119-4 | |
| EDTA | Fisher | S311-100 | |
| Dichloromethane | Acros | AC610050040 | |
| Sodium Bicarbonate | Fisher | S233-500 | |
| Fmoc-OSu | Chem-Impex | "00147" | |
| Dioxane | Fisher | D111-500 | |
| Hydrochloric Acid | Fisher | A144-500 | |
| Ethyl Acetate | Acros | AC610060040 | |
| Magnesium Sulfate | Fisher | M65-500 | |
| ZEOPrep 60ECO Silica Gel | ZEOChem | ||
| Hexanes | Fisher | 3200250.650.443 | |
| Chromatography Column | |||
| pH Test Strips | |||
| Rotary Evaporator | |||
| 250 mL Separatory Funnel | |||
| 250 mL Round Bottom Flask | |||
| Stir Bar | |||
| Stir Plate |
Referências
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